Инактивированные (убитые) вакцины

Инактивированные вакцины в качестве действующего начала включают убитые хи­мическим или физическим методом культу­ры патогенных бактерий или вирусов (цельноклеточные, цельновирионные вакцины) или же извлеченные из патогенных микробов (иногда вакцинных штаммов) комплексы, содержащие в своем составе протективные антигены (субклеточные, субвирионные вак­цины).

Молекулярные вакцины

В молекулярных вакцинах антиген нахо­дится в молекулярной форме или же в виде фрагментов его молекул, определяющих специ­фичность антигенности, т. е. в виде эпитопов, детерминант. Протективный антиген в виде молекул можно получить биологическим син­тезом в процессе культивирования природных патогенных микробов, например, токсигенных бактерий — дифтерии, столбняка, ботулизма и др.

Требования

Существуют общие требования ко всем вак­цинам. Любой рекомендуемый для вакцина­ции препарат должен быть: иммуногенным, безопасным, нереактогенным, не вызывать аллергических реакций, не обладать тератогенностью, онкогенностью; штаммы, из кото­рых готовят вакцину, должны быть генетичес­ки стабильными, вакцина должна обладать длительным сроком хранения, производство ее должно быть технологичным, а способ применения — по возможности, простым и доступным для массового применения.

Молодой специалист Александр Р., 23 года, при поступлении на пищевое предприятие был направлен на медицинское обследования для получения «медицинской книжки». При отсутствии жалоб у больного обнаружено увеличение печени. Из скрининговых исследований методом ИФА на гепатиты положительной оказалась реакция на гепатит С. Пациент признался, что в 16 лет он вместе с группой подростков несколько раз пробовал наркотики, которые они вводили внутривенно, пользуясь одним шприцом. Пациент был поставлен диагноз «гепатит С, хроническая форма». Какие лабораторные исследования нужно провести для подтвердения диагноза у пациента? Каковы принципы лечения хронического гепатита С?

Ответ: Диагностика. Используются ПЦР и серо­логическое исследование. Подтверждением активного инфекционного процесса является обнаружение в крои вирусной РНК ПЦР. Серологическое исследование направлено на определение антител к NS3 в парных сыво­ротках методом ИФА.

Профилактика и лечение. Для профилакти­ки используют те же мероприятия, что и при гепатите В. Важнейшей и наиболее эф­фективной мерой профилактики гепатита В является исключение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и перелива­ниях крови. Это достигается: а) применением одноразовых шприцев, систем переливания крови, инструментов с последующим, после их использования, регламентированным сбо­ром и уничтожением; б) надежной стерилиза­цией инструментов в централизованных пун­ктах; в) проверкой на гепатит В по наличию HBs-антигена в крови доноров крови, органов и тканей, используемых для трансплантации и искусственного обсеменения; г) учетом всех вирусоносителей в диспансерах и лечением больных гепатитом В в специализированных отделениях инфекционных больниц; д) обя­зательной работой персонала, имеющего дело с кровью, в перчатках. Группу высокого риска заражения гепатитом В составляют хирурги, гинекологи, акушеры, стоматологи, манипуляционные сестры, сотрудники отделений переливания крови, гемодиализа, сотрудники лабораторий и лица, занятые в производстве иммунобиологических препаратов из донорс­кой и плацентарной крови.

Для предотвращения передачи гепатита В половым путем принимают все те же меры, что при ВИЧ-инфекции.

Для лечения применяют интерфе­рон и рибовирин. Специфическая профилак­тика не разработана.

