Серологическая диагностика сифилиса
Проводится с помощью постановки ряда реакций: неспецифических и специфических.
Неспецифические реакции. Серологическую диагностику следует проводить комплексно (КСР). В комплекс серологических рекций входят: реакция Вассермана с кардиолипиновым и трепонемным антигенами и микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном. При резко положительном результате реакций определяется титр реагинов. Реакция Вассермана основана на феномене "связывания комплемента", открытом в 1901 г. Борде и Жангу. Результаты реакции оценивают по степени выраженности гемолиза. Полное отсутствие гемолиза (4+) - резко положительный результат, едва начавшийся гемолиз (3+) - положительный результат, значительный гемолиз (2+) - слабоположительный результат, (1+) - сомнительный, полный гемолиз-отрицательный результат реакций Вассермана (РВ).
Кроме качественной оценки реакции Вассермана, проводится количественная ее постановка с разведениями сыворотки. Титр реагинов определяется максимальным разведением сыворотки, при котором определяется резко положительный результат (4+). Согласно приказа МЗ РФ № 97 в настоящее время РВ заменяется микрореакцией преципитеции и двумя специфическими реакциями (ИФА, РИФ, РПГА).
Реакция Вассермана является неспецифической, поэтому она может быть положительной у больных лепрой, туберкулезом, малярией, после принятия алкоголя, жирной пищи, у женщин на последнем месяце беременности и в течение 2-х недель после родов, при системных и онкозаболеваниях.
Специфические реакции на сифилис РИБТ, РИФ, ИФА, РИГА
РИБТ основана на феномене обездвиживания бледных трепонем в присутствии иммобилизинов испытуемой сыворотки и активного комплемента. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь бледных трепонем, полученных из тканей сифилитического орхита кролика. Реакцию ставят в условиях анаэробиоза. Бледные трепонемы после добавления к ним сыворотки больного прекращают движение, т.е. происходит их иммобилизация. Результаты реакции оценивают в процентах: положительная РИБТ при иммобилизации от 51 до 100 % бледных трепонем, слабоположительная - от 31 до 50 %, сомнительная - от 21 до 30 % и отрицательная - от 0 до 20 %. Основное назначение РИБТ -распознавание ложноположительных результатов при постановке КСР.
РИБТ становится положительной позже, чем КСР и РИФ. РИБТ является наиболее специфичной из существующих реакций на сифилис.
РИФ - реакция иммунофлюоресценции, более чувствительная, чем РИБТ, становится положительной уже в первичном серонегативном периоде сифилиса. Принцип реакции заключается в том, что специфический антиген (бледная трепонема штамма Никольса, полученная из орхита кролика, высушенная на предметном стекле и зафиксированная ацетоном) обрабатывается сывороткой крови больного и антивидовой флюоресцирующей сывороткой (кроличья лю-минесцирующая сыворотка против глобулинов человека). Флюоресцирующий комплекс в случае положительного результата может быть идентифицирован методом люминесцентной микроскопии. Степень свечения оценивается плюсами. Положительной реакция считается при 4+, 3+, 2+. При степени свечения 1+ и его отсутствии реакция считается отрицательной.
ИФА (иммуноферментный анализ). Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с антителом испытуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса антиген - антитело с помощью антивидовой иммуной сыворотки, меченной ферментом. Чувствительность и специфичность ИФА аналогичны РИФ.
РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) является одним их чувствительных и специфических тестов для выявления больных сифилисом. Принцип метода заключается в том, что при соединении сыворотки крови содержащей специфические антитела с эритроцитами, сенсибилизированными соответствующим интигеном, наблюдается их характерная агглютинация.
Экспресс-реакции на сифилис
Реакция Максимова - осадочная реакция с каплей крови. Ориентировочная, доступная реакция. Для ее проведения у больного берут каплю крови из пальца, наносят на предметное стекло, добавляют 1-2 капли 0,75 % раствора лимоннокислого натрия, перемешивают стеклянной палочкой и добавляют 1-2 капли готового разведенного по титру кардиолипинового антигена. Результат определяют через 20 минут. В положительных случаях видны белые хлопья, в отрицательных - они отсутствуют. Реакция предложена профессором Максимовым Г. С. бывшим заведующим кафедрой дерматовенерологии БГМИ.