Лабораторная диагностика эшерихиозов.

Основной метод – бактериологический. Исследуемый материал (испражнения, рвотные массы, мочу, кровь, пищевые продукты, отделяемое носа, зева, уха и т. д.) засевают на среды Эндо, Левина, Плоскирева. Выделенные культуры сероидентифицируют.

Для этого с окрашенными колониями (в количестве не менее 10) ставят реакцию агглютинации на стекле с поливалентными эшерихиозными ОК сыворотками (или со смесью не более пяти ОК сывороток) для дифференциации ЭПЭ от других эшерихий.

Культуры, давшие положительную РА с поливалентной эшерихиозной сывороткой проверяют в РА на стекле с каждой типовой сывороткой.

При положительном результате с одной из них ставят развернутую РА с этой сывороткой и с живой (определение К-антигена) и гретой при 100ºС 1 час (определение О-антигена) культурой. Сыворотку разводят до титра.

РА считается положительной, если с гретой культурой отмечается агглютинация в разведении сыворотки не ниже ½ ее титра, а живая культура агглютинируется сывороткой, разведенной не менее чем 1:200.

Параллельно с изучением антигенной структуры (в реакциях агглютинации) у подозрительных колоний проверяют биохимические свойства путем посева на среды Гисса (сахаролитические свойства) и на МПБ (для изучения протеолитических свойств).

По комплексу изученных признаков устанавливают вид и серотип возбудителя.

В ряде лабораторий применяют люминисцентно-серологический метод исследования с использованием иммунофлюоресцирующих сывороток, позволяющих получить предварительный ответ через 1-2 часа после начала исследования.

Вспомогательный метод – серологический:ставят РНГА (реакцию непрямой гемагглютинации) с сывороткой больного, начиная с 3-5 дня болезни, изучают нарастание титра антител в динамике заболевания.

Лечение. Применяют химиотерапевтические средства: фуразолидон, энтеросептол, интестопан, мексаформ, мексазу; антибиотики: ампициллин, аминогликозиды, цефалоспорин, левомицетин, полимиксин,тетрациклин. Хороший результат дает колипротенный фаг.

Для устранения кишечного дисбактериоза применяют колибактерин, бифидумбактерин, лактобактерин, бификол и другие эубиотики.

Профилактика:санитарно-гигиенические мероприятия направлены на разрыв эпидемической цепи. Специфическая профилактика отсутствует.

ЛЕКЦИЯ №2

Возбудители бактериальной дизентерии и холеры. Способы заражения, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение и профилактика.

Бактериальная дизентерия- инфекционное антропонозное заболевание с поражением толстой кишки и общей интоксикацией

Токсономия

Возбудителями дизентерии относятся к роду Shigella (названного в честь японского ученого К. Шиги, который открыл одного из возбудителей дизентерии), к семейству Enterobacteriaceae, отделу Gracilicutes. Различают 4 вида возбудителей: Shigella dysenteriaе, Sh. flexneri, Sh. boydii, Sh. sonnei. Первые 3 вида разделены на серовары (Sh. flexneri, кроме того - на подсеровары), а Sh. sonnei - на биовары, т. е. каждый из видов шигелл неоднороден.

Характеристика возбудителей дизентерии

Морфологические и тинкториальные свойства.

Шигеллы - мелкие палочки с закругленными концами 2-3 х 0,5-0,7 мкм без жгутиков (неподвижны) и капсул (некоторые штаммы обладают микрокапсулой), не образуют спор, на поверхности имеют ворсинки общего типа (выполняющие роль адгезинов - структур, обеспечивающих прикрепление бактерии к эпителиоцитам кишечника) и половые пили. Грамотрицательны.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы, не требовательны к питательным средам. Хорошо растут на простых питательных средах, образуя на плотных средах мелкие прозрачные колонии, на жидких - диффузное помутнение.

На элективной и дифференциально-диагностической среде Плоскирева, (а также среде Эндо) растут в виде мелких бесцветных прозрачных колоний (т. к. не ферментируют лактозу, содержащуюся в этих средах).

Биохимические свойства.

Ферментативная активность выражена слабо. Углеводы ферментируют с образованием кислоты, без газа. Не ферментируют лактозу и сахарозу (только шигеллы Зонне не ранее 2-3-го дня расщепляют эти сахара), не гидролизуют мочевину, не разжижают желатин, не образуют H2S. Образование индола вариабельно

Оксидаза-отрицательные

Каталаза-положительные

Важным дифференциальным признаком шигелл является их отношение к манниту: Sh. dysenteriaе маннитотрицательны (не ферментируют маннит), остальные - ферментируют маннит.

