Клиренс эндогенного креатинина.
Проба предназначена для определения клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции и оценки функциональной способности почек.
Клиренс эндогенного креатинина соответствует объему плазмы, который очищается от этого вещества за 1 минуту. Объективную оценку функционального состояния почки можно дать по показателям клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции
Проведение пробы:
1 вариант: обследуемый выпивает 400-500 мл воды или слабого чая и мочится (эту порцию мочи не исследуют и выливают). Время мочеиспускания точно замечают. Ровно через 2 часа собирают мочу (полностью). В середине этого времени пунктируют локтевую вену и забирают 5-8 мл крови. По объему собранной мочи определяют минутный диурез. В крови и моче определяют концентрацию креатинина, после чего рассчитывают клубочковую фильтрацию и канальцевую реабсорбцию.
2 вариант: пациент собирает суточную мочу. После сбора мочи, он приносит всю собранную мочу в лабораторию и здесь же сдает кровь из вены. Минутный диурез рассчитывают после точного измерения объема суточной мочи, определяют концентрацию креатинина в сыворотке крови и моче и рассчитывают показатели клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции по формулам.
количество суточной мочи
Минутный диурез = --------------------------------- мл\мин
концентрация креатинина в моче
Клубочковая фильтрация = ----------------------------- * мин.диурез
концентрация креатинина в крови
Клубочковая фильтрация составляет в норме 80-120 мл\мин.
клубочковая фильтрация - мин. диурез
Реабсорбция = --------------------------------------------- * 100 %
клубочковая фильтрация
Канальцевая реабсорбция равна 97 -99%.
Определение билирубина и его фракций по методу
Иендрашика.
Реактивы.
1. Кофеиновый реактив. 5 г чистого кофеина; 7,5 г бензойно-кислого натрия; 12,5 г кристаллического уксусно-кислого натрия растворяют последовательно в 90 мл дистиллированной воды, нагревают до 50-60° и хорошо перемешивают. После растворения фильтруют через сахарную вату (горячим), охлаждают и доводят дистиллированной водой до метки 100мл. Реактив хранится в темной посуде в холодильнике, годен в течение 2-х недель.
2. Физиологический раствор – 0,9 % раствор хлористого натрия.
3. Диазореактив 1: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют при подогревании в 300-400 мл дистиллированной воды, прибавляют 15 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19. После полного растворения сульфаниловой кислоты и охлаждения раствора, объем доводят дистиллированной водой до 1 л. Раствор стойкий. Хранится в посуде из темного стекла.
4. Диазореактив 11: 0,5% раствор азотисто-кислого натрия. Реактив нестойкий, хранится в посуде из темного стекла около 2-3 недель. Первым признаком его негодности служит появление желтого оттенка.
Перед работой смешивают 10 мл диазореактива 1 и 0,3 мл диазореактива 11.
Принцип метода.
При взаимодействии сульфаниловой кислоты с азотисто-кислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая с прямым билирубином образует розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности окраски судят о концентрации прямого билирубина. После обработки кофеином непрямой билирубин переходит в растворимое диссоциированное состояние и с диазосмесью также дает розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности окрашивания определяют концентрацию общего билирубина. По разнице между общим и прямым билирубином определяют концентрацию непрямого билирубина.
Нормальные величины:
Общий билирубин - 1,7 – 20,5 мкмоль\л
Непрямой билирубин - 8,5 – 20,5 мкмоль\л
Прямой билирубин - до 5 мкмоль\л.
Ход определения.
В 3 пробирки: для общего, прямого билирубина и для контроля мутности сыворотки вводят реактивы согласно таблице:
Ингредиенты в мл Общий Прямой Контроль
билирубин билирубин мутности
сыворотки
Сыворотка крови 0,5 0,5 0,5
Кофеиновый реактив 1,75 - 1,75
0,9 % хлористый натрий - 1,75 0,25
Диазосмесь 0,25 0,25 -
Для определения прямого билирубина колориметрирование следует проводить спустя 5-10 минут после добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает непрямой билирубин.
Для определения общего билирубина пробу для развития окраски оставляют стоять 20 минут, после чего колориметрируют. При дальнейшем стоянии окраска не изменяется.
Измеряют оптическую плотность на ФЭКе при длине волны 500-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5 мм против воды.
Расчет.
1. Из показателей оптической плотности прямого и общего билирубина вычитают оптическую плотность контроля мутности сыворотки.
2. Полученный результат смотрят по калибровочному графику, определяя концентрацию прямого и общего билирубина.
3. Для определения концентрации непрямого билирубина вычитают из общего билирубина концентрацию прямого.
Коллоидные пробы печени.
В клинико-диагностических лабораториях широко используют методы, при которых простыми коллоидными реакциями косвенно обнаруживают изменения в составе белков сыворотки крови (диспротеинемические тесты).
Все эти методы основываются на изменениях, наступающих в коллоидной устойчивости сыворотки, поэтому получили название проб коллоидной устойчивости или коагуляционных проб. К коллоидным пробам относятся: тимоловая проба, сулемовая, проба Вельтмана. Последние две в настоящее время практически не используются.
Химическая сущность проб не совсем ясна. Известно, что коагуляция обычно наступает при:
· уменьшении электрического заряда коллоидных частиц
· при уменьшении содержания гидрационной воды в коллоидных частицах
· при увеличении размеров коллоидных частиц.
Тимоловая проба.
Принцип метода.
При взаимодействии сыворотки крови с тимолово-вероналовым реактивом образуется помутнение вследствие образования глобулино-тимоло-липидного комплекса.
Реактивы:
1. 10 % спиртовый раствор тимола: 10 г очищенного тимола растворяют в 100 мл 96о спирта.
2. Буферный раствор: 2,76 г веронала и 2,06 г мединала доводят водой до 1 л. Хранят в холодильнике. При выпадении осадка реактив не годен.
3. Тимолово-вероналовый буфер: рН= 7,55-7,60. В мерной колбе на 100 мл смешивают 80 мл буферного раствора и 1 мл 10% спиртового раствора тимола, встряхивают и доводят буферным раствором до метки. Определяют рН.
4. Стандартный раствор сернокислого бария (для построения калибровочного графика):
а)раствор хлористого бария: 1,175 г хлористого бария растворяют в 100 мл дистиллированной воды;
б)0,2 Н раствор серной кислоты.
Суспензия сернокислого бария готовится перед употреблением: 3 мл сернокислого бария помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят объем до метки раствором 0,2 Н серной кислоты.
Ход определения.
К 6 мл тимолово-вероналового буфера добавляют 0.1 мл сыворотки крови, оставляют стоять на 30 минут. Измеряют оптическую плотность на ФЭКе при длине волны 630-690 нм (красный светофильтр) против тимолово-вероналового буфера в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Реакцию проводят при комнатной температуре.
Расчет ведут по калибровочному графику.