Современная классификация вирусов, криптограммы вирусов.

Билет 1

Современная классификация вирусов, криптограммы вирусов.

Современная классификация вирусов универсальна для вирусов позвоночных, беспозвоночных, растений и простейших. Она базируется на фундаментальных свойствах вирионов, критерии которых положены в основу современной классификации:

1.тип нуклеиновой кислоты (РНК или ДНК), ее структура;

2.наличие липопротеидной оболочки;

3.стратегия вирусного генома;

4.размер и морфология вириона, тип симметрии, число капсомеров;

5.антигенные свойства;

6.феномены генетических взаимодействий;

7.круг восприимчивых хозяев;

8.патогенность, в том числе патологические изменения в клетках и образование внутри-

клеточных включений;

9.географическое распространение;

Способ передачи.

На основании перечисленных признаков вирусы подразделяются на порядки, семейства, подсемейства, роды и виды. Деление на семейства произведено по критериям, изложенным в пунктах 1 и 2, деление на роды и виды – на основании нижеперечисленных признаков.

Криптограмма вирусов - это кодированная запись их свойств.

Она состоит из четырех пар знаков или символов:

-первая пара - тип нуклеиновой кислоты((R – РНК, D – ДНК) и количество цепочек(1,2);

-вторая - молекулярная масса нуклеиновой кислоты (в млн. Дальтон, если она фрагментирована, то пишут знак ?) и процент ее массы от молекулярной массы всего вириона;

-третья пара знаков описывает форму вириона (внешний облик) и форму нуклеокапсида(S – сферическая, U – удлиненная с параллельными сторонами и закругленным концом или концами, Е – удлиненная с параллельными сторонами и незакругленными концами, Х – сложная);

-четвертая пара описывает тип хозяина(А – актиномицеты, В – бактерии, F – грибы, I – беспозвоночные, S – семенные растения, V – позвоночные) и тип переносчика вируса(О – без переносчика, Ас – клещи, А1 – белокрылки, Аи – цикадки).

Принципы диагностики вирусных болезней животных

На первом этапе диагностики используют данные, которые можно быстро собрать непосредственно в хозяйстве. К таковым относятся:

Эпизоотологические данные, включающие сведения об охвате болезнью данного поголовья животных, скорости и территориальном распространении болезни, видах заболевших животных, динамике выявления больных, клинические признаки болезни , патологоанатомические изменения

Чаще всего на основании этих данных можно поставить предварительный диагноз, так как многие вирусные болезни имеют сходные эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения

Окончательный диагноз на вирусную болезнь в большинстве случаев может быть поставлен только с учетом результатов лабораторных исследований. В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза прежде всего зависит от правильности взятия материала (пробы) от больных и павших животных, его транспортировки, качества приготовления и техники исследования вирусного материала.

Материал для исследования следует брать как можно быстрее после проявления четких признаков болезни или не позднее 1—2 ч после клинической смерти или убоя

материал должен быть взят строго асептически;

материал должен быть немедленно законсервирован (помещен в термос с охлаждающей смесью или добавлением 50%-ного стерильного глицерина), чтобы предотвратить разрушение вирусов;

материал удобнее брать в стерильные пробирки с резиновой пробкой или во флакончики из под антибиотиков. Для исследования вполне достаточно 5—10 г материала;

на пробирках должна быть не смываемая этикетка; материал направляют с нарочным и сопроводительным письмом, в котором указывают хозяйство, вид больных животных, предварительный диагноз, вид и количество патологического материала, на что следует провести исследование, дату и фамилию врача.

В зависимости от симптомов болезни, а значит, и локализации возбудителя от больного животного может быть взят следующий материал:смывы со слизистых, содержимое пустул, кровь

От трупов патологический материал должен быть взят не позднее 1—2 ч после клинической смерти или убоя животного.

Геном

Геном флавивирусов представлен несколькими линейными одноцепочечными (+)-РНК длиной от 9,6 до 12,3 тысяч нуклеотидов. На 5'-конце содержится метилированный нуклеотид (5'-кэп).

Вирион

Заболевания

Заболевания, вызываемые представителями семейства:

•Лихорадка денге

•Японский энцефалит

•Клещевой энцефалит

•Лихорадка Западного Нила

•Энцефалит Сент-Луис

•Жёлтая лихорадка

•Гепатит C

Билет 2

Достоинства РИФ: высокая специфичность и чувствительность; простота техники постановки; требуется минимальное количество компонентов. Это экспресс-метод диагностики, так как в течение нескольких часов можно получить ответ. К недостаткам можно отнести субъективизм в оценке интенсивности свечения и, к сожалению, иногда флуоресцирующие сыворотки бывают плохого качества. В настоящее время РИФ широко применяют в диагностике вирусных болезней животных.

Достоинства ИФА: высокая чувствительность; специфичность; простота техники постановки; требуется минимальное количество компонентов; не требуется специальных приборов; оценку можно проводить визуально; возможность автоматизации, что позволяет его применять для массовых исследований; исследуемые сыворотки не требуют предварительной обработки. Это — экспресс-метод диагностики, так как в течение нескольких часов можно получить ответ.

При генитальной формепоражаются наружные половые органы. У коров эта форма болезни известна под названием инфекционный пустулезный вульвовагннит, а у быков — баланопостит. Иногда у коров развивается эндометрит, у быков может быть экзантема в области промежности и мошонки. У стельных животных плод гибнет на 3—5-й неделе после заражения, через 2—3 дня наблюдается аборт. Иногда интервал между гибелью плода и его изгнанием может быть до 10 дней. Генитальная форма у быков и коров часто протекает субклинически и иногда остается незамеченной, поэтому представляет опасность в распространении инфекции.

Энцефалитынаблюдают редко и, как правило, у молодняка в виде нервных явлений (внезапное возбуждение, буйство, нарушение координации движения, паралич конечностей). Температура тела нормальная. Животные обычно погибают через 4—5 дней после появления первых признаков болезни.

Патологоанатомические изменения. Зависят от формы болезни. Наиболее часто отмечают признаки воспалительных процессов в органах верхних дыхательных путей (ларингит, трахеит), скопление пенистой жидкости в трахее и бронхах, часто обнаруживают катаральную бронхопневмонию и гастроэнтерит. Регионарные лимфатические узлы отечны, гиперемированы, увеличены, на разрезе — сочные, с кровоизлияниями.

Билет 3

Температура: жизнедеятельность каждого микроорганизма ограничена определенными температурными границами. Эту температурную зависимость обычно выражают тремя точками: минимальная (min) температура — ниже которой размножение прекращается, оптимальная (opt) температура — наилучшая температура для роста и развития микроорганизмов и максимальная (max) температура — температура, при которой рост клеток или замедляется, или прекращается совсем. Впервые в истории науки Пастером были разработаны методы уничтожения микроорганизмов при воздействии на них высоких температур.

Лучистая энергия. В природе бактериальные клетки постоянно подвергаются воздействию солнечной радиации. Прямые солнечные лучи губительно действуют на микроорганизмы. Это относится к ультрафиолетовому спектру солнечного света (УФ-лучи), они инактивируют ферменты клетки и разрушают ДНК. Патогенные бактерии более чувствительны к действию УФ-лучей, чем сапрофиты. Поэтому в бактериологической лаборатории микроорганизмы выращивают и хранят в темноте.

Бактерицидное действие УФ-лучей используют для стерилизации закрытых помещений: операционных, родильных отделений, перевязочных, в детских садах и т. д. Для этого используются бактерицидные лампы ультрафиолетового излучения с длиной волны 200—400 нм.

На микроорганизмы оказывают влияние и другие виды лучистой энергии — это рентгеновское излучение, а-, р- и у-лучи оказывают губительное действие на микроорганизмы только в больших дозах. Эти лучи разрушают ядерную структуру клетки. В последние годы радиационным методом стерилизуют изделия для одноразового использования — шприцы, шовный материал, чашки Петри.

Ультразвук вызывает поражение клетки. Под действием ультразвука внутри клетки возникает очень высокое давление. Это приводит к разрыву клеточной стенки и гибели клетки. Ультразвук используют для стерилизации продуктов: молока, фруктовых соков.

Высокое давление. К атмосферному давлению бактерии, а особенно споры, очень устойчивы. В природе встречаются бактерии, которые живут в морях и океанах на глубине 1000— 10 000 м под давлением от 100 до 900 атм. Сочетанное действие повышенных температур и повышенного давления используется в паровых стерилизаторах для стерилизации паром под давлением.

Многие химические вещества изспользуются в медицине в качестве дезинфицирующих средств. К ним относятся фенолы, соли тяжелых металлов, кислоты, щелочи. Активность дезинфицирующих веществ не одинакова и зависит от времени экспозиции, концентрации, температуры. В качестве контрольных микроорганизмов для изучения действия дезрастворов используют S. typhi и S. aureus. Виды дезинфекций: профилактическая— для предупреждения и распространения инфекций; текущая — при возникновении эпидемического очага и заключительная — после окончания эпидемической вспышки

Некоторые химические вещества используются в качестве антисептиков. Антисептики — это противомикробные вещества, которые используются для обработки биологических поверхностей. Антисептика — это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение микробов в ране или организме в целом, на предупреждение и ликвидацию воспалительного процесса. К антисептикам относятся:препараты йода (спиртовый раствор йода, йодинол, йодоформ, раствор Люголя);соединения тяжелых металлов (соли ртути, серебра, цинка);химические вещества нитрофуранового ряда (фуразо-лидон, фурациллин); окислители (перекись водорода, калия перманганат); кислоты и их соли (салициловая, борная);красители (метиленовый синий, бриллиантовый зеленый).

Прямые методы – это методы, которые позволяют обнаружить вирус, вирусный антиген или вирусную нуклеиновую кислоту (НК) непосредственно в клиническом материале, то есть являются наиболее быстрыми (2–24 ч).

Иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), при которой применяются специфические антитела к вирусам. В результате взаимодействия антител с вирусами образуются комплексы, которые после негативного контрастирования легче обнаруживаются.

Радиоиммунный анализ (РИА). Метод основан на метке антител радиоизотопами, что обеспечивало высокую чувствительность в определении вирусного антигена.

Молекулярные методы. Первоначально классическим методом выявления вирусного генома считался высокоспецифичный метод гибридизации НК, но в настоящее время все шире используется выделение геномов вируса с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Молекулярная гибридизация нуклеиновых кислот. Метод основан на гибридизации комплементарных нитей ДНК или РНК с образованием двунитевых структур и на выявлении их

ПЦР основана на принципе естественной репликации ДНК. Суть метода заключается в многократном повторении циклов синтеза (амплификации) вирусспецифической последовательности ДНК с помощью термостабильной Taq ДНК-полимеразы и двух специфических затравок – так называемых праймеров.

Цитологические методы в настоящее время имеют ограниченное диагностическое значение, но при ряде инфекций по-прежнему должны применяться. Исследуются материалы аутопсии, биопсии, мазки, которые после соответствующей обработки окрашиваются и анализируются под микроскопом.

Для выделения вирусов используют культуры клеток, лабораторных животных, эмбрионы кур. Процесс длительный, иногда требующий проведения нескольких пассажей, прежде чем вирус будет обнаружен и идентифицирован с помощью одного или нескольких методов – в реакции нейтрализации (РН), РИФ, ИФА или ПЦР.

Серодиагностика

Серологическая диагностика, основанная на реакции антиген – антитело, может быть использована для определения как тех, так и других, и играет роль в определении этиологии вирусной инфекции даже при отрицательных результатах выделения вируса.

РСК является одной из традиционных серологических реакций и используется для диагностики многих вирусных инфекций. В реакции принимают участие две системы: антитела сыворотки больного + стандартный вирус и эритроциты барана + антитела к ним, а также оттитрованный комплемент. При соответствии антител и вируса этот комплекс связывает комплемент и лизиса бараньих эритроцитов не происходит (положительная реакция). При отрицательной РСК комплемент способствует лизису эритроцитов. Недостатком метода является его недостаточно высокая чувствительность и трудность стандартизации реагентов.ИФ метод также, как ИФА, применяется для определения антител в сыворотке.

Возбудитель инфекционного ларинготрахеита — ДНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Herpesviridae. Имеет форму икосаэдра, состоящего из 162 капсомеров и имеющего суперкапсидную оболочку. Размер вирионов достигает 200 нм.