В основе лечения гепатита С лежит интерферонотерапия (интерферон, индукторы интерферона), а также применение противовирусных препаратов. Принципы режима, диеты, патогенетической терапии сходны для всех гепатитов

1. Состав и применение бактериофага стафилококкового

Состав. Препарат представляет собой фильтрат фаголизата стафилококковый, т.е. жидкой среды, в которой содержатся корпускулы живых фагов и элементы лизированных ими стафилококков. Данный препарат стафилококкового бактериофага представляет собой прозрачную жидкость, окрашенную в желтый цвет различной интенсивности. В качестве консерванта добавлен хинозол в качестве 0,01% к объему бактериофага.Выпускается в ампулах по 2 в 10 мл и флаконах по 20 мл.Назначение. Стафилококковый бактериофаг используется для профилактики гнойных инфекций кожи, слизистых висцеральных органов, вызванных стафилококком, для коррекции бактериозов, а также при лечении местных и общих гнойных заболеваний, вызванных стафилококками. С лечебной целью бактериофаг вводят при поражениях кожи в подкожную клетчатку, при хирургических инфекциях, остеомиелитах.Способ применения и дозировка. Методы использования бактериофага с лечебной целью зависят от характера поражения.Применяют наружно в виде ежедневных орошений, полосканий, примочек, повязок, тампонирования в количестве от 5 до 200 мл препарата в зависимости от размеров пораженного участка, а также подкожно, внутрикожно, внутримышечно. При подкожном и внутримышечном введении инъекции бактериофага проводят в возрастающих дозах — 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 и далее по 2 мл. За цикл лечения делают по 5 инъекций, а иногда и до 8. Стафилококковый бактериофаг вводят также в брюшную, плевральную, суставную, мочевого пузыря и другие полости в количестве от30 до 200 мл через день в течение нескольких дней. При кишечных формах заболевания, вызванных стафилококками, и дисбактериозе бактериофаг применяют per os и per rectum при помощи клизмы или путем введения ректальных свечей. Препарат дают 2 раза в сутки натощак за 1,5—2 часа до приема пищи и per rectum — один раз в сутки. Стафилококковый бактериофаг применяют для профилактики в количестве до 50 мл для орошения полостей ран. Реакция на введение. При подкожном, внутрикожном и внутримышечном введении иногда наблюдается местная реакция в виде болезненности, гиперемии, отечности. Общая реакция проявляется с недомоганием, повышением температуры, головной болью, ознобом. Как правило, реакции проходят через несколько дней. Противопоказания отсутствуют. При гнойно-воспалительных заболеваниях уха, горла и носа препарат вводят в полость носа, пазух носа, уха, среднего уха, используют для полоскания рта — доза препарата 2—20 мл, кратность применения 1—З раза в день. При энтероколитах, дисбактериозе бактериофаг применяют перорально в дозе 5—20 мл в течение 10—15 дней, у детей первого года жизни возможно введение препарата в виде высоких клизм в дозе 5—20 мл. При лечении омфалитов, пиодермийноворожденных препарат используют в виде аппликаций, примочек в дозе 5—10 мл ежедневно двукратно. Прививочные реакции. Реакция на введение бактериофага не выявлена. Противопоказания. Противопоказаний нет.

Экзаменационный билет №30

1. Живые вакцины, примеры. Диагностикумы. Получение, применение. Достоинства и недостатки.

Живые вакцины представляют собой пре­параты, в которых действующим началом яв­ляются ослабленные тем или иным способом, потерявшие вирулентность, но сохранившие специфическую антигенность штаммы пато­генных микробов (бактерий, вирусов), полу­чившие название аттенуированных штаммов. Аттенуация (ослабление) возможна путем длительного воздействия на штамм химичес­ких (мутагены) или физических (температу­ра, радиация) факторов или же длительные пассажи через организм невосприимчивых животных или другие биообъекты (эмбрионыптиц, культуры клеток). В результате таких воздействий на культуры патогенных бакте­рий или вирусов селекционируются штаммы со сниженной вирулентностью, но способные при введении в организм человека размно­жаться и вызывать вакцинный процесс (со­здавать специфический иммунитет), не вызы­вая инфекционного заболевания.

