Лабораторная диагностика

Стафилококки

Род Staphylococcus состоит из 27 видов, из них 3 основных: S. aureus, S. еpidermidis, S. saprophyticus.

Морфология.

• Сферическая форма, гроздевидное расположение (греч. – staphylos – гроздь).

• Спор нет.

• Неподвижны.

• Грамположительны.

• Имеют капсулу (in vitro не образуется)

Культуральные свойства.

- Неприхотливы к питательным средам.

- Устойчивы к NaCl (5-10 %)

- На кровяном агаре дают β-гемолиз

- На желточном агаре – радужные венчики помутнения (лецитиназа+),

- Колонии S.aureus круглые, гладкие, имеют пигмент золотистого цвета; S. epidermidis образует более мелкие белые колонии; S. saprophyticus – крупные, эмалевые, белого, реже лимонно-желтого цвета.

Биохимическая активность

• Восстанавливают нитраты

• Образуют Н2S

• Разлагают мочевину

• Углеводы до К в анаэробных условиях

• Каталаза (+)

• Оксидаза (-)

Антигены.

- Родовые Аг – пептидогликан, капсула

- Видоспецифические – тейхоевые кислоты (S. aureus – рибитолтейхоевые, для S. epidermidis – глицеринтейхоевые, S. saprophyticus имеет 2 типа кислот.), белок А (только для S. aureus)

- Типовые

Факторы патогенности.

1. Структуры клетки:

• Капсула – подавление фагоцитоза

• Белок А – Взаимодействие с Fc-фрагментом антител, сенсибилизация

• Пептидогликан – Стимуляция продукции эндогенных пирогенов, хемоатрактант лейкоцитов (абсцесс)

• Тейхоевые кислоты – связывают фибронектин

1. Токсины:

• Мембранотоксины, или гемолизины (альфа-, бета-, гамма-, дельта-токсины),

• Лейкоцидин – цитотоксическое действие на Нф и Мф.

• Эксфолиативный токсин (А,В) – (TSST-суперантиген) вызывает синдром «ошпареной кожи», разрушая клеточные контакты – десмосомы в гранулярном слое эпидермиса. За счет резкой стимуляции выделения ФНО-a и ИЛ-I. Суперантиген.

• Токсин синдрома токсического шока – нейротропные, вазотропные эффекты. Суперантиген.

• Энтеротоксины (А-Е) – действие на энтероциты (пищевая интоксикация). Нейротