В препарате крови, окрашенном бриллиант-крезиловым синим, подсчитать ретикулоциты. Результаты занести в бланк
Перед началом манипуляции необходимо надеть перчатки.
На препарат помещают каплю иммерсионного масла, после чего находят изображение (сначала при увеличении х7, х8, затем - х90).
Ретикулоциты считают в тонкой части мазка в 5 полях зрения (на 1000 эритроцитов, т.к. 1 поле зрения соответствует двумстам эритроцитам). Ответ выдается в промилле (‰).
Ретикулоциты – это эритроциты с нитчато-сетчатой субстанцией сине-зеленого цвета (остатки ядра).
Эталон ответа к билету № 5
Задача № 1
1. Результат ниже нормы – тромбоцитопения. Количество тромбоцитов в норме в периферической крови здоровых людей 180,0-320.,0´109 /л.
Тромбоцитопения – это уменьшение количества тромбоцитов в единице объема крови. Тромбоцитопения может быть связано с перераспределением их по сосудистому руслу, с множественным образованием тромбоцитарных тромбов, повышенным распадом тромбоцитов – тромбоцитолизом, В патологии тромбоцитопения отмечается при:идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, болезни Верльгофа.Тромбоцитоз- увеличение количества тромбоцитов отмечается:
при травмах с размозжением мышц, при асфиксиях, ожогах, гемолитических кризах, после кровотечений, в период выздоровления от инфекционных болезней,после удаления селезенки .
2. Тромбоциты по Фонио подсчитывают в окрашенном мазке крови параллельно с эритроцитами, пока не будут просчитаны 1000 эритроцитов ( т.е считают 5 полей зрения , в каждом поле содержится примерно за 200 эритроцитов). Затем производят перерасчет количества тромбоцитов на число эритроцитов в 1 л крови.
3. Время свертывания при данной патологии не должно меняться, т.к. оно зависит не от количества тромбоцитов, а от плазменных факторов свертывания крови.
Задание №2.
Определить группу крови предложенного образца. Результаты занести в бланк.
- Одеть перчатки.
- Накапать последовательно по 1-2 капле цоликлонов анти-А, анти-В и анти АВ из дозатора на планшет для определения групп крови.
- Добавить по 1 капле крови в лунки с цоликлонами одноразовой пастеровской пипеткой
- Сбросить пипетку в дезраствор
- 3-мя разными палочками перемешать содержимое лунок;
- Сбросить стеклянные палочки в дез раствор.
- Перемешать содержимое лунок аккуратным покачиванием планшета.
- Через 3 мин. оценить результат исследования.
- Записать результат.
- Залить планшет 6% перекисью водорода
- Снять перчатки и сбросить их в дез. раствор.
Эталон ответа к билету № 6
Задача № 1
1. Если камера будет заполнена взвесью из верхних слоев пробирки, результат будет занижен и наоборот, если из нижних слоев – завышен. Взвесь должна быть равномерной, что достигается вращением пробирки между ладонями непосредственно перед заполнением камеры. После заполнения камеру нужно положить на столик микроскопа на 1-2 мин, чтобы эритроциты осели, и только после этого можно их подсчитывать.
2.
Эритроциты считают в 5 больших расчерченных квадратах), расположенных по диагонали, поскольку распределение клеток в камере может быть неравномерным.
Чтобы не считать дважды одни и те же клетки, пользуются следующим правилом счету подлежат все клетки внутри малого квадрата и лежащие на пограничных линиях, если они большей своей половиной заходят внутрь данного квадрата. К ним, кроме того, присчитываются эритроциты, пересекаемые пограничными линиями пополам, но только те из них, которые находятся на верхней и левой линиях. Эритроциты, расположенные большей своей частью вне данного квадрата, не считают
Разводящей жидкостью для эритроцитов является изотонический раствор хлорида натрия.
3. Увеличение количества эритроцитов в единице объема крови называется эритроцитозом. В физиологических условиях наблюдается у новорожденных в первые 3 дня жизни. Может отмечаться и у взрослых при усиленном потоотделении, голодании, подъемах на большую высоту высоту. В последнем эритроцитоз обусловлен не сгущением крови, а повышением продукции эритроцитов в костном мозге. Усиленный эритроцитоз является реакцией на понижение парциального давления кислорода в воздухе (эритроцитоз на основе высокой гипоксии отличается большим постоянством у жителей высокогорных областей).
Эритроцитозы, наблюдаемые в патологии, чаще бывают симптомами каких-либо заболеваний, т.е. являются вторичными.
Задание №2.
При определении лейкоцитов в камере Горяева получили при подсчете 100 квадратов 66 клеток.
Эталон решения:
1. Делим полученный результат на 2 . 66:2=33
2.Полученный результат делим на 10 и умножаем на 10 9.
3.Результат 3,3 * 10 9.
Оценка результата: патология (лейкопения)
Эталон ответа к билету № 7
Задача № 1
1. Данный результат завышен, т.к. нормы гемоглобина для женщин 120-140 г/л. Повышение концентрации гемоглобина наблюдается при:
- миело-пролиферативных заболеваниях (например эритремии);
- пребывании на больших высотах;
- хронических гипоксиях;
- гемоконцентрации (дегидратация, ожоги, рвота, кишечная непроходимость); гемоконцентрация также сопровождается альбумина и некоторых других показателей
Снижение гемоглобина наблюдается:
- в первый триместр беременности содержание гемоглобина из-за физиологического разбавления крови;
- у людей старше 65 лет нижние пределы Hb несколько снижены;
- анемиях различного происхождения (железодефицитной, апластической, гемолитической и др.) и разбавлении крови.
2.Ошибки могли быть преаналитические : неправильная подготовка больного и аналитические:
а) несоблюдение соотношения реактива и крови;
б) выстаивание опытной пробы более 20 мин;
в) использование грязной кюветы
г) неправильное приготовление раствора или старый раствор
д) неисправный прибор
3.Принцип метода: гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин – гемиглобин, образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина
Задание №2.
| Подготовка к манипуляции | |
| 1. | Вымыть и осушить руки |
| 2. | Надеть перчатки |
| На рабочий стол поставить | |
| 3. | Поднос |
| 4. | Дез. раствор для сброса перчаток |
| 5. | Дез. раствор для сброса скарификаторов |
| 6. | Спиртовые салфетки |
| 7. | Сухие стерильные ватные шарики или салфетки |
| 8. | Скарификаторы |
| 9. | Микроветы для забора капиллярной крови с К3ЭДТА |
| 10. | Бланки общего анализа крови |
| 11. | Коробку с перчатками |
| 12. | Маски |
| 13. | Спирт 70% |
| 14. | Ветошь |
Эталон ответа к билету № 8
Задача № 1
1. У пациента в 1 л крови 90´109 /л тромбоцитов. Рассчитывается путем составления пропорции, далее 4,5´1012 /л. умножают на 20 и делят на 100.
Этот результат оценивается как тромбоцитопения.
Функции тромбоцитов
2. 1) Участие в остановке кровотечения:
а) вызывают спазм поврежденного сосуда, содержат серотонин и гистамин
б) участие в образовании первичного тромба (процессы адгезии и агрегации)
в) запуск системы свертывания (тромбоциты содержат факторы свертывания)
г) обеспечение ретракции кровяного сгустка
2) Укрепление кровеносных сосудов (питание для эндотелия, выработка факторов роста эндотелия)
3) Участие в иммунитете организма:
а) эффекторы иммунитета; перенос молекул иммуноглобулинов
б) поглощают чужеродные микрочастицы и вирусы (вирусы в тромбоцитах погибают, т.к. тромбоциты не содержат ядра)
в) участие в аллергических реакциях, способны к антителзависимой цитотоксичности (могут разрушать бактерии, опухолевые клетки)
3. В данном случае можно ожидать увеличения длительности кровотечения по Дуке. Наиболее общими тестами, отражающими состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза, являются длительность кровотечения по Дуке..