Клинические признаки. Инкубационный период болезни в зависимости от вирулентности возбудителя, его дозы и физиологического состояния птицы составляет 2—30 дней. Течение болезни может быть острым, подострым и хроническим. В различных возрастных группах цыплят инфекционный ларинготрахеит протекает в разных формах. Конъюнктивальная форма наблюдается у 1—4 месячных цыплят и проявляется катаральным или фибринозным воспалением конъюнктивы, под третьим веком скапливаются казеозные массы, изменяется форма глаза. Гибель цыплят незначительна. Ларинготрахеальную форму болезни встречают чаще у 4 6-месячных цыплят. Она протекает остро и сопровождается кашлем, хрипами, в тяжелых случаях птица гибнет от асфиксии.

Патологоанатомические изменения. Они чаще наблюдаются в трахее. Гиперемия и кровоизлияния на слизистой, желтоватые наложения как признак фибринозного воспаления на ней суживают просвет трахеи и образуют казеозные пробки. Фибринозные воспаления могут быть обнаружены также на слизистой оболочке носа, в фабрициевой сумке, реже в кишечнике.

Гистологические изменения соответствуют картине вскрытия. В начале болезни выявляют гиперемию сосудов, дистрофию покровного эпителия и отек слизистой, в более поздние сроки — некроз, инфильтрацию слизистой и мериваскулярные кровоизлияния. Вирус размножается в эпителиальных клетках слизистой гортани, трахеи, конъюнктивы, легких, воздухоносных мешков, клоаки. Наряду с воспалительной реакцией образует внутриядерные включения. В гистиоцитах и лимфоцитах тимуса, селезенки и в фабрициевой сумке также обнаружены одиночные, крупные внутриядерные тельца-включения.

Билет 4

Изменчивость вирусов - изменение фенотипа или генотипа вирусов. Особенностью фенотипической изменчивости вирусов является ее связь с включением в состав суперкапсида липо- и гликопротеидов хозяина. Мутационный процесс у вирусов носит спонтанный и индуцированный характер, он протекает с высокой частотой (особенно у вирусов с РНК-геномом), захватывает многие признаки. Генетические рекомбинации происходят в процессе смешанной инфекции клетки-хозяина. Они возникают в результате физ. интеграции частей разных вирусных геномов (генетическая рекомбинация, перераспределение, реактивация, гетероплоидия) или временного использования одним вирусом белка, кодируемого др. вирусом (комплементация, фенотипическое смешивание).

Нуклеиновые кислоты у вирусов очень подвержены мутациям, если говорить иным языком, то они подвержены внезапным наследуемым изменениям. Вся сущность подобных процессов заключается именно в нарушениях генетического кода в форме изменений нуклеотидных последовательностей, затем их выпадений (делеций), перестановок или вставок нуклеотидов. Подобные нарушения ограничиваться могут отдельными нуклеотидами либо распространяться на наиболее значительные участки.

Если говорить о мутациях, повышающих или снижающих патогенность, то можно разделить их на:

Билет 5

Подготовка вируссодержащего материала для исследования.

В лаборатории полученный патматериал освобождают от консерванта, оттаивают, отмывают от глицерина, взвешивают или измеряют. Часть материала берут для вирусологических исследований, оставшуюся часть хранят в холодильнике на случай дополнительных исследований. Затем составляют план исследований присланного материала.

Подготовка органов и тканей. \Вирус необходимо высвободить из клеток органов и тканей и перевести в фосфатный буфер или раствор Хенкса. Для этого материал тщательно измельчают ножницами и растирают в ступке со стерильным кварцевым песком. Из растертого материала обычно готовят 10%-ную суспензию на фосфатном буфере или растворе Хенкса. Полученную суспензию центрифугируют при 1500-3000 мин, надосадочную жидкость отсасывают в стерильные флаконы и освобождают от микрофлоры. Следует избегать излишне больших доз антибиотиков, так как их избыток при дальнейшем внесении в культуру клеток может вызвать неспецифическую дегенерацию последних. Предпочтительность тех или иных доз антибиотиков и оптимальный режим центрифугирования в каждом конкретном случае указываются в инструкции по диагностике соответствующих вирусных болезней. Экспозиция суспензии с антибиотиками не менее 30-60 минут при комнатной температуре, затем материал подвергают бактериологическому контролю на наличие бактерий, грибов путем посева на МПА, МПБ, МППБ и среду Сабуро. После получения отрицательного результата бактериологического контроля вируссодержащий материал используют для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов или культур клеток. В случае положительного бактериологического контроля суспензию вируса подвергают дополнительной обработке антибиотиками и повторно ставят контроль. Суспензию хранят при минус 20°С - минус 70 °С.

