Дифференциально-диагностические признаки некоторых видов стафилококков

Специальная бактериология

Бактериальные инфекции продолжают оставаться актуальными и в настоящее время. Инфекционные заболевания, вызванные патогенными бактериями, широко распространены во всем мире.

Разнообразие патогенных бактерий обусловлено их биологическими особенностями, факторами патогенности и антигенной структурой. От вида возбудителя зависит специфичность инфекционного процесса и иммунный ответ макроорганизма.

Знание факторов патогенности бактерий и патогенеза заболевания приводит к пониманию клинических проявлений в виде специфических симптомов или синдромов.

Неснижающаяся заболеваемость бактериальными инфекциями диктует необходимость их дальнейшего изучения, тщательного лабораторного исследования, применения этиотропной и специфической терапии в их лечении, использование мер неспецифической и специфической профилактики бактериальных заболеваний.

Студент должен знать:

1. Особенности морфологии изучаемых возбудителей, их культуральные, антигенные и биохимические свойства.

2. Факторы патогенности изучаемых возбудителей и особенности патогенеза заболеваний, вызванных ими.

3. Основные и специфические клинические симптомы заболевания.

4. Методы лабораторной диагностики, направленные на выделение из исследуемого материала возбудителя или его антигенов, экспресс-методы.

5. Серологический метод лабораторной диагностики для выявления антител к данному возбудителю заболевания.

6. Аллергологический метод диагностики.

7. Генетический метод.

8.Направленность лечения при бактериальных заболеваниях (этиотроп-ное/антибактериальное, антитоксическое, иммунотерапия).

9. Методы неспецифической и специфической профилактики.

Студент должен уметь:

1. Выделить основные симптомы заболевания, обусловленные факторами патогенности возбудителя и периодами развития заболевания.

2. Правильно выбрать биологический материал для проведения лабораторного исследования, исходя из локализации предполагаемого возбудителя на определённом этапе болезни.

3. Идентифицировать выделенные культуры микроорганизмов по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим и антигенным свойствам, чувствительности к фагам;

4. Оценить результаты определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

5. Интерпретировать результаты серологических реакций (РА, РП, РСК, РИФ, ИФА, ИБ);

6. Оценить результаты постановки ПЦР, МГ.

Дата__________________

Занятие 1

Тема: Патогенные грамотрицательные кокки: менингококки и гонококки. Лабораторная диагностика гонореи, бленнореи и менингококковой инфекции.

СРС: Гемофильные бактерии, их свойства. Патогенез заболеваний, вызванных ими. Лабораторная диагностика заболеваний, вызываемых Н. influenzae.

Вопросы для обсуждения:

1. Морфологические и тинкториальные свойства гонококков и менингококков.

2. Факторы патогенности гонококков и патогенез гонореи и бленнореи.

3. Лабораторная диагностика острой и хронической гонореи.

4. Антигенная структура менингококков.

5. Факторы патогенности менингококков и патогенез менингококковой инфекции, ее клинические формы.

6. Лабораторная диагностика менингококковой инфекции.

7. Специфическая профилактика менингококковой инфекции.

Практические задания:

1. Бактериоскопическое исследование:

Окрасить по Граму, Леффлеру и промикроскопировать мазки, приготовленные из отделяемого уретры больного гонореей, препарат зарисовать.

Рис. 1. Гонококки в гнойном отделяемом уретры (незавершенный фагоцитоз). Окраска по Леффлеру

2. Бактериологическое исследование:

1) изучить рост менингококка на сывороточной среде с ристомицином;

2) определить цитохромоксидазную активность менингококка с помощью свежеприготовленного реактива: 1% раствор солянокислого парадиэтилфенилендиамина;

3) учесть ферментативные свойства нейссерий в средах Гисса, сравнить их с данными таблицы и зарисовать.

Таблица

Основные дифференциально-диагностические признаки некоторых видов нейссерий

Вид	Рост на МПА	Потребность в СО2	Желтый пигмент	Ферментация до кислоты
глюкозы	мальтозы	сахарозы
N. gonorrhoeae	-	+	-	+	-	-
N. meningitidis	-	+	-	+	+	-
N. flava	+	-	+	-	-	-
N. mucosa	+	-	+/-	+	+	+

3. Серологическое исследование: произвести учет РСК с парными сыворотками крови больного с подозрением на хроническую гонорею, зарисовать.

1-я сыворотка крови
2-я сыворотка крови
	1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 Ксыв Каг

Вывод:___________________________________________________________

4. Перечислить факторы патогенности:

менингококка гонококка

_______________________________|___________________________________________________________________|___________________________________________________________________|___________________________________________________________________|___________________________________________________________________|___________________________________________________________________|____________________________________

5. Дорисовать схему лабораторной диагностики менингококковой инфекции

Исследуемый материал:
1 этап	Окраска по ________________
2 этап
3 этап	Учет биохимических свойств м/о и идентификация микробного вида	Тест на оксидазу Тест на каталазу
Определение серогруппы и серовара менингококка: ИЭФ, РА, ИФА

6. Дорисовать схему лабораторной диагностики гонококковой инфекции.

Исследуемый материал:   1 этап	Прямая РИФ	Серологический метод РСК 1:10 1:320 Кс Каг
2 этап
3 этап	Учет биохимических свойств м/о и идентификация микробного вида	Тест на оксидазу , тест на каталазу

7. Изучить лечебные, профилактические и диагностические препараты (антибиотики, продигиозан, вакцины, диагностические менингококковые сыворотки, диагностические тест-системы для ИФА).

8. Дать характеристику менингококковой вакцине ________________________

____________________________________________________________________

____________________________________________________________________

СРС. Гемофильные бактерии, свойства. Патогенез заболеваний, вызванных ими. Лабораторная диагностика.

1. Морфология и физиология Haemophilus influenzae. 2. Факторы патогенности Haemophilus influenzae. 3. Патогенез и клинические проявления вызываемых им заболеваний. 4. Роль Haemophilus influenzae серотипа «b» в этиологии менингита, пневмонии, эпиглотита, септицемии и других заболеваний у детей в возрасте от 2-х мес. до 6-ти лет. 5. Лабораторная диагностика гемофильной инфекции 6. Специфическая профилактика гемофильной инфекции.

Тема реферата:

Haemophilus influenzae как этиологический фактор пневмонии, менингитов, эпиглотита, септицемий у детей.

Подпись преподавателя _________________

Дата__________________

Занятие 2

Тема: Патогенные стафилококки и стрептококки. Лабораторная диагностика стафилококковой и стрептококковой инфекций.

Вопросы для обсуждения:

1. Морфологические особенности стафилококков и стрептококков в чистой культуре и в мазках из гноя.

2. Факторы патогенности стафилококков и патогенез заболеваний стафилококковой этиологии.

3. Лабораторная диагностика стафилококковой инфекции.

4. Роль стрептококков в этиологии нагноительных и ненагноительных (ревматизм, скарлатина и др.) заболеваний. Антигенная структура стрептококков.

5. Факторы патогенности стрептококков

6. Иммунитет при стрептококковых заболеваниях.

6. Лабораторная диагностика стрептококковой инфекций.

7. Дифференциальные признаки, позволяющие определить видовую принадлежность стафилококка и стрептококка.

Практические задания:

I . Бактериоскопическое и бактериологическое исследование гноя.

1. Промикроскопировать окрашенные по Граму мазки, приготовленные из гноя, и сравнить с препаратом из чистой культуры Staphylococcus aureus.

	Рис. 1. Грамположительные кокки в препарате из гноя. Окраска по Граму
	Рис. 2. Staphylococcus aureus в препарате из чистой культуры. Окраска по Граму

2. Изучить колонии стафилококка на кровяном агаре.

Рис. 3. Колониии Staphylococcus aureus на кровяном агаре

3. Произвести идентификацию выделенной на скошенном мясо-пептонном агаре чистой культуры стафилококка:

а) изучить ферментативные свойства, сравнить полученные результаты с данными таблицы 1.

Таблица 1

Таблица 2

Занятие 3

Тема: Эшерихии. Патогенные группы. Лабораторная диагностика эшерихиозов. Шигеллы. Лабораторная диагностика дизентерии.

СРС: Хеликобактерии, свойства, факторы патогенности. Патогенез поражений слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, вызываемых Helicobacter pylori. Лабораторная диагностика хеликобактериозов.

Вопросы для обсуждения:

1. Характеристика семейства энтеробактерий.

2. Дифференциально-диагностические среды для энтеробактерий: Эндо, Плоскирева,

Олькеницкого и др.

3. Характеристика свойств эшерихий.

4. Патогенные группы эшерихий: факторы патогенности и вызываемые ими заболевания.

5. Ключевые признаки, применяемые при идентификации эшерихий.

6. Классификация шигелл.

7. Факторы патогенности шигелл и патогенез дизентерии.

8. Ключевые признаки в определении вида шигелл.

9. Профилактика дизентерии и эшерихиозов.

Практические задания:

А. Изучить дифференциально-диагностические среды для бактерий кишечной группы: Эндо, Плоскирева, Олькеницкого.

Среда Эндо - _________________________________________________________

Среда Плоскирева - ___________________________________________________

______________________________________________________________________

Среда Олькеницкого - _________________________________________________

___________________________________________________________________________________________________________________________

Б. Лабораторная диагностика колиэнтеритов и дизентерии.

I. Бактериологическое исследование испражнений больного колиэнтеритом.

1. Изучить колонии эшерихий на среде Эндо, сделать вывод.

2. Поставить реакцию агглютинации на стекле отобранных колоний эшерихий со смесью ОК(ОВ) коли-сывороток (О26:В6; О55:В5; О86:В7; О111:В4).

3. Изучить биохимические свойства на среде Олькеницкого культуры эшерихий, полученной из колонии, агглютинирующейся смесью диагностических сывороток, дать предварительное заключение.

Глюкоза____________ ________________ Лактоза ____________ ________________ Н2S _____________ ________________

_____________________

4. Поставить реакцию агглютинации на стекле с выделенной культурой эшерихий с каждой из сывороток, входящих в состав смеси (О26:В6; О55:В5; О86:В7; О111:В4). Полученные результаты записать.

__________________ ___________________ __________________

5. Произвести учёт развёрнутой реакции агглютинации живой и кипяченой исследуемой культуры с ОК-сывороткой, отобранной исходя из полученных результатов реакции агглютинации на стекле (пункт 4). Полученные результаты записать.

Живая культура							Титр реакции 1:___________ Титр аггл. сыворотки______
Кипяченая культура							Титр реакции 2: __________ Титр аггл. сыворотки______

Вывод: ____________________________________________________________

Заключение: из испражнений больного выделена E. сoli О______: К _____

Определить по табл. 1 к какой диареегенной группе эшерихий относится выделенная из испражнений больного культура.

Таблица 1

Серовары E. сoli, вызывающие кишечные и внекишечные заболевания

Кишечные инфекции	Инфекции мочевого тракта	Бактериемия	Менингит
ЭТКП (ЕТЕС)	ЭПКП (ЕРЕС)	ЭИКП (EIEC)	ЭГКП (EHEC)
О6 О8 О15 О20 О25 О27 О63 О78 О80 О85 О114 О115 О123ac О148 О153 О159 О167	О18 О26 О44 О55 О86 О111 О14 О119 О125 О126 О127 О128ab О142 О153	О28 О29 О112 О124 О136 О143 О152 О164 О167	О157 О117 О113 О111ab О55 О26	О1 О2 О4 О6 О7 О8 О9 О11 О18 О22 О25 О62 О75	О1 О2 О4 О6 О7 О8 О11 О18 О22 О25 О75	О1 О6 О7 О16 О18 О83
ЭАКП О3 О15 О44 О86 О77 О111 О127

6. Демонстрация результатов колицинотипирования и колициногенотипирования эшерихий.

