Характеристика обследованных доноров
В диссертации представлены результаты комплексного обследования 208 доноров, награжденных нагрудным знаком «Почетный донор России». Работа выполнялась на станции переливания крови ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России (главный врач – В.К. Куноф). Доноры сдавали кровь и ее компоненты (плазму, тромбоциты) безвозмездно. Число донаций у обследованных варьировало от 40 до 266. Преобладали смешанные донации. Частота различных типов донаций в группе обследованных была следующей: донации эритроцитной массы – 21,0%, плазмы – 19,5%, тромбоцитов – 25,2%, смешанные донации – 34,3% (рис. 1).
Рис. 1. Распределение доноров по виду донаций
Установление количества донаций и их видов для представления данных к награждению доноров проводили, руководствуясь утвержденными нормативными документами (Закон РФ № 5142-1 от 09.06.1993г. «О донорстве крови и ее компонентов») [36]. Подсчет смешанных донаций был регламентирован письмом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 29.08.2003г. № 2510/9789-03-32 «О порядке представления к награждению нагрудным знаком «Почетный донор России» в отдельных случаях» [79]. Обследуемые доноры вошли в работу до окончания действия этих документов в связи с выходом нового Закона РФ №125-ФЗ от 20.07.2012г. «О донорстве крови и ее компонентов».
Диапазон возраста доноров составлял от 23 лет до 61 года (Ме - 45), средний возраст мужчин – 41,0±7,2 лет, женщин – 45,3±5,5. Медицинское обследование доноров до кроводачи, клинико-лабораторное исследование крови осуществляли в соответствии с Приказом МЗ РФ № 364 от 14.09.2001г. «Об утверждении порядка медицинского обследования донора крови и ее компонентов» [88]; результаты освидетельствования вносили в соответствующую медицинскую документацию и компьютер с электронной базой данных доноров. В работе использовали следующую медицинскую документацию:
· «Карта донора резерва» (форма 407/у);
· «Медицинская карта активного донора» (форма 406/у);
· «Дневник учета доноров» (форма 410/у);
· «Журнал регистрации доноров, награжденных нагрудным знаком «Почетный донор России» (форма 447/у);
· «Журнал регистрации мероприятий, проводимых при заболевании сифилисом, гепатитом и др.» (форма 403/у);
· «Журнал регистрации медицинских отводов у доноров».
Из общего числа почетных доноров (410 человек) за представленные годы процентное соотношение мужчин и женщин: 45,9% и 54,1% соответственно (p>0,05) (табл.1).
Таблица 1 – Количество почетных доноров СПК института за период 2003-2013 гг. (абс./%)
| Годы | Всего доноров | Мужчины | Женщины |
| 21/51,2 | 20/48,8 | ||
| 28/51,0 | 27/49,0 | ||
| 18/42,0 | 25/58,0 | ||
| 12/35,3 | 22/64,7 | ||
| 10/40,0 | 15/60,0 | ||
| 21/53,8 | 18/46,2 | ||
| 11/30,0 | 26/70,0 | ||
| 12/44,4 | 15/55,6 | ||
| 17/48,6 | 18/51,4 | ||
| 2/50,0 | 2/50,0 | ||
| Продолжение таблицы 1 | |||
| 36/51,4 | 34/48,6 | ||
| Всего | 188/45,9 | 222/54,1 |
Донорский стаж до награждения для мужчин в среднем составил 14,1±6,0 лет, для женщин – 14,5±7,0. Отрадно отметить, что молодых доноров, желающих получить почетное звание, с каждым годом становится больше. Об этом молодежь говорит при первом визите на донорский пункт.Как показали расчеты, респонденты-мужчины в возрасте до 30 лет заслужили это звание через 7,3±2,3 лет при регулярных посещениях донорского пункта и отсутствии отводов, респонденты-женщины через 9,3±1,5 года. С другой стороны, есть люди, которые по ряду причин получили награду спустя 20, а то и 30 лет после первой донации. С возрастом «дослужиться» до почетного звания дольше и сложнее из-за вероятных проблем со здоровьем. В возрастной группе от 50 лет и старше этот срок практически одинаков у мужчин и женщин - 22,5±7,5 и 22,0±8,1 года соответственно.
