Клетки ворсин хориона (плаценты)

Клетки ворсинчатого хориона (плаценты), доступные для ПД, имеют различное происхождение:

• клетки цитотрофобласта (дифференцируются на стадии морулы);

• клетки мезенхимы (дифференцируются на стадии бластоцисты). Для хромосомного анализа по клеткам хориона или плаценты

используют два основных метода.

1. Длительное культивирование: растущие в монослое первичные культуры имеют гетерогенный клеточный состав с преимущественным ростом фибробластоподобных клеток мезенхимальной стромы ворсин. Образование колоний или рыхлого монослоя происходит обычно к 10-12 дню культивирования. Основными недостатками метода являются длительность культивирования и контаминация культур материнскими клетками.

2. «Прямые» препараты. Метод анализа «прямых» препаратов базируется на исследовании спонтанно делящихся клеток цитотрофобласта без их предварительного культивирования в сроки от 10 до 20 недель беременности.

Разработаны модификации прямого метода — метод «стряхивания — отпечатывания» и ускоренный прямой метод, которые позволяют получать препараты из хориона/плаценты, удовлетворяющие всем критериям кариотипирования. В сочетании с флуоресцентными методами дифференциальной окраски хромосом результативность этих методов превышает 99 %.

Следует подчеркнуть, что эти модификации пригодны для приготовления препаратов хромосом из тканей с высокой естественной ми-тотической активностью, включая любые ткани и органы зародыша. Интерфазные ядра, обработанные таким способом, вполне пригодны для метода FISH со специфическими ДНК-зондами, что важно при верификации онтогенетического пренатального диагноза.

Лимфоциты пуповинной крови плода

Для хромосомного анализа крови плода используют стандартную методику стимулирования лимфоцитов фитогемагтлютинином (ФГА).

Этот метод дает наиболее адекватное представление о хромосомном статусе плода и настоятельно рекомендуется для кариотипирова-ния плода в случае хромосомного мозаицизма в плаценте, а также при наличии пороков развития не только во II, но как показывает наш опыт и в III триместре беременности. В последнем случае кариотипирова-ние плода позволяет разрешить вопрос о тактике ведения беременности, родов и неонатального периода.

Основные принципы цитогенетического анализа в пренатальной диагностике

При пренатальном кариотипировании следует руководствоваться рекомендациями, принятыми в отечественной и международной клинической цитогенетике, а также нормативными документами МЗ РФ (Приказ МЗ РФ № 316 от 30.12.1993). Заключение о кариотипе должно соответствовать правилам Международной номенклатуры хромосом.

Программы контроля качества цитогенетических исследований в учреждениях медико-генетической службы включают состав и квалификацию персонала, оборудование и реактивы, а также ряд параметров, касающихся непосредственного выполнения хромосомного

анализа.

В связи с увеличением числа центров ПД, а также отсутствием единой системы контроля качества, представляется целесообразным рассмотреть основные требования к организации работы цитогенетических подразделений, обратив особое внимание на критерии качества пренатального кариотипирования.

Состав и квалификация персонала

Согласно нормативам (Приказ МЗ РФ № 316 от 30.12.1993), цитогенетическая пренатальная диагностика осуществляется коллективом, состоящим из специалистов с высшим и средним специальным образованием. При этом штатная структура цитогенетического подразделения должна иметь не менее двух ставок врачей-цитогенетиков и соответствующее им число ставок фельдшеров-лаборантов. При этом каждый врач-цитогенетик должен выполнить 160 пренатальных кариотипов в год.

Оборудование

Необходимым условием точности проводимых исследований является соответствующее им лабораторное оборудование, контроль и сертификация которого осуществляются по определенной схеме.

Реактивы

Следует особо подчеркнуть, что необходимо заблаговременно проверять качество всех реактивов, используемых для приготовления рабочих растворов. Во избежание повторных технических ошибок рекомендуется учитывать и анализировать их характер и частоту в режиме лабораторной базы ошибок.