7. Дорисовать схему лабораторной диагностики эшерихиозов.

Исследуемый

материал:

1 этап	Среда Эндо
	РА со смесью ОК(-ОВ) коли- сывороток
2 этап	Среда Олькеницкого		Глюкоза____________ Лактоза ____________ Н2S ____________
3 этап	РА с каждой коли-сывороткой, входящей в состав смеси…………..

8. Перечислить факторы патогенности следующих групп эшерихий:

ЭПКП(ЕРЕС): ___________________________________________________________

______________________________________________________________________

ЭТКП(ETEC): ____________________________________________________________

______________________________________________________________________

ЭИКП(EIEC): ____________________________________________________________

______________________________________________________________________

ЭГКП(EHEC): ____________________________________________________________

____________________________________________________________________

ЭАКП(ЕАЕС):________________________________________________________

II. Бактериологическое исследование испражнений больного дизентерией.

1. Выявить лактозоотрицательные колонии на среде Плоскирева, образовавшиеся после посева испражнений.

2. Определить биохимические свойства выделенной культуры на среде Олькеницкого, дать предварительное заключение.

Глюкоза____________ Лактоза ____________ Н2S ____________

_____________________

3. Изучить биохимические свойства шигелл в средах Гисса (демонстрация) и выделенной из испражнений больного культуры, сравнить их с данными таблицы 2, дать предварительное заключение.

Таблица 2

Таблица 3

Занятие 4

Тема: Сальмонеллы брюшного тифа, паратифов и гастроэнтеритов. Лабораторная диагностика сальмонеллезов.

СРС: Легионеллы – возбудитель болезни легионеров. Лабораторная диагностика и профилактика болезни легионеров.

Вопросы для обсуждения:

1. Классификация сальмонелл. Ключевые признаки в идентификации сальмонелл.

2. Факторы патогенности сальмонелл брюшного тифа и патогенез болезни.

3. Этапность лабораторной диагностики брюшного тифа в динамике болезни.

4. Факторы патогенности сальмонелл – возбудителей гастроэнтерита.

5. Лабораторная диагностика сальмонеллезных гастроэнтеритов.

6. Профилактика брюшного тифа, паратифов и сальмонеллезных гастроэнтеритов.

Практические задания:

I. Бактериологическое исследование крови больного.

1. Изучить результат культивирования посева крови в 10% желчном бульоне, отметить изменения в среде.

2. Произвести учет роста гемокультуры на среде Эндо, дать характеристику колониям.

3. Определить ферментативные свойства выделенной гемокультуры в среде Олькеницкого, дать предварительное заключение.

Глюкоза _______________ Лактоза _______________ Н2S ______________

_______________ _______________ _______________

4. Изучить биохимические свойства сальмонелл в средах Гисса (демонстрация) и сравнить их с представленными данными в таблице 1.

Таблица 1

Таблица 2

Занятие 5

Тема: Возбудители некоторых особо опасных бактериальных инфекций (чума, холера, сибирская язва).

СРС: Франциселлы. Возбудитель туляремии. Патогенез заболевания. Лабораторная диагностика. Профилактика.

Бруцеллы. Характеристика их свойств. Патогенез бруцеллеза. Лабораторная диагностика. Профилактика.

Вопросы для обсуждения:

1. Понятие об особо опасных инфекциях (ООИ).

2. Микроорганизмы как биологически патогенные агенты, которые могут быть потенциально применены в террористических целях.

3. Морфология, культуральные и биохимические свойства, антигенная структура Y. pestis.

4. Факторы патогенности Y. рestis.

5. Патогенез и клинические формы чумы. Особенности эпидемиологии чумы.