Подготовка выделений из носа, глаз. \Тампоны, погруженные в соответствующий раствор, встряхивают 10-15 мин, тщательно отжимают, полученную жидкость центрифугируют 20 мин при 2-3 тыс. мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку и в нее добавляют пенициллин и стрептомицин по 500-1000 ЕД. на 1 мл, выдерживают и после бактериологического контроля используют для заражения. Из осадка клеток готовят мазки для РИФ.

Подготовка фекалий.\Пробу кала (приблизительно 1 г) помещают в баночку с бусами, содержащую 10 мл раствора Хенкса или фосфатно-буферного раствора. После гемогенизации материала встряхиванием и последующего центрифугирования при 2-3 тыс. мин в течение 30 мин надосадочную жидкость отсасывают, добавляют пенициллин, стрептомицин по 500-1000 ЕД./мл, нистатин 30 ЕД./мл и 200 мкг тетрациклина на 1 мл. После 30-60-минутного контакта производят посев па стерильность, замораживают и хранят при минус 10°С - минус 20°С. В день заражения исследуемый материал оттаивают и повторно центрифугируют для удаления вновь образующегося после замораживания осадка. Неиспользованный материал хранят в замороженном состоянии до конца исследования. Исследование кала может быть заменено ректальными мазками, обработка которых требует меньше времени, а частота выделения вируса при этом не только не меньше, но иногда выше, чем при исследовании кала. Мочу обрабатывают антибиотиками (500-1000 ЕД/мл) и используют для заражения. Содержимое папул, пузырьков и пустул, чешуйки и корки исследуют при кожных высыпаниях. Содержимое папул и пузырьков разводят физиологическим раствором 1:5, а корки, чешуйки после растирания суспендируют в солевом растворе 1:5-1:10 и центрифугируют при 2-3 тыс. мин в течение 10-15 мин. После обработки пенициллином и стрептомицином (по 200-500 ЕД./мл) материал используют для заражения.

Подготовка крови. \Для выделения вируса может быть использована либо цельная дефибринированная, либо «лакйовая» кровь, либо кровь с антикоагулянтом. В последнем случае берут 5 мл крови в пробирку с 5-6 каплями гепарина и замораживают. После оттаивания гемолизированную кровь центрифугируют при 2-3 тыс. мин в течение 15 мин, добавляют пенициллин и стрептомицин из расчета 100-200 ЕД./мл и после проверки на стерильность используют для заражения. Для этих целей пригодна и свернувшаяся кровь. Ее растирают в ступке и добавляют небольшое количество раствора Хенкса (1:1 или 1:2).

Титр вируса.

Единицы количества вируса (ООЕ, БОЕ, ГАЕ, ЛД50, ЭЛД50, ИД50, ЭИД50, ЦПД50) .\\\Титр вируса — это количество вируса, содержащееся в единице объема материала. Поскольку количество вируса невозможно выразить в обычно применяемых (объем, масса и т. п.) единицах, прибегают к измерению в единицах действия или единицах активности. Вирусы обладают инфекционным и гемагглютинирующим действием. Отсюда и единицы количества вирусов инфекционные и гемагглютинирующие. ЛД50—это доза вируса, убивающая 50 % лабораторных животных (обычно белых мышей);\ИД50—доза вируса, вызывающая клинические симптомы или патологоанатомические изменения у 50 % зараженных лабораторных животных;\ЭЛД — доза вируса, убивающая 50 % куриных эмбрионов;\ЭИД50—доза вируса, вызывающая патологоанатомические изменения у 50 % зараженных куриных эмбрионов;\ЦПД50— доза вируса, вызывающая цитопатический эффект у 50 % зараженных культур клеток (обычно пробирок с культурами клеток). Количество ЭД50 (ЛД50, ИД ЭЛД50, ЭИД50 или ЦПД50) вируса, содержащееся в единице объема вируссодержащего материала, и будет выражением титра (Т) вируса в этом материале. Например, Т=103,48 ЦПД50/0,1 мл означает, что в каждой 0,1 мл вируссодержащего материала содержится 103'48 доз вируса (т. е. более 1000, но менее 10 000, а именно 103,48=3020), каждая из которых способна вызвать цитопатический эффект в 50 % пробирок с культурой клеток.\Известны способы определения количества вируса в исследуемом материале по локальным повреждениям в зараженных культурах клеток и на хорион-аллантоисной оболочке (ХАО) куриных эмбрионов, в которых количество вируса учитывают в бляшкообразующих единицах (БОЕ), оспообразующих единицах (ООЕ). Однако использование методов затруднено в связи с тем, что при высокой концентрации вируса в исследуемом материале избежать слияния бляшек невозможно и соответственно невозможно провести количественную оценку [4]. Метод выполняют с живым вирусом, он трудоемкий и длительный по исполнению (72-96 часов).

Наиболее крупным белком в вирионе является гемагглютинин (Н), который отвечает за прикрепление вирусной частицы к клетке хозяина. Именно против него направлены антитела, нейтрализующие инфекционность вируса гриппа. Второй поверхностный антиген вируса - нейраминидаза (N),предотвращает агрегацию вирусных частиц на поверхности клеток. На основании гемагглютинина вирусы гриппа птиц разделены на 13 подтипов, а нейраминидазы — на 9 подтипов. Наиболее патогенными являются подтипы Н5 и Н7. Вирусы гриппа индуцируют в организме больной и переболевшей птицы антитела, обладающие антигемагглютинирующими и комплементсвязывающими свойствами. Относятся к роду А.

Вирус пантропен. Может быть обнаружен во многих органах и тканях больной птицы, выделяется с выдыхаемым воздухом и фекалиями.Вирусоноситель-ство — в течение 2 мес. Все вирусы гриппа агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, кроликов, лошадей и других животных.

Культивирование вируса. Вирусы гриппа хорошо размножаются в куриных эмбрионах при заражении в аллантоисную или ам-ниотическую полость и вызывают их гибель через 26—36 ч. Одни штаммы вируса гриппа птиц после адаптации размножаются в культуре клеток фибробластов куриных эмбрионов, почек обезьян, другие — в диплоидных культурах клеток человека,в миело-бластах цыплят, в первичных культурах клеток лёгких эмбриона человека. Большинство штаммов вируса дают бляшки в первичной культуре клеток фибробластов.

Билет 6

Вирусные включения – скопление вирусных частиц или отдельных компонентов вирусов в цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Включения различаются по величине, форме, численности. Характерные ядерные включения формируются в клетках, зараженных вирусами герпеса, аденовирусами, гриппа, бешенства, оспы и др.

3. Бляшки, или негативные колонии – ограниченные участки, состоящие из дегенеративных клеток, которые вирусы способны образовывать в монослое клеток под агаровым покрытием. Они видны невооруженным глазом как светлые пятна на фоне прижизненно окрашенных нейтральным красным клеток. Одна бляшка соответствует потомству одного вириона. Негативные колонии разных вирусов отличаются по размеру, форме. Бляшкообразование используют для дифференциации, селекции вирусов, а также для определения их концентрации в исследуемом материале. Титр вируса, установленный этим методом, выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл.

Цветная» проба. Если вирусы не размножаются в культуре клеток, то живые клетки в процессе своего метаболизма выделяют кислые продукты, что ведет к изменению рН среды и цвета индикатора фенолового красного на желтый. При продукции вирусов нормальный метаболизм клеток нарушается, клетки гибнут, и среда сохраняет свой первоначальный (красный) цвет. Таким образом, красный цвет среды указывает на наличие вируса и прекращение жизнедеятельности клеток.

Гемадсорбция – способность культур клеток, инфицированных вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты определенных видов животных и птиц. Гемадсорбция проявляется скоплением в виде гроздей эритроцитов, адсорбированных на инфицированных вирусом клетках.

Интерференция – некоторые вирусы можно обнаружить в культуре ткани только по наличию интерференции. Испытуемый вирус вводится в культуру клеток первым, через несколько дней туда же вносят стандартную дозу вируса, обладающего выраженной цитопатической активностью или способностью вызывать гемадсорбцию. После определенного инкубирования проверяют наличие цитопатических изменений или гемадсорбции, подтверждающих размножение «выявляющего» вируса. Отсутствие в культуре «выявляющего» вируса говорит о наличии испытуемого вируса.

Грипп лошадей

Грипп лошадей, или инфлюэнца, – острая высококонтагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся угнетением, гипертермией (повышением температуры тела), слезотечением, кашлем, гиперемией и отечностью слизистых оболочек глаз, носа и трахеи. Болеют лошади всех возрастов.Возбудитель заболевания – вирусы из семейства ортомиксовирусов рода Инфлюэнца. Установлено, что в природе происходит обмен вирусами между человеком и лошадью, причем вирус гриппа лошади способен преодолевать барьер и вызывать инфицирование человека. Однако проявление гриппа лошадей у человека варьирует от бессимптомного до клинически слабо выраженного. Отмечается также родство между вирусами гриппа лошадей и некоторыми типами вируса гриппа птиц.Основной источник возбудителя инфекции – больное или переболевшее животное. Вирус выделяется во внешнюю среду с носовым секретом зараженных особей во время кашля. Возможна и непрямая передача микроба с кормом, водой, обслуживающим персоналом. Быстрому распространению вируса в табуне способствует наличие неиммуннизирован-ных лошадей.Инкубационный период болезни составляет 5–7 сут. Грипп проявляется внезапно. Животные безучастно стоят в денниках, в большинстве случаев отказываются от корма, их волосяной покров взъерошен. Затем температура тела повышается до 40–41 °C и может сохраняться несколько дней, появляется прерывистый, часто повторяющийся кашель с мокротой (наблюдается в течение 2-10 сут), переходящий в сухой, резкий, частый и болезненный. У больных лошадей слизистая оболочка носа кирпично-красного цвета, прозрачные истечения из носовой полости и глаз.Переболевшие животные приобретают иммунитет к повторному заражению таким же типом вируса продолжительностью не менее года. Жеребята могут иметь пассивный иммунитет от вакцинированных матерей.Диагноз ставят на основании клинических, эпизоотологических данных и лабораторного исследования крови.Лечение заключается в проведении ингаляций со скипидаром, 2 %-ным раствором натрия бикарбоната, гидрокарбоната и др. При осложнении используют сульфаниламиды, антибиотики (например, бензилпенициллин по 900 000 ЕД в 5 мл 0,5 %-ного раствора новокаина 2 раза в день), химиопрепараты (амантадин и его производные) и симптоматические средства лечения. Рекомендуется проводить аутогемотерапию (введение собственной крови) подкожно по 60 мл крови, через 2–3 дня повторив с увеличением дозы на 20 мл.Профилактика гриппа лошадей заключается в создании оптимальных условий содержания и кормления животных, карантинировании вновь прибывших особей, введении инактивированных формолвакцин (иммунитет от них не превышает 4–6 мес). Больных лошадей изолируют, освобождают от работы и тренировок, обеспечивают легкоперевариваемыми кормами и теплой водой. Переболевших животных в работу вовлекают постепенно. Патогенез. Легкие лошадей имеют особенности строения, которые отчасти обусловливают характер поражений при вирусных респираторных заболеваниях. Вирусы гриппа обладают выраженным тропизмом к эпителию дыхательных путей, особенно клеткам цилиндрического эпителия нижней носовой раковины и трахеи. Проникнув в них, вирус начинает интенсивно репродуцироваться, вызывая дистрофию, некроз, слущивание эпителия. Поврежденная слизистая оболочка становится проницаемой для вирусов, вовлекается подлежащая ткань с сосудистой сетью. В результате разрушения клеток развивается реактивное воспаление, что, однако, не препятствует дальнейшему прогрессированию инфекции. Процесс распространяется на нижние отделы респираторного тракта: развиваются эрозивный бронхит, перибронхит, периартериит, бронхопневмония. Могут возникать поражения и других органов — миокардит, энцефалопатия. Хотя вирусы гриппа довольно быстро разрушаются в организме, их токсичные субстанции, продукты распада клеток, бактерии устремляются в кровеносное русло, в результате чего возможны полнокровие, стазы, кровоизлияния. Существенные нарушения свертывающей и фибринолитической систем усугубляют развитие геморрагического синдрома. Синергизм перечисленных процессов способствует усилению протеолитической и цитотоксической активности вируса, деструкции капиллярных стенок, генерализации инфекции, развитию сливных пневмоний с отеком легких. Выделяющийся из клеток вирус поражает новые участки эпителия, и в патологический процесс вовлекается обширная поверхность слизистой оболочки. При слабой резистентности макроорганизма развивается вторичная инфекция с участием различных бактерий. У жеребых кобыл вследствие интоксикации может наступить гибель плода. В ответ на размножение вируса гриппа возникают специфические иммунные реакции организма, продуцируются местные антитела к вирусу, которые играют ведущую роль в защите организма при гриппозной инфекции.

Билет 7

Культуральные вакцины готовят из зараженных культур клеток или переживающих тканей, при этом применяют роллерный (используют вращающиеся бутыли) или суспензионный (глубинный — используют реакторы) методы культивирования клеток и тканей.

Гомологические вакцины готовят из того вида вируса, против которого предполагается создать иммунитет, например, вакцины против вирусной диареи, чумы крупного рогатого скота, бешенства и др

Семейство герпесвирусов включает более 80 ДНК-содержащих вирусов, классифицированных на основе строения вериона. Эти вирусы инфицируют широкий круг хозяев: человека, обезьян, многие виды домашних животных, грызунов, птиц, пресмыкающихся, земноводных и рыб; сходные по морфологии вирусы обнаружены у моллюсков и грибов. Герпесвирусная инфекция человека и животных вызывает различные поражения центральной нервной системы (энцефалит, миелит, энцефаломиелит), глаз (кератит, кератоконъюктивит), слизистых оболочек ( стоматит, афтозные язвы, поражение гениталий) и кожных покровов (экзема, везикулярные воспаления).

Из патогенных для животных и человека вирусов в состав семейства Herpesviridae входят вирусы: болезни Ауески, ринотрахеита крупного рогатого скота, ринопневмонии (вирус аборта) лошадей, ринотрахеита кошек, болезни Марека, герпесвирусы человека и крупного рогатого скота.

Билет 8

Вируснейтрализующие антитела и антигемагглютинины, содержащиеся в кровяном русле, подавляют инфекционные свойства вируса. Противовирусные антитела, циркулирующие в крови, взаимодействуют только с внеклеточным вирусом и не влияют на репродукцию вируса в клетке. Вместе с тем способность, некоторых вирусов изменять иммунохимическую специфичность своих поверхностных белков препятствует их нейтрализации антителами. Такой механизм самозащиты характерен главным образом для вируса гриппа.

Возбудители хронических вирусных инфекций, которые длительно персистируют в организме, постоянно вызывая вирусемию, репродуцируются в клетках иммунной системы организма — лимфоцитах и макрофагах. Это приводит к резкому подавлению неспецифических и специфических факторов защиты, а также к развитию иммунопатологических состояний.

Возбудители латентных вирусных инфекций способны на длительное время «скрыться»от нейтрализующего действия антител в клетках нервных ганглиев спинного мозга, тройничного нерва. К таким вирусным агентам относятся вирусы герпеса, ветряной оспы, кори. Периодически покидая свое «укрытие», они вызывают рецидивы заболевания.

Билет 9

Процесс репродукции вирусов условно делят на две фазы. Первая фаза включает в себя три стадии: 1.Адсорбция вируса на поверхности клетки. 2.Проникновение вируса в клетку. 3.Раздевание вируса в клетке. Вторая фаза репродукции вирусов включает пять стадий: 1.Транскрипция. 2.Трансляция иРНК. 3.Репликация генома вирусов. 4.Сборка вирусных компонентов. 5.Выход вируса из клетки.

2) 65 Определение титра вируса по образованию бляшек и оспин.

Из локальных повреждений, вызываемых вирусами, наиболее известны бляшки (островки мертвых, не окрашенных клеток в слое окрашенных живых) в зараженных культурах клеток, залитых агаровой средой с красителем нейтральрот и оспины (некротические узелки) на ХАО куриных эмбрионов, зараженных оспенными и некоторыми другими вирусами. Количество вируса при этом может быть измерено, соответственно, в бляшкообразуюших единицах (БОЕ) и оспообразующих единицах (ООЕ): 1 БОЕ = доза вируса, вызвавшая образование одной бляшки; 1 ООЕ = доза вируса, вызвавшая образование одной оспины. Методика определения титра вируса в БОЕ (ООЕ) заключается в следующем:

Семейство Paramyxoviridae

(от греч. para — около и myxa — слизь) — группа вирусов, поражающая позвоночных, как правило, млеко<