Задание №2.
| Подготовка к манипуляции |
| Вымыть и осушить руки. |
| Надеть перчатки. |
| На рабочий стол поставить |
| Поднос. |
| Дез. раствор для сбрасывания перчаток. |
| Дез. раствор для сбрасывания одноразовых отходов. |
| Гемоглобинометр, предварительно откалиброванный преподавателем. |
| Трансформирующий раствор. |
| Дозаторы на 5 мл и 20 мкл. |
| Наконечники для дозаторов. |
| Бланки общего анализа крови |
| Спирт 70% |
| Ветошь |
Эталон ответа к билету № 9
Задача № 1
1. Норма ретикулоцитов: 5-8 % или 0,5-0,8 ‰. Ретикулоциты – это молодые эритроциты, с остатками ядра в виде нитчато- сетчатой субстанции .Полученный результат можно оценивать как ретикулоцитоз ,
Анемии по числу ретикулоцитов делятся на нормо_-, гипо- и гиперрегенерарные.. Регенерация – увеличение регенеративных элементов красной крови (ретикулоцитов, полихроматофилов, нормобластов
2. В принципе окраски ретикулоцитов лежит прижизненная окраска без фиксации спиртом. Окраска ведется щелочными красками, например бриллиантовым крезиловым синим.Ход определения:берут одну каплю краски и одну каплю крови.
После этого кровь с краской тщательно перемешивают и оставляют на 30 мин.
По истечении времени окраски небольшие капли покрашенной крови помещают на предметные стекла и шлифовальным стеклом делают тонкий мазки, которые быстро высыхают на воздухе.
3.Техника подсчета количества ретикулоцитов.
Окрашенный мазок микроскопируют с иммерсионной системой в тонкой его части. Ретикулоциты учитываются в числе подсчитанных 1000 эритроцитов ( т.е считают 5 полей зрения , в каждом поле содержится примерно за 200 эритроцитов).
Количество ретикулоцитов выражают на 1000 эритроцитов – ‰ (в промилле) и на 100 эритроцитов - % (в процентах).
Задание №2.
При определении эритроцитов в камере Горяева получили следующие результаты:
1 квадрат 115
2 квадрат 110
3квадрат 119
4 квадрат 115
5квадрат 118
Эталон решения:
1. Складываем сумму 5 квадратов: =577
2. Делим полученный результат на 100 и умножаем на 10 12
3. Получаем 5,77.
Оценка результата: патология (эритроцитоз).
Эталон ответа к билету № 10
Задача № 1
1. В результате анализа можно отметить лейкоцитоз, нейтрофильный сдвиг влево, увеличение СОЭ. Сдвиг лейкоцитарной формулы влево – это изменения в крови, напоминающие лейкозы, но не переходящие в них. Возникает в ответ на что-то; их можно назвать псевдобластными реакциями. Сдвиг лейкоцитарной формулы влево наблюдается при воспалительных процессах, при бактериальных инфекциях, сепсисе .Подобный сдвиг лейкоцитарной формулы, с лейкоцитозом и увеличением СОЭ возможен при острых воспалительных реакциях в организме.
2. Лейкоцитарная формула подсчитывается в наиболее тонкой части мазка, где эритроциты расположены одиночно, а не "монетными столбиками". Лейкоциты в мазке располагаются неравномерно: более крупные клетки – моноциты, эозинофилы, нейтрофилы встречаются чаще по краю мазка, более мелкие – лимфоциты – в середине. Поэтому подсчет ведется по зигзагообразной линии.
3.. Принцип всех методов окраски основан на сочетании щелочной синей краски – азура – с кислой краской – эозином. Структурные части клетки имеют различную реакцию. Они поглощают краситель противоположной реакции и им окрашиваются: щелочные части клетки окрашиваются кислой краской в красный цвет, а кислые – щелочной краской в синий цвет.
