а) Гистохимические методы основаны на специфической реакции между химическим реактивом и определённым компонентом препарата.
б) Образующийся продукт реакции имеет окраску, отличную от окраски исходного реактива.
| 1а) РНК | Реакция Браше. 1. Реактив (как отмечалось, - смесь двух красителей: метилового зелёного и пиронина. 2. а) А. Пиронин специфически окрашивает РНК в красный цвет. Б. Поэтому на препарате ядрышки (в составе ядра) и рибосомбогатые участки цитоплазмы имеют красный цвет. б) Другие структуры ядра (помимо ядрышек) - зелёные. 3. Обычно делают и контрольный препарат, который перед окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой. |
| 1б) ДНК | Реакция Фёльгена. 1. Основной реактив - фуксинсернистая кислота (реактив Шиффа). 2. ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет. |
| 2. Белки | Используются различные реакции; в том числе: а) с бромфеноловым синим (у белков - тёмно-фиолетовая окраска); б) со смесью нингидрин-реактив Шиффа (белки приобретают красный цвет). |
| 3а) Полисахариды | ШИК-реакция. 1. Реактив - Шифф-периодная кислота (выделенные буквы и составляют аббревиатуру ШИК). 2. Периодат способствует образованию в субстрате альдегидной группы, которая взаимодействует с реактивом Шиффа. 3. На препарате ШИК-положительные компоненты (например, гранулы гликогена) имеют тёмно-красный цвет. |
| 3б) Гликозамин- гликаны | Реакция с толуидиновым синим. 1. При взаимодействии толуидинового синего с веществами, содержащими много кислотных групп, наблюдается метахромазия - изменение окраски с синей на фиолетовую и красную. 2. Подобным действием обладают, в частности, компоненты аморфного вещества соединительной ткани - гликозамингликаны. |
| 4. Нейтральный жир | Реакция с суданом III (о которой уже упоминалось). Капли жира в жировой клетке окрашиваются в яркий оранжево-красный цвет благодаря растворению в них красителя. |
Просмотр препаратов
 | 1. Препарат - тонкая кишка собаки. Окраска гематоксилин-эозином. 1. На снимке мы видим внутреннюю поверхность тонкой кишки с находящимися на ней кишечными ворсинками (1). 2. а) Ядра клеток (2) - базофильны и окрашены гематоксилином в фиолетовый цвет. б) Цитоплазма (3) оксифильна и окрашена эозином в розовый цвет. |
 | 2. Препарат - белая жировая ткань. Тотальный препарат сальника. Окраска судан III -гематоксилином. 1. а) Препарат является тотальным. Это означает, что перед нами - не срез органа, а участок сальника, растянутого на предметном стекле. б) Таким образом, из 4-х перечисленных в п. 1.1.2. этапов приготовления препарата в данном случае опускаются два - уплотнение материала и приготовление среза (с последующим освобождением от уплотнителя). в) Остаются фиксация, окраска и заключение в консервирующую среду. 2. а) Жировые клетки на препарате заполнены крупными каплями жира (1), которые окрашены суданом Ш в ярко-оранжевый цвет. б) Клеточные ядра (2), окрашенные гематоксилином в фиолетовый цвет, оттеснены к периферии клетки. |
 | 3. Препарат - пластинчатая костная ткань. Поперечный срез трубчатой кости. Окраска по методу Шморля. 1. В процессе изготовления препарата костный материал подвергнут декальцинации (п. 1.1.3.3). 2. Применённый метод окраски позволяет выявить стенки костных полостей (1) и канальцев (2), окрашивающиеся в тёмно-коричневый цвет благодаря высокому содержанию здесь коллагеновых волокон. 3. В костных полостях находятся тела костных клеток (остеоцитов), а в канальцах - отростки этих клеток. |
 | 4. Препарат - срез яичника кролика. Окраска по методу Маллори. 1. В методе Маллори используются 3 красителя (п. 11.3.3), что делает картину многоцветной. 2. На снимке - женская половая клетка (ооцит), находящаяся в фолликуле яичника. 3.а) Цитоплазма (1) клетки окрашена в розовый, б) окружающая её блестящая оболочка (2) - в голубой, в) а ядра фолликулярных клеток (3) - в фиолетовый цвет. |
Электронная микроскопия
Если в световом микроскопе увеличение составляет 100-1000 раз,
то в электронном микроскопе - 10.000 –100.000 раз (и выше), т.е. примерно в 100 раз больше.
Наши рекомендации
