Дальнейшее действие с биологическим материалом

Исследуемые материалы высевают на питательные среды. Для выделения и накопления микроорганизмов применяют консервирующие среды (глицериновая смесь), среды обогащения (щелочная пептонная вода) и элективные, избирательные среды (желчный бульон). В ряде случаев питательные среды применяют для определения микроорганизмов (Эндо, Левина, Плоскарева – для диагностики кишечных бактерий).

В дальнейшем лаборанты, используя специальную методику посева, получают отдельные колонии. Для культивирования микроорганизмов используются различные питательные среды: простые (мясопептонный бульон, агар) и сложные (сывороточная среда).

Характер роста микроорганизмов (культурные свойства) является одним из критериев для их распознавания. Значение имеют величина, форма, консистенция, плотность, цвет, поверхность колоний на плотных питательных средах, а в бульоне - наличие мути, осадка и плёнки.

Одним из основных диагностических методов при распознавании микроорганизмов является изучение их биохимических свойств.

Особое значение это имеет при диагностике кишечных инфекций. Изучается способность микроорганизмов сбраживать углеводы с образованием кислоты или кислоты с газом, разлагать белковые продукты, способность образовывать каталазу и др. Для обнаружения всех свойств материал помещают на дифференциально-диагностические среды, содержащие вещества, в отношении которых микроорганизмы проявляют свою ферментативную активность. Добавление в среду индикаторов меняющих цвет среды и дает возможность легко узнавать результаты. Этот метод бактериологической диагностики называется - ''посев на пестрый ряд».

Обнаружение возбудителей вирусных инфекций имеет свои особенности, обусловленные особенностями вирусов – внутриклеточным паразитированием. Для культивирования вирусов используют куриные эмбрионы и культуры тканей. Чаще применяют куриные эмбрионы на 8-12 день инкубации. Материал вводят в амниотическую полость, желточный мешок или на оболочки. Зараженные яйца помещают в инкубатор на 3-10 дней. Срок инкубации зависит от вируса, способа заражения и цели исследования.

Культурами тканей называют смесь клеток, которые способны существовать вне организма. Вирусы культивируются во всех культурах тканей. В культуре тканей вирусы определяются по целому ряду признаков и показателей.

Алгоритмы забора биологического материала на серологическое и иммунологическое исследование

Серологическими называют такие методы (реакции) исследования при которых используется сыворотка крови больного содержащая антитела или

токсины микроорганизмов и специальные диагностики, в которых содержатся токсины известных микроорганизмов или известные иммуноглобулины.

Серологические методы лабораторной диагностики были предложены в 1886 году французом Видалем для диагностики брюшного тифа (РА). Реакция была основана на обнаружении специфических О и Н антител в сыворотке крови больного брюшным тифом.

При длительно текущих болезнях для более достоверного получения данных применяют метод «парных сывороток», то есть одну и туже реакцию проводят дважды и сравнивают полученные результаты.

В настоящий момент применяют более чувствительные методы серологического исследования, позволяющие обнаружить в крови антител в 10 раз меньше содержания. Эти реакции дают положительный результат в 82%.

Важнейшее место в диагностике занимает иммунно-флюоресцентный метод (ИФ).

Этот метод позволяет выявить возбудителя в исследуемом материале без выделения его в питательной культуре, но, к сожалению, он применяется редко, т.к. дорогостоящ и сложен по проведению.

С помощью серологических реакций идентифицируются микроорганизмы, токсины, а природу антитела в крови больного определяют с помощью известного диагностического антигена.

Основными серологическими реакциями являются:

1. Реакция агглютинации;

2. Реакция преципитации;

3. Реакция связывания комплемента;

4. Реакция иммуно-флооресценции;

5. Реакции лизиса;

6. Реакция нейтрализации вирусов на культуре клеток;

7. Реакция торможения гемоагглютинации;

8. Реакция иммуноферментативного анализа;

9. Реакция иммуноблотинга.

Общие закономерности серологических реакций:

1. Реакции ставят вне организма человека