Аттенуацию патогенных бактерий с це­лью получения вакцинных штаммов впер­вые предложил J1. Пастер на примере вируса бешенства, холеры кур, бацилл сибирской язвы. В настоящее время этот способ ши­роко используется в вакцинологии. В ка­честве живых вакцин можно использовать дивергентные штаммы, т. е. непатогенные для человека микробы, имеющие общие протективные антигены с патогенными для челове­ка возбудителями инфекционных болезней. Классическим примером дивергентных живых вакцин является вакцина против натуральной оспы человека, в которой используется непа­тогенный для человека вирус оспы коров. Эти два вируса имеют общий протективный анти­ген. К дивергентным вакцинам следует также отнести БЦЖ — вакцину, в которой исполь­зуются родственные в антигенном отношении микобактерии бычьего типа.

В последние годы успешно решается проблема получения живых вакцин генно-инженерным способом. Принцип получения таких вакцин сводится к созданию непатогенных для человека безопасных рекомбинантных штаммов, несу­щих гены протективных антигенов патогенных микробов и способных при введении в организм человека размножаться, синтезировать специ­фический антиген и, таким образом, создавать иммунитет к патогенному возбудителю. Такие вакцины называют векторными. В качестве век торов для создания рекомбинантных штаммов чаще используют вирус осповакцины, непато­генные штаммы сальмонелл и другие микробы. Уже получены экспериментально и проходят клинические испытания рекомбинантные штам­мы осповакцины и сальмонелл, продуцирующие антигены вируса гепатита В, клещевого энцефа­лита, ВИЧ и других патогенных микробов.

Живые вакцины независимо от того, ка­кие штаммы в них включены (аттенуированные, дивергентные или векторные), получают путем культивирования штаммов на искус­ственных питательных средах (бактерии), в культурах клеток или в куриных эмбрионах (вирусы), и из полученных чистых культур вакцинных штаммов конструируют вакцин­ный препарат. В живую вакцину, как пра­вило, включают стабилизатор, не добавляют консервант, вакцину подвергают лиофильно- му высушиванию. Дозируют вакцину числом живых бактерий или вирусов в зависимости от способа применения: накожно, подкожно, внутримышечно, перорально. Обычно живые вакцины применяют однократно с периоди­ческими ревакцинациями.

Диагностикумы — взвеси убитых микробов, которые служат в качестве антигенов при серологических исследованиях и аллергенов для аллергических диагностических проб. Диагностикумы нашли широкое применение при диагностике брюшного тифа, паратифов, дизентерии, бруцеллеза, туляремии, риккетсиозов, лептоспирозов. Они используются также для постановки РСК (реакции связывания комплемента) при серологической диагностике лептоспирозов. Для диагностики брюшного тифа применяют так называемый О-диагностикум (для обнаружения групповых, О-антител) и Н-диагностикум (для обнаружения видовых, Н-антител). Для постановки реакции агглютинации большинство диагностикумов консервируются 0,1—0,2% раствором формалина. Диагностикумы из риккетсий и лептоспир консервируют фенолом. При постановке опсоцо-фаго-цитарной реакции используются диагностикумы из микробов, убитых нагреванием.
В вирусологии в качестве диагностикумов используют антигены для РСК и антигены для РТГ (реакции торможения гемагглютинации).
Вирусные диагностикумы подвергают обработке с целью снижения антикомплементарных свойств — обработка физическими (повторное замораживание и оттаивание) и химическими (воздействие эфира и хлороформа) методами.

Участковый педиатр был вызван к 8-летнему мальчику. Ребенок болен 2-й день. Заболел внезапно, резко поднялась температура (38,5), появилась резкая головная боль, мышечные боли, слабость. На следующий день присоединился сухой кашель, першение в горле. Аппетит отсутствует. В его классе болеет несколько детей. Врач поставил диагноз «ОРВИ, возможно грипп». Какие методы следует использовать для уточнения диагноза? Опишите этапы вирусологического метода. С какой целью его применяют? В чем заключается экстренная профилактика гриппа, когда ее следует проводить ?