Антигенная структура.

Шигеллы имеют О-соматический антиген. Этот антиген неоднороден, что позволяет выделить внутри видов серовары и подсеровары. У некоторых представителей рода обнаружен К-антиген.

Установление антигенной структуры используется при идентификации шигелл.

Резистентность во внешней среде невелика и неодинакова: наименее устойчивы Sh. dysenteriaе, самые устойчивые Sh. sonnei. К низким температурам шигеллы устойчивы, в речной воде сохраняются до 3 месяцев. В пищевых продуктах Sh. sonnei способны не только сохраняться, но и размножаться (особенно в молочных). Температура 100°С убивает шигелл мгновенно. Ультрафиолетовые лучи, прямые солнечные лучи убивают их за 10 минут. В фекалиях шигеллы сохраняют жизнеспособность не дольше 6-10 часов (их губят микробы-антагонисты). Не выдерживают высушивания. Общеупотребительные концентрации дезинфицирующих растворов губят их через 20-30 минут.

Факторы патогенности.

Все шигеллы образуют эндотоксин с энтеротропным, нейротропным, пирогенным действием (т. е. действие токсина направлено на кишечник, нервную систему и вызывает повышение температуры). Кроме того Sh. dysenteriaе первого серовара (Григорьева-Шига) и некоторые другие виды шигелл выделяют экзотоксин с энтеротоксическим, нейротоксическим и цитотоксическим действием, что проявляется соответственно в нарушении водно-солевого обмена, деятельности ЦНС и гибели эпителиоцитов толстой кишки. С образованием экзотоксина связано более тяжелое течение дизентерии. Факторами патогенности являются также адгезины, способствующие колонизации слизистой оболочки и проникновению шигелл внутрь энтероцитов. RF-фактор вызывает поражение кровеносных сосудов.

Патогенность для животных.

Дизентерия - антропонозная инфекция. В естественных условиях могут болеть обезьяны. Экспериментальное заражение кроликов и белых мышей вызывает у них интоксикацию и гибель.

Эпидемиология.

Источник инфекции - больные, реконвалесценты и бактерионосители. Механизмпередачи - фекально-оральный. Главным путем передачи при дизентерии Григорьева-Шига является контактно-бытовой, Флекснера - водный, Зонне - пищевой. Естественная восприимчивость людей высокая. Болеют люди всех возрастов, но чаще дети от 1 года до 3 лет.

Патогенез.

Шигеллы попадают в организм через рот. Под влиянием пищеварительных соков, низкой pH среды желудка, секреторных иммуноглобулинов, антагонистического влияния кишечной микрофлоры часть шигелл погибает.Высвобождающийся при этом эндотоксин, всасывается во внутреннюю среду организма и обуславливает первые признаки заболевания (озноб, лихорадка).

Бактерии, преодолевшие все барьеры, достигают толстой кишки и, благодаря адгезинам, прикрепляются к гликокаликсу кишечных эпителиоцитов, проявляя цитотоксичность. В результате клетки разрушаются. Освободившиеся из клеток шигеллы подвергаются фагоцитозу с образованием токсических субстанций, оказывающих местное и системное повреждающее действие. В стенке кишечника образуются изъязвления (в дальнейшем рубцующиеся).

Энтеротоксин шигелл, по механизму действия напоминающий холероген, вызывает повышение проницаемости стенки кишки, накопление жидкости и электролитов в ее просвете, что приводит к диарее.

Токсины шигелл нарушают все виды обмена (белковый, липоидный, углеводный, водный, минеральный, витаминный и др.), делают проницаемыми и ломкими кровеносные сосуды, поражая сосудистую и нервную системы.

Клиника

Инкубационный период 1-7 (чаще 2-3) дней. По клиническому течению дизентерия подразделяется на острую (длится от нескольких дней до 3 месяцев) и хроническую (свыше 3 месяцев). Острая дизентерия может протекать в легкой, среднетяжелой, тяжелой, очень тяжелой, стертой форме.

Чаще заболевание протекает в острой форме и на современном этапе характеризуется относительно легким течением. Наиболее тяжело протекает дизентерия, вызванная шигеллами Григорьева-Шига; относительно тяжело - дизентерия Флекснера и Ньюкестла, наиболее легко - дизентерия Зонне.

Заболевание начинается остро, внезапно, с болей внизу живота, частого жидкого стула, иногда - рвоты. Стул от 3-5 до 25 раз в сутки с примесью слизи, иногда крови. Температура в зависимости от течения заболевания может быть субфебрильной, высокой (38-40°С) или нормальной.