Задание №2.
| Подготовка к манипуляции |
| Вымыть и осушить руки |
| Надеть перчатки |
| На рабочий стол поставить: |
| Поднос |
| Штатив |
| Пробирки с кровью |
| Микроскоп |
| Пробирки химические |
| Камеры Горяева |
| Дозаторы на 4,0 мл |
| Дозаторы на 0,02 мл |
| Бланки общего анализа крови |
| Дез. раствор для перчаток и одноразовых отходов |
| Дез. раствор для пробирок с кровью |
| Дез. раствор «для слива крови» |
| Спиртовые ватные шарики или спиртовые салфетки |
| Марлевые салфетки |
| Чистые пробирки |
| 0,85 % раствор хлористого натрия |
| Коробку с перчатками |
| Спирт 70% |
| Ветошь |
Эталон ответа к билету № 11
Задача № 1
1.
| Гемоглобин М Ж | 130,0-160,0 120,0-140,0 | г/л | |||
| Эритроциты М Ж | 4,0-5,0 3,9-4,7 | х 1012/л | |||
| Цветовой показатель | 0,85-1,05 | ||||
| Лейкоциты | 4,0-9,0 | х 109/л | |||
| Нейтрофилы: | |||||
| Палочкоядерные | 1-6 0,040-0,300 | ‰ х 109/л | |||
| Сегментоядерные | 47-72 2,000-5,500 | ‰ х 109/л | |||
| Эозинофилы | 0,5-5 0,020-0,300 | ‰ х 109/л | |||
| Базофилы | 0-1 0-0,065 | ‰ х 109/л | |||
| Лимфоциты | 19-37 1,200-3,000 | ‰ х 109/л | |||
| Моноциты | 3-11 0,090-0,600 | ‰ х 109/л | |||
| Плазматические клетки | - - | ‰ х 109/л | |||
| Скорость (реакция) М оседания эритроцитов Ж | 2-10 2-14 | мм/ч | |||
- 4мл 0,9 % изотонического раствора натрия хлорида для подсчета числа эритроцитов;
- 5мл трансформирующего раствора для определения гемоглобина;
- 0,4 мл 3% раствора уксусной кислоты для подсчета числа лейкоцитов;
- 5% раствор цитрата натрия, набранного в капилляр Панченкова до метки Р и слитого в пробирку- для постановки СОЭ
- Краска Романовского, фиксатор Май-Грюнвальд для подсчета лейкоциттрной формулы.
3. Камера Горяева представляет собой толстое стекло со шлифованными краями, к которому притирается покровное стекло. Шлифованное стекло разделено четырьмя бороздами и поперечной канавкой. В центральной углубленной части нанесены две сетки Горяева. Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов (15х15). Большие квадраты, расчерченные вертикально и горизонтально на 16 малых квадратов, чередуются с квадратами, разделенными только вертикальными или горизонтальными линиями, и с квадратами, без линий.
Задание №2.
При определении лейкоцитов в камере Горяева получили при подсчете 100 квадратов 80 клеток.
Эталон решения:
1. Делим полученный результат на 2 . 80:2=40
2.Полученный результат делим на 10 и умножаем на 10 9.
3.Результат 4,0 * 10 9.
Оценка результата: норма.
Эталон ответа к билету № 12
Задача № 1
1) Промойте капилляр Панченкова 5 % цитратом натрия, а затем наберите ¼ капилляра цитрата натрия и поместите в центрифужную пробирку.
2) Обработайте палец пациента.
3) Проколите палец пациента скарификатором до упора.
4) Наберите кровь в капилляр Панченкова до метки "К" без пузырьков воздуха. Суженный конец капилляра оботрите ваткой от остатков крови.
5) Опустите капилляр с кровью в пробирку с цитратом и тщательно перемешайте.
6) Наберите в капилляр смесь крови с цитратом до метки "К", зажмите указательным пальцем верхнее отверстие капилляра.
7) Поставьте вертикально капилляр в штатив Панченкова, суженным отверстием надавив на одну из резинок штатива и опустив указательный палец с верхнего отверстия. Укажите время постановки реакции. Ровно через 1 час снимайте показания.
2. Ошибки при постановке СОЭ могут быть связаны с различными факторами:
- При комнатной температуре СОЭ определяется не позже, чем через 2 часа после взятия крови. В случае хранения крови при +40С, СОЭ определяется не позднее, чем через 6 часов, но перед выполнением кровь прогревают до комнатной температуры.