6. Лабораторная диагностика чумы.

7. Мероприятия, проводимые при неспецифической профилактике чумы. Специфическая профилактика чумы.

8. Классификация вибрионов.

9. Характеристика свойств Vibrio cholerae O1 и Vibrio cholerae O139.

10. Факторы патогенности холерного вибриона и патогенез холеры.

11. Ключевые признаки в идентификации вида, биовара, серовара холерного вибриона.

12. Патогенетическая и этиотропная терапия холеры.

13. Профилактика холеры.

14. Морфология возбудителя сибирской язвы.

15. Культуральные, ферментативные и антигенные свойства Bacillus anthracis.

16. Факторы патогенности возбудителя сибирской язвы и патогенез заболевания.

17. Лабораторная диагностика сибирской язвы. Использование реакции преципитации по Асколи.

18. Специфическая терапия и профилактика сибирской язвы.

Практические задания:

1. Изучить требования биологической безопасности при работе с микроорганизмами I-II групп патогенности – возбудителями особо опасных инфекций, правила одевания и снятия защитного костюма, применяемого при работе в очагах особо опасных инфекций.

2. Ознакомиться с правилами взятия, доставки и проведения исследований материала, подозрительного на содержание возбудителей особо опасных инфекций.

3. Изучить методы и этапы проведения исследования материала, подозрительного на содержание возбудителя чумы, и дополнить схему лабораторной диагностики чумы

Исследуемый материал: Экспресс-методы обнаружения AГ: РИФ, ИФА и _____________________ метод генов ПЦР	Биопроба
1 этап		Вскрытие Мазки-отпечатки
2 этап		РА
3 этап		Чувствительность к фагу Биопроба

4. Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты, приготовленные из чистой культуры Y. рestis, выделенной из пунктата бубона, и окрашенные:

а) по Граму;

б) метиленовым синим по Леффлеру.

	Рис.1. Y. рestis в пунктате бубона, окраска по Граму
	Рис.2. Y. рestis в пунктате бубона, окраска по Леффлеру

5. Перечиcлить факторы патогенности возбудителя чумы: ____________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6. Изучить препараты, используемые в диагностике, лечении и профилактике чумы (диагностические иммунные сыворотки и иммуноглобулин, чумной фаг, противочумный иммуноглобулин, вакцина ЕV, стрептомицин и другие антибиотики).

7. Дать характеристику чумной вакцине.

Вакцина EV _____________________________________________________

______________________________________________________________________

8. Изучить методы экспресс-индикации холерных вибрионов (РИФ, реакция иммобилизации вибрионов, РНГА, ПЦР) и экспресс-диагностики холеры (реакция агглютинации с пленкой на поверхности пептонной воды), проба с диагностическими фагами).

9. Изучить методы и этапы бактериологического исследования материала от больного c подозрением на холеру.

1) Учесть результаты посева испражнений и рвотных масс больного в 1% пептонной воде; описать и зарисовать характер роста вибрионов.

2) Изучить культуральные свойства вибрионов на щелочном питательном агаре, ТСВS-агаре.

3) Произвести учет ферментативных свойств выделенной культуры на лактозо-сахарозной среде.

4) Поставить реакцию агглютинации на стекле выделенной культуры с О1, О139, RO-холерными сыворотками, записать и зарисовать результат.

5) Сравнить биохимические свойства холерных вибрионов в средах «пестрого ряда», сопоставить с данными, указанными в таблице.

Таблица

Экспресс-методы

РИФ

Реакция иммобилизации вибрионов

Генетические методы ПЦР

Бактериологический метод:

I

II   III

Гемолиз эритроцитов

Развернутая РА с сыворотками

Огава Инаба

13. Изучить препараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики холеры (диагностические сыворотки, холерные фаги, антибиотики, холерные вакцины.