В разгар заболевания стул может терять каловый характер и иметь вид ректального плевка (скудное количество слизи с прожилками крови), сопровождаясь при этом болезненными тенезмами (тянущие боли в области прямой кишки) и ложными позывами к дефекации.

Очень рано поражается нервная система, что проявляется в слабости, головной боли, апатии, расстройстве сна.

При средне-тяжелом и тяжелом течении острой дизентерии страдает сердечно-сосудистая система: у больных отмечается тахикардия (частый пульс), падение артериального давления, одышка, цианоз.

Иммунитет.

Видо- и типоспецифичен; непродолжителен, непрочен.

Лабораторная диагностика.

Основным в лабораторной диагностике дизентерии является бактериологический метод, выполнение которого требует соблюдения ряда условий:

1. Правильное взятие испражнений - лучше всего с помощью ректальных трубок с последующим помещением их в консервирующую жидкость (30% глицерина и 70% изотонического раствора NaCl), т. к. при взятии фекалий из судна, обработанного дезинфицирующим раствором, высеваемость шигелл снижается.

2. Необходимо проводить посев в первые часы после взятия испражнений, т. к. на шигеллы губительно действует гнилостная кишечная микрофлора.

3. Обязателен посев на элективную среду Плоскирева, т. к. эта среда способствует росту шигелл и подавляет сопутствующую флору.

4. Необходимо исследования проводить повторно, т. к. высеваемость шигелл даже при клинически выраженной форме дизентерии недостаточно высока (60%).

Исследуемый материал (фекалии больного) засевают на среду Плоскирева. Бесцветные прозрачные колонии, выросшие на этой среде, используют для получения чистых культур. Их идентифицируют (с учетом морфологических, тинкториальных, культуральных свойств) по биохимическим свойствам: сахаролитическим (путем посева в среды Гисса) и протеолитическим (по способности образовывать индол), а также по антигенной структуре (с помощью реакции агглютинации со специфическими агглютинирующими сыворотками, сначала со смесями дизентерийных сывороток, а затем с видовыми и типовыми сыворотками). Для подтверждения положительного результата проводят дополнительное исследование с поливалентным дизентерийным бактериофагом (наличие лизиса подтверждает природу возбудителя).

При затяжном течении дизентерии, стертых формах как вспомогательный метод используется серодиагностика - постановка реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с эритроцитарными диагностикумами Флекснера и Зонне. Диагностическим титром при дизентерии Флекснера считается 1:200, а при дизентерии Зонне 1:100 при условии нарастания титра при повтором исследовании (через 7-10 дней).

В качестве экспресс-диагностики используется иммунофлюоресцентный метод, основанный на обнаружении свечения комплекса антиген-антитело при микроскопии мазков из испражнений или выделенных от больного колоний микробов, обработанных меченной флюорохромами специфической сывороткой.

Определенную помощь в диагностике дизентерии оказывает кожно-аллергическая проба с дизентерином (аллергеном), а также использование методов аллергодиагностики in vitro (реакции иммунолейкоцитолиза, иммунолейкергии со специфическим дизентерийным аллергеном).

Лечение.

При тяжелых формах дизентерии применяют антибиотики (тетрациклины, левомицетин, ампициллин). Антибиотики применяют осторожно из-за возможности развития дисбактериоза с обязательным учетом антибиотикограммы. При легких и средне-тяжелыхформах дизентерии используют нитрофурановые препараты (фуразолидон, фурадонин, фурагин), производные 8-оксихинолина (энтеросептол, интестопан, мексаформ, мексаза), сульфаниламиды.

Для устранения кишечного дисбактериоза, сопровождающего дизентерию, предупреждения рецидивов и формирования хронической дизентерии применяются колибактерин, бифидумбактерии, бификол, лактобактерии и др., эубиотики.

Для лечения хронических форм дизентерии применяется дизентерийная вакцина спиртовая сухая.

С лечебно-профилактической целью используется дизентерийный бактериофаг с кислотоустойчивым покрытием.

Профилактика.

Вакцинация населения не проводится в связи с отсутствием эффективных прививочных материалов.

В очагах инфекции может быть использован дизентерийный бактериофаг.

Неспецифическая профилактика включает комплекс лечебно- профилактических, санитарно-гигиенических и противоэпидемических мероприятий.

Возбудители холеры.

Холера – острая кишечная антропонозная особо опасная карантинная инфекция.