Ответ: Диагноз «грипп» базируется на (1) выделении и иден­тификации вируса, (2) определении вирусных АГ в клетках больного, (3) поиске вирусоспецифических антител в сыворотке больно­го. При отборе материала для исследования важно получить пораженные вирусом клетки, так как именно в них происходит репликация вирусов. Материал для исследования — но­соглоточное отделяемое, которое берут там­понами или отсасывают с задней стенки глот­ки и носа в первые три дня болезни. Иногда исследуют мазки-отпечатки со слизистой но­са. Возможно постмортальное исследование аутопсийного материала (кусочки поражен­ной легочной ткани, соскобы со слизистой бронхов и трахеи). Материал доставляют в лабораторию, поместив в специальные рас­творы для сохранения жизнеспособности ин­фицированных вирусом клеток. Вирус гриппа теряет свою инфицирующую активность при температурах от —1 до — 20 °С, поэтому мате­риал либо хранят при +4 °С, если исследова­ние планируется в ближайшие 1—2 дня после взятия материала, либо замораживают при температуре ниже —50 °С, если исследование будет проводиться в более поздние сроки. Для определения антител исследуют парные сыворотки крови больного.

Вирусологическое исследование. Исследуемый материал по­мещают в транспортную среду, содержащую антимикробные препараты широкого спектра действия для уничтожения сопут­ствующей бактериальной флоры. Затем материал центрифуги­руют. Для выделения чистой культуры производят заражение культур клеток надосадочной жидкостью. В зависимости от предполагаемого возбудителя используют разные типы клеточ­ных культур: клетки человека (первичные культуры эмбрио­нальных клеток, диплоидные линии фибробластов, перевивае­мые клеточные линии HeLa, НЕр-2 и др.) или животных (пер­вичные культуры клеток почки обезьян, линии мышиных фиб­робластов и др.). Культивирование респираторных вирусов мо­жет занимать от 2—3 до 20 сут и более в зависимости от природы возбудителя. Так, выделение аденовирусов занимает в среднем 6 сут, риновирусов — 4—5 сут, вируса гриппа — 3—4 суг, реовирусов — около 3 нед. Индикацию вирусов про­изводят по ЦПД, Для индикации гемагглютинирующих виру­сов (грипп, парагрипп) может быть использована реакция гем- адсорбции (см. тему 5.2), которая становится положительной еще до появления ЦПД. Идентификацию респираторных ви­русов осуществляют по их антигенной структуре с помощью иммунологических методов [иммунофлюоресценция, РТГА, РСК, реакция нейтрализации (РН), ИФА и др.]. Эти же реак­ции используют для типирования выделенных вирусов. При­меняют также биохимические (анализ фрагментов вирусных НК методом электрофореза) и молекулярно-биологические ме­тоды идентификации (ПЦР, метод нуклеиновых зондов).

Вирусологическое исследование не применяется для диа­гностики заболеваний, вызванных коронавирусами и PCB, в связи со сложностью их культивирования.

В ряде случаев для выделения вируса гриппа используют куриные эмбрионы. Наличие вирусов гриппа в амниотической или аллантоисной жидкости устанавливают с помощью РГА (см. тему 5.2). Вирусы гриппа А хорошо агглютинируют эрит­роциты курицы, морской свинки, человека с группой крови 1(0), вирусы гриппа В — эритроциты курицы. Этот метод по­зволяет также установить титр вируса.

Идентификацию и типирование выделенной чистой культу­ры вируса гриппа осуществляют на основании антигенной структуры с помощью серологических реакций. Тип вируса (А, В или С) определяют в РСК. Подтипы вируса гриппа А по Н- и N-анти генам (H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 и др.) - в реакциях с набором типоспецифических сывороток к гемаг- глютинину и нейраминидаэе (см. табл. 10.1.2 и 10.1.3). Иден­тификацию по Н-антигену проводят в РТГА, результаты реак­ции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Для опреде­ления N-антигена применяют реакцию ингибиции нейрамини- дазы и реакцию иммунопреципитации в геле. Результаты РТГА (рис, 18.1.1; на вклейке), приведенные в табл. 10.1,3, свиде­тельствуют, что гемагглютинируюшая активность исследуемого вируса нейтрализуется типоспецифической сывороткой N3H2 в разведениях 1:10—1:160 (до ее титра), т.е. исследуемый вирус относится к подтипу N3H2.