Для составления социально-демографического портрета доноров, награжденных нагрудным знаком «Почетный донор России», нами были разработаны анкеты, которые состояли из 21 пункта. Провели анонимный опрос 241 донора, относящихся к данной категории (152 женщины, 89 мужчин). Вопросы касались возраста, пола, стажа донорства, образования, места работы, семейного положения, жилищных условий, материального достатка. Кроме того, респондентам предлагалось ответить на вопросы об источниках информирования о донорстве, мотивах, которые побудили их явиться на донорский пункт, по каким причинам они продолжают сдавать кровь и ее компоненты, об отношении к их донорской функции руководства по месту работы и в семье. Выясняли также наличие или отсутствие вредных привычек у доноров, их мнение о влиянии многолетнего донорства на здоровье. Было важно узнать, как они оценивают существующие льготы, и есть ли у них предложения по улучшению статуса Почетного донора в нашей стране.
С целью углубленной оценки состояния здоровья доноров с многократными донациями, наряду с анализами, регламентированными Приказом МЗ РФ №364 «Об утверждении порядка медицинского обследования донора крови и ее компонентов» [88], выполняли дополнительные лабораторные исследования. Важно отметить, что эти исследования проводили у лиц, допущенных к донациям.
· У 196 доноров исследовали уровень СФ. Анализы выполняли в лаборатории иммунологии лейкозов (руководитель – д.м.н., профессор В.И. Шардаков).
· У 194 человек определили биохимические показатели: у 172 – состояние тромбоцитарно-сосудистого гемостаза, у 208 – коагуляционного гемостаза, а также параметры обмена железа (СЖ, НЖСС, ОЖСС, Тф, коэффициент насыщения трансферрина (КНТ). Исследования проводились в Центре патологии гемостаза (руководитель – д.б.н., профессор Л.Н. Тарасова).
· У 203 наблюдавшихся изучили иммунологические параметры (в том числе, активность сывороточных цитокинов). Исследования проводились в лаборатории иммуногематологии (руководитель – д.м.н., профессор Г.А. Зайцева).
Число доноров, обследованных в лабораториях института в рамках диссертационной работы, представлено в таблице 2.
Таблица 2 – Количество дополнительных лабораторных анализов, выполненных у почетных доноров
| Исследованные показатели | Группы доноров | |||
| мужчины | женщины | |||
| n | возраст, медиана (лет) | n | возраст, медиана (лет) | |
| Обмен железа | ||||
| Биохимические | ||||
| Функция тромбоцитов | 41,5 | |||
| Продолжение таблицы 2 | ||||
| Коагулограмма | ||||
| Иммунологические | 38,5 |
Методы исследования
Анкетирование осуществляли в отделе комплектования доноров СПК КНИИГиПК. Сведения о донациях, медицинских отводах, выявлении инфекционных маркеров получали из медицинской документации и компьютерной базы данных.
Кровь для дополнительных исследований брали из локтевой вены донора в утренние часы. Половину взятой для иммунологических и биохимических исследований крови (5 мл) стабилизировали гепарином «Gedeon Richter» в дозе 15 ед/мл, другую часть помещали в сухую пробирку для последующего отделения сыворотки; материалом для коагулологических исследований служила кровь, взятая на 3,8% растворе цитрата натрия в соотношении 9:1, и плазма, полученная из этой же крови.
Сывороточный ферритин (СФ) определяли радиоиммунологическим методом с помощью тест-систем «Ferritin Irma Kit» («Immunotech», Чехия) на установке для радиоиммунохимического исследования «Гамма-НТ». Показатели обмена железа – уровень сывороточного железа, трансферрина (СЖ, Тф), ненасыщенную железосвязывающую способность сыворотки (НЖСС), а также концентрацию общего билирубина, активность АЛТ, холестерин исследовали на биохимическом анализаторе «Hitachi-902» с тест-системами фирмы «Roche». Общую железосвязывающую способность сыворотки (ОЖСС), коэффициент насыщения трансферрина (КНТ) рассчитывали по общепринятым формулам.
Функциональную активность тромбоцитов определяли турбидиметрическим методом с помощью анализатора агрегации тромбоцитов «Биола» (модель ЛА 230-α). В качестве индукторов агрегации применяли реагенты фирмы ООО «Технология – Стандарт» (г. Барнаул).
Коагуляционное звено гемостаза изучали по следующим параметрам: протромбиновый индекс (ПТИ,%) методикой по Квику; количество фибриногена (Ф,г/л) – хронометрическим методом по Клауссу; тромбиновое время (тромботестом); активность антитромбина III (АТIII, %) по методу Абильдгаард, фибринолитическая активность (ФА,мин) - по времени Хагеман-зависимого эуглобулинового лизиса по методу Г.Ф.Еремина, А.П.Архипова; содержание растворимых фибрин-мономерных комплексов (РФМК,мкг/мл) - в ортофенантролиновом тесте; протеин С (Пр С, %) хромогенным методом. Исследования выполняли на коагулометрах START-4 фирмы «Diagnostika Stago» и COAG-A-MATE XM фирмы «Organon Teknika», фотометре КФК-3 с использованием реагентов фирмы «Технология - Стандарт» (г. Барнаул), НПО «РЕНАМ» (г. Москва).
Иммунологический мониторинг осуществляли с помощью тестов 1 и 2 уровней, характеризующих состояние клеточного, гуморального звеньев иммунитета и неспецифическую резистентность организма. Использовали унифицированные методы, рекомендованные Институтом иммунологии МЗ РФ для оценки иммунного статуса при массовых обследованиях, а также представленные в руководствах по иммунологии [76].
Общее количество лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева. Содержание лимфоцитов определяли методом световой микроскопии в препаратах, окрашенных по Лейшману. Выделение лимфоцитов для иммунологических исследований производили следующим образом. Гепаринизированную кровь разводили в соотношении 1:1 раствором NaCl 0,85%. 5 мл разведенной крови осторожно по стенке центрифужной пробирки наслаивали на раствор фиколл-верографина (2,5 мл) плотностью 1,077 г/мл и центрифугировали при 1500 об./мин. в течение 30 минут. С помощью пастеровской пипетки снимали лейкоцитарный слой и дважды отмывали клетки центрифугированием (1500 об./мин. по 10 мин.) в растворе Хенкса. Осадок ресуспензировали, в камере Горяева подсчитывали число ядросодержащих клеток во взвеси и устанавливали концентрацию 2х106/мл с помощью раствора Хенкса.
Популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов исследовали с использованием моноклональных антител серии ЛТ производства ООО «Сорбент» (г. Подольск, Московская область) к молекулам CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, HLA-DR+ методом непрямой поверхностной иммунофлуоресценции. При постановке реакции руководствовались методическими рекомендациями З.Г. Кадагидзе и соавт. [43]. Оценку реакции осуществляли на люминесцентном микроскопе «Axioscop» (Zeiss, Германия). Рассчитывали ИРИ - иммунорегуляторный индекс – соотношение CD4+/CD8+ - лимфоцитов.
При определении фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН) использовали инертные частицы латекса размером 1,1 μ («Sigma», Германия), подсчитывая при этом процент фагоцитирующих нейтрофилов и фагоцитарный индекс (ФИ), то есть среднее количество частиц латекса, поглощенных одним фагоцитом [57]. О состоянии кислородзависимого киллинга нейтрофилов судили по результатам спонтанного НСТ-теста с нитросиним тетразолием [107].
Комплементарную активность сыворотки крови оценивали микрометодом по 50% гемолизу эритроцитов барана [9], циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) – методом осаждения полиэтиленгликолем [55].
Уровень сывороточных IgA, М, G, Е и активность сывороточных цитокинов (ИНФ-α, ФНО-α, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-18) исследовали с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием наборов реагентов, выпускаемых ЗАО «Вектор-Бест» (г. Новосибирск).
Статистический анализ полученных данных выполняли на персональном компьютере с использованием пакета прикладных программ Microsoft Excel, STATISTIKA (версия 6.1.), BIOSTAT [92]. Определяли нормальность распределения признаков. Применяли параметрические и непараметрические методы. Для описания нормального распределения количественных признаков использовали среднее значение, стандартную ошибку среднего. Результаты представлены в виде М±m, где М – среднее значение, m – стандартная ошибка среднего. Для сравнения двух групп использовали t-критерий Стьюдента, критерий хи-квадрат. Центральные тенденции и дисперсии признаков, не имеющих приближенно нормального распределения, описывали медианой и интерквартильным размахом (нижний квартиль; верхний квартиль). Для сравнения двух независимых групп использовали U-критерий Манна-Уитни. Определяли статистическую значимость различий между группами. Различия считали статистически значимыми при р<0,05.
Применяя вышеописанные методы, охарактеризовали социально-демографический портрет доноров, награжденных нагрудным знаком «Почетный донор России», оценили у них состояние основных звеньев иммунитета, свертывающей системы, запасы железа в организме, некоторые биохимические параметры, установили пределы колебаний исследованных показателей и частоту выраженных отклонений у этой категории доноров. Полученные данные изложены в следующих главах диссертации.