Оценка иммунного статуса, показания к назначению, особенности преданалитического этапа. Тесты 1-го и 2-го уровней. Принципы интерпретации результатов иммунограммы.

Все методы диагностики состояния иммунной системы можно разделить на несколько групп. Некоторые методы выполняются врачом клинической практики, другие – специалистами в области инструментальной диагностики, третьи – специалистами лабораторного профиля. В силу разнообразия используемых методов диагностика состояния иммунной системы осуществляется на многоуровневой основе.

Иммунологические методы дают возможность исследования иммунного статуса – состояние иммунной системы человека в конкретный временной промежуток. Лабораторное исследование иммунного статуса – иммунограмма.

С учетом рациональности иммунодиагностики все лабораторные тесты принято организовывать в системе тестов двух уровней. Тесты 1 уровня позволяют установить выраженные изменения иммунного статуса, тесты 2 уровня способствуют изучению механизмов развития нарушений в иммунной системе. Соответственно тесты 1 и 2 уровня различаются по стоимости, специфичности, информативности, технологичности и другим параметрам.

Тесты 1 уровня (ориентирующие) включают:*определение количества лейкоцитов и лейкоцитарной формулы *определение субпопуляционного состава лимфоцитов переферической крови(СД3 для Т-лф,СД4 для Т-хелперов, СД8 для CTL, CД 19,20,21 для В-лф, СД56/16 для NK)*оценка фагоцитарной активности нейтрофилов с расчетом ФП и ФЧ *опредление основных классов сывороточных иммуноглобулинов (IgA, IgG, IgM) *определение функциональной активности системы комплемента.

После анализа результатов тестов 1 уровня определяют тактику дальнейшего исследования иммунного статуса. Тесты 2 уровняв отличие от тестов 1 уровнгя ставят избирательно в зависимости от того, какие цели преследует проводимое иммунологическое обследование.

Тесты 2 уровня включают:*опредление маркеров функциональной активности лимфоцитов, включая адгезивные молекулы, рецепторы к цитокинам, рецептор к трансферрину и др., в зависимости от показаний. *определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) *определение функциональной активности лф в тестах пролиферации, цитотоксичности, продукции цитокинов и др..*определение субклассов Ig и титра антигенспецифических антител. При показаниях определение IgЕ (общего и антигенспецифического). *определение миелопероксидазы и других ферментных систем фагоцитов, определение хемотаксической и адгезивной способности нф и др. функциональных параметров. * определение активности альтернативного пути активации комплемента, определение концентрации и функциональной активности отдельных компонентов.

При интерпритации иммунограмм: 1.комплексный анализ иммунограммы более информативен, чем оценка каждого показателя в отдельности. 2.Полноценный клинический анализ иммунограммы можно проводить лишь в комплексе с оценкой клинической картины и данных анамнеза 3.Реальную информацию об изменении иммунограммы несут лишь сильные сдвиги показателей (20-40% от нормы и более) 4.Анализ иммунограмм в динамике (особенно в сопоставлении с клин динамикой) более информативен с точки зрения как диакностики, так и прогноза течения зб 5. Для диагностической и прогностической оценки иммунограммы важнейшее значение имеют индивид показатели нормы у данного больного 6.Первостепенную практическию значимость при оценке иммунограммы имеют соотношения показателей иммунограммы, а не их абсолютное значение

Среди лабораторных методов, используемых в целях иммунодиагностики, особое место занимают:

1) методы, основанные на детектировании клеток и молекул иммунной системы с помощью маркированных моноклональных антител (МАТ). В основе этих методов – получение с помощью гибридомной технологии моноклональных антител к конкретным молекулам. Полученные моноклональные антитела маркируют флуорохромом, радиоактивным изотопом или иным способом и, используя основное свойство антител – способность связываться с антигеном, детектируют исследуемые молекулы на отдельных клетках, биопсийных образцах тканей или в других материалах. Для детекции связывания исследуемой молекулы с МАТ нужно специальной оборудование: если МАТ маркировано флуорохромом, то регистрацию результатов осуществляют с помощью люминесцентного микроскопа, но эффективнее – с помощью проточного лазерного цитофлуориметра. Если МАТ маркированы радиоактивным изотопом, то результаты регистрируют с помощью счётчиков ионизирующего излучения, или с применением авторадиографии. Иммуноферментный метод, метод иммуноэлектронной микроскопии, иммуноцитохимии и иммуногистохимии также относятся к данной группе методов. Внедрение этой группы методов позволило проводить иммунофенотипирование для определения принадлежности клеток иммунной системы к той или иной субпопуляции, а также проводить качественное и количественное определение практически любых белковых молекул и гаптенов. Поэтому области применения этой группы методов далеко перешагнули пределы иммунодиагностики и даже медицины;

2) серологический метод. Этот метод также применяется на основе взаимодействия антиген-антитело, но в случае визуально детектируемого взаимодействия. Т.е. в тех случаях, когда взаимодействие антигена с антителом проходит как специфическую, так и неспецифическую фазу, формируя видимый невооружённым глазом макромолекулярный комплекс в виде агглютинатов или преципитатов (см. лекцию Антитела). Этот метод преимущественно используется для диагностики некоторых инфекционных заболеваний (для определения уровня антигенспецифических антител или антигенов возбудителя), для определения групп крови, а также для определения С-реактивного белка и некоторых других провоспалительных белков, циркулирующих в кровеносном русле в достаточно высокой концентрации. Серологический метод прост, не требует специального оборудования, но уступает предыдущей группе методов в точности, воспроизводимости, специфичности и разрешающей способности, поэтому постепенно утрачивает своё значение;

3) молекулярно-генетические методы (полимеразная цепная реакция – ПЦР, метод молекулярной гибридизации с использованием ДНК-, РНК-зондов, реакция секвенирования). В основе этих методов - исследование отдельных генов, детекция мутаций. Молекулярно-генетические методы применяют для подтверждения первичных (врождённых) иммунодефицитов, для определения гаплотипа главного комплекса гистосовместимости при выявлении риска развития аутоиммунных процессов, для обнаружения в биологическом материале генома микроорганизмов и др.;

4) культурально-биологические методы. Это также большая группа методов, предполагающих применение в качестве вспомогательных реагентов клеток животных (эритроцитов барана, например), микроорганизмов (для определения фагоцитарной активности часто используются стафилококки, кандиды). Кроме этого в процессе проведения исследования применяется культивирование клеток иммунной системы в лабораторных условиях. Обычно эта группа методов применяется для оценки функциональной активности клеток иммунной системы.