Извлечение и фракционирование кумаринов из растительного сырья
Для выделения кумаринов из предложенного образца лекарственного растительного сырья использовался метод экстракции, замены растворителя. Для проведения качественных реакций применялись следующие реактивы:
ü 95 %-ный этиловый спирт;
ü 10 %-ный водный раствор ацетата свинца;
ü вода очищенная;
ü хлороформ, х.ч.
При выполнении экспериментальных исследований использовали методы экстракции, тонкослойной хроматографии, качественные цветные реакции.
При проведении тонкослойной хроматографии использовали пластинки “Silufol” (UV 254, 366 Чехословакия) , для бумажной хроматографии бумагу "Ленинградская N 2", "Filtrak" Fn-1, Kisilgel 60 Art 5553. Пробы веществ (0,01-0,18 мг) исходных извлечений в зависимости от чувствительности реактивов и концентрации соединений наносили с помощью микрокапилляров на расстоянии 1 см от края пластины. Хроматограммы рассматривали в дневном и УФ-свете до и после проявления реактивами.
Для хроматографических систем использовали растворители этилацетат и бензол квалификации х.ч. в системе этилацетат-бензол (1:2) Соотношения смеси растворителей, обозначенные цифрами, взяты в объемных единицах.
Выделение кумаринов из листьев пузыреплодника калинолистного ,
3,0 г высушенных листьев пузыреплодника калинолистного измельчили до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм, поместили в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибаили 30 мл 95 %-ного спирта и нагрели на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 20 мин (Рис. 2).
Рис. 2. Установка обратного холодильника
Извлечение фильтровали в горячем виде (рис. 3) и к фильтрату добавляли по каплям при постоянном перемешивании 10%-ный раствор свинца ацетата (рис. 4).
Рис. 3. Процесс фильтрования
При этом большая часть веществ фенольного характера, обладающая способностью к азосочетанию, осаждалась. Еще горячую массу переносили на фильтр, отделяли осадок солей свинца и промывали осадок 3 мл спирта. К охлажденному фильтрату прибавляли 5 мл воды.
Рис. 4. Осаждение солей свинца
Для дальнейшей очистки фильтрат помещали в делительную воронку вместимостью 100 мл, приливали 20 мл хлороформа и встряхивали. Отделили нижний хлороформный слой. (Рис. 5).
Рис. 5. Процесс отделения нижнего хлороформного слоя
Хлороформ отгоняли под вакуумом, а остаток в колбе растворили в 6 мл 95 %-ногоспирта. Этот раствор использовали для дальнейшего анализа.
Качественное обнаружение кумаринов в полученных извлечениях
К 3-5 мл спиртовых извлечений из листьев пузыреплодника калинолистного добавляли 10 капель раствора калия едкого в метиловом спирте 10% и нагревали в течение 5 минут на водяной бане. Появлялась желтая окраска – это доказывает наличие кумаринов в полученном извлечении (Рис. 6).
Рис. 6.Качественная реакция с гидроксидом калия
После прибавления 0,1 мл диазореактива раствор окрашивался в желто-оранжевый цвет (Рис. 7).
Рис. 7. Реакция образования азокрасителя
К 3-5 мл спиртового извлечения из травы клевера лугового добавляли 10 капель раствора калия едкого в метиловом спирте 10% и нагревали в течение 5 минут на водяной бане. Также как и в предыдущем случае появлялась желтая окраска. Реакция образования азокрасителя дала положительный результат – появление желто-оранжевой окраски.