Перекрёстная проба (in vitro)

1 этап. Эритроциты донора, промытые 3 раза и взвешенные в физрастворе (1:1), приводятся в контакт с гепаринизированной плазмой или сывороткой крови реципиента (по 1 капле) на предметном стекле или в пробирке. Через 5 минут пробы проверяют на гемолиз и гемагглютинацию.

2 этап. Идентичен предыдущему этапу, но при проведении теста используются эритроциты от реципиента и сыворотка или гепаринизированная плазма от донора. Оценка пробы идентичная.

Перекрестная проба для собак, если позволяет время, должна быть выполнена при трех температурах 4^оС, 25^оС, 37^оС, или, по крайней мере, при 25^оС и при 37^оС.

При проведении пробы в лабораторных условиях мягкое центрифугирование – 1000 G в течение 2 мин после контакта промытых эритроцитов с сывороткой поможет демонстрации гемолиза.

Оценка реакции.

Отрицательная проба: отсутствие гемолиза и гемагглютинации свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента. Переливание крови разрешается.

Положительная проба: наличие гемолиза и (или) гемагглютинации в проводимых реакциях свидетельствует о несовместимости крови; переливание в таком случае запрещено (Hohenhaus, A. E., 1992; Wingfield, W.E., 1997; Ogilvie, G.K., Moore, A.S., 1995; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992 Kerl M.E., 1993; Wingfield, W.E., 1997; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kirby R., 1995; Crystal M.A., Cotter S.M., 1992).

Биологическая проба (in vivo).

Биологическую пробу проводят независимо от объема переливаемой крови и скорости ее введения. Проба проводится после отрицательной перекрестной пробы на совместимость

1. Контейнер с цельной кровью извлекают из холодильника и выдерживают при комнатной температуре в течение 30 мин.

2. Однократно переливается 10 мл донорской крови собачьей со скоростью 2-3 мл/мин, затем переливание прекращают и в течение 3 минут наблюдают за реципиентом, контролируя у него пульс, дыхание, общее состояние, цвет кожи, измеряют температуру тела.

Такую процедуру проделывают еще дважды. Появление в этот период даже одного из таких клинических симптомов, как озноб, тошнота или рвота, покраснение кожи, требует немедленного прекращения трансфузии и отказа от переливания.

Побочные действия.

Гемолиз. Проявляется редко. Характеризуется подъемом температуры тела, увеличением частоты сердечных сокращений и дыхания, тремором, рвотой, коллапсом. При возникновении гемолиза начинают введение кристаллоидных растворов и контролируют выход мочи.

Лихорадка. Может свидетельствовать о бактериальной контаминации крови или быть связана с антигенами лейкоцитов, ускоряющих высвобождение эндогенных пирогенов. У собак встречается редко.

Аллергические реакции. Проявляются сыпью и ангионевротическим отеком. При обнаружении данных признаков переливание прекращают и вводят глюкокортикоиды.

Токсические эффекты консерванта. Проявляются в виде быстрого снижения концентрации ионизированного кальция. Клинически это состояние характеризуется мышечным тремором, подергиванием лицевых мышц и судорогами. В этом случае трансфузию прекращают и внутривенно вводят глюконат кальция. (Hohenhaus, A. E., 1992; Wingfield, W.E., 1997; Ogilvie, G.K., Moore, A.S., 1995; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kerl M.E., 1993; Wingfield, W.E., 1997; Stone, M.S., Cotter, S.M., 1992; Kirby R., 1995; Crystal M.A., Cotter S.M., 1992).

Нормативные документы на кровь донорскую собачью, включающие качество, требование к качеству, составу и свойствам.

Требования к донорам и качество донорской крови.

При заборе вся кровь, поступающая от донора, должна пройти тщательный анализ.

Прежде всего, оценивается клиническое состояние собаки-донора.

Собака-донор должна соответствовать следующим требованиям:

- Вес выше 25 кг

- Возраст от 2 до 8 лет

- Спокойный характер

- Гематокрит выше 45 %

- Регулярная вакцинация против основных инфекционных заболеваний

- Клинически здорова по результатам осмотра.

Затем, после забора, кровь проходит полное лабораторное исследование:

Гематологическое исследование. Определяется гематокрит, гемоглобин, количество эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмма. Гематокрит должен составлять не менее 45 %, все остальные параметры также не должны иметь отклонений от нормы.

Биохимическое исследование. Измеряются основные биохимические показатели: билирубин общий, прямой, АСТ, АЛТ, мочевина, креатинин, общий белок, альбумин, щелочная фосфатаза, амилаза, глюкоза, ЛДГ, ТТГ, КФК, триглецириды, калий, натрий, кальций, магний, железо, хлор.

Исследование на инфекционные заболевания. Кровь донорская после получения обязательно обследуется на инфекционные заболевания – на вирус чумы плотоядных, вирусный гепатит и др. Кровь на должна давать положительные реакции на любые инфекционные заболевания.

Кроме того, по эпизоотологическим данным, кровь исследуется на кровопаразитарные заболевания, такие как бабезиоз, дирофиляриоз и др.

Затем, перед тем, как приступить к переливанию донорской крови, необходимо убедиться в ее пригодности к переливанию. Визуально проверяется герметичность упаковки, макроскопически оценивается качество донорской крови. Определять годность крови необходимо при достаточном освещении непосредственно на месте хранения, не допуская взбалтывания. Критериями годности для переливания являются: прозрачность плазмы, равномерность верхнего слоя эритроцитов, наличие четкой границы между эритроцитами и плазмой. При возможном бактериальном загрязнении цельной крови цвет плазмы будет тусклым, с серо-бурым оттенком, она теряет прозрачность, в ней появляются взвешенные частицы в виде хлопьев или пленок. Такая донорская кровь переливанию не подлежит.

Кроме того, показателем качества перелитой донорской крови является клиническое улучшение состояния реципиента, такие как увеличение объема циркулирующей крови, увеличение гематокрита реципиента, при коагулопатиях – уменьшение или исчезновение кровотечений, изменение цвета слизистых с бледных до розовых и слабо розовых, улучшение или появление аппетита и др.

Требования к качеству:

1. Клинически здоровые доноры
2. Соответствующие нормам показатели биохимического, гематологического, инфекционного и паразитарного исследований донорской крови.
3. Макроскопическая оценка хранящейся крови, соответствующая норме.
4. Отсутствие бактериального заражения хранимой крови.
5. Соблюдение температурного режима хранения крови (+2 +4 С).
6. Не использования крови по истечению срока хранения (21 сутки).
7. Клиническое улучшение состояния реципиента в течение 1-2 суток после переливания донорской крови.