- Исследование СОЭ должно проводиться при 18-250С. При более высоких температурах значение СОЭ увеличивается, при низких – замедляется.
- Перед проведением анализа кровь хорошо перемешивают, что обеспечит лучшую воспроизводимость результатов.
При отсутствии резкой границы между эритроцитным столбиком и плазмой (регенеративных анемиях), над компактной массой эритроцитов образуется светлая "вуаль" в несколько миллиметров из разведенных эритроцитов
3.Клинико-диагностическое значение.
На СОЭ воздействуют многие факторы. Главными из них являются качественные и количественные изменения белков крови:
- Увеличение содержания крупнодисперсных белков (фибриногена, глобулинов) ведет к повышению СОЭ;
- Уменьшение их содержания, увеличение содержания мелкодисперсных белков (альбуминов) к ее снижению.
Помимо различных диспротеинемий на СОЭ влияют следующие факторы:
- соотношение холестерина и лецитина в плазме крови (при повышении содержания холестерина СОЭ увеличивается),
- содержание желчных пигментов и желчных кислот в крови (увеличение их количества ведет к уменьшению СОЭ),
- вязкость крови (при повышении вязкости СОЭ уменьшается),
- кислотно-щелочное равновесие плазмы крови (сдвиг в сторону ацидоза снижает, а в сторону алкалоза повышает СОЭ),
- физико-химические свойства эритроцитов:
их число (при уменьшении числа эритроцитов СОЭ повышается, а при увеличении снижается);
величина (увеличение объема эритроцитов способствует их агломерации и повышает СОЭ, уменьшение ведет к снижению СОЭ);
насыщенность гемоглобином (гипохромные эритроциты хуже агломерируют) и т.д.
Задание №2.
1. Количество гемоглобина умножаем на 3: 3*80=240
2. Полученное число делим на количество эритроцитов (первые три цифра): 240 : 310=0.77
Оценка результата: патология (гипохромия).
Эталон ответа к билету № 13
Задача № 1
1.Гемоглобин – 62 г/л- снижен
Эритроциты – 3,0х1012/л- снижены
Цветной показатель – 0,6-снижен
Лейкоциты – 24,5х109/л- увеличены
Сегментоядерные нейтрофилы –41%- снижены
Лимфобласты-2%,
Пролимфоциты -3%- в норме нет
Лимфоциты – 48%- увеличены
Моноциты –6% -снижены
Базофилы – 2%; Эозинофилы – 3%- ( базофильно-эозинофильная- ассоциация)
Тени Боткина- Гумпрехта.- в норме- нет
СОЭ – 20 мм/час
Можно предположить хронический лимфолейкоз.
2 Лейкозы заболевания крови, сопровождающиеся нарушением кроветворения, развиваются в костном мозге из стволовой кроветворной клетки или клеток-предшественников II-III классов
3.
- В костном мозге повышенное содержание бластных клеток, или появление в периферической крови бластных клеток.
- Базофильно- и эозинофильная ассоциация
- гено- и фенотипические изменения в клетках
- атипические изменения в клетках
- морфологические изменения – атипизм, анаплазия;
- цитохимические изменения– химическая анаплазия
- в крови находятся все виды клеток(молодые, созревающие, зрелые)
- анемия, тромбоцитопения
Задание №2.
Эталон решения:
1. Количество гемоглобина умножаем на 3: 3*140=420
2. Полученное число делим на количество эритроцитов (первые три цифра): 420 : 310=1,35
Оценка результата: патология (гиперхромия).
Эталон ответа к билету № 14
Задача № 1
1.Возможно уменьшение гемоглобина, уменьшение числа эритроцитов, уменьшение цветового показателя, микроцитоз.
2. Анизоцитоз- изменение эритроцитов по размеру. По диаметру эритроциты делятся на:
ž микроциты- диаметр эритроцитов меньше 7 микрон
ž макроциты - диаметр эритроцитов больше 9 микрон
ž нормоциты- диаметр эритроцитов 7-9 микрон