14. Дать характеристику холерным вакцинам:

Анатоксин –холероген ______________________________________________

____________________________________________________________________

Комбинированная вакцина: О-Аг холерного вибриона + холероген-анатоксин ____________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________

*Таблетированная форма холерной химической бивалентной вакцины: протективные О-антигены V.cholerae сероваров Инаба и Огава +различные ферменты разработана в России, включена в национальный календарь прививок по эпидемическим показаниям.

15. Промикроскопировать фиксированный препарат из чистой культуры вакцинного штамма Bacillus anthracis, окрашенный по Граму («бамбуковая трость»), и зарисовать.

Рис. 1. Препарат-мазок из чистой культуры вакцинного штамма Bacillus anthracis. Окраска по Граму.

16. Изучить и зарисовать культуральные свойства B. anthracis на МПА и в МПБ.

17. Промикроскопировать демонстрационный препарат, приготовленный из культуры B. anthracis на МПА, с добавлением пенициллина, и выявить образование протопластов (тест «жемчужное ожерелье»). Препарат зарисовать.

Рис. 4. Протопласты B. аnthracis, сформированные в результате действия пенициллина (тест «жемчужное ожерелье»)

18. Поставить реакцию термопреципитации по Асколи, учесть результаты реакции и зарисовать, дать заключение.

а б в

Рис. 3. Реакция термопреципитации по Асколи:

а – опыт (преципитирующая сибереязвенная сыворотка + исследуемый экстракт);

б – контроль АТ (преципитирующая сибереязвенная сыворотка + 0,85% раствор NaCl);

с – контроль АГ (нормальная сыворотка + исследуемый экстракт).

Заключение: в исследуемом экстракте сибиреязвенный АГ ________________

19. Изучить по таблице ключевые признаки, используемые при идентификации B. anthracis.

Таблица

Занятие 6

Занятие 7

Тема: Патогенные клостридии. Лабораторная диагностика ботулизма.

СРС: Анаэробные бактерии, не образующие споры (Bacteroides, Porphyromonas, Prevоtella), их роль в патологии.

Вопросы для обсуждения:

1. Общая характеристика патогенных клостридий.

2. Механизм молекулярного действия тетаноспазмина и клинические проявления столбняка.

3. Специфическая терапия и специфическая профилактика столбняка.

4. Механизм молекулярного действия ботулотоксина. Патогенез и клинические проявления ботулизма.

5. Лабораторная диагностика ботулизма. Определение типа токсина клостридий ботулизма.

6. Специфическая терапия ботулизма и его профилактика.

7. Клостридии анаэробной раневой инфекции (травматического клостридиоза): виды, характеристика. Факторы патогенности клостридий и патогенез травматического клостридиоза.

8. Специфическая терапия и методы профилактики травматического клостридиоза.

9. Роль Clostridium perfringens в возникновении пищевой токсикоинфекции. Характеристика его энтеротоксина.

10. Clostridium difficile – возбудитель псевдомембранозного энтероколита.

Практические задания:

1. Учесть наличие роста анаэробных бактерий в среде Китта-Тароцци.

1.

2.

после посева пробирка прогрета на водяной бане при 80о С в течение 25 мин

2. Промикроскопировать приготовленные и окрашенные по Граму и Пешкову мазки из культуры анаэробных бактерий в среде Китта-Тароцци. Препараты зарисовать.

Рис. 1. Препарат-мазок из культуры анаэробных бактерий в среде Китта –Тароцци. Окраска по Граму

Рис. 2. Препарат-мазок из культуры анаэробных бактерий в среде Китта –Тароцци. Окраска по Пешкову

3. Пересеять культуру бактерий со среды Китта-Тароцци в высокие столбики с сахарным МПА методом последовательных разведений для получения изолированных колоний.

4. Изучить культуральные свойства клостридий в столбиках с сахарным агаром и в среде Вильсон-Блера.

5. Произвести учет ферментативных свойств клостридий в средах «пестрого ряда» и сопоставить их с дифференциально-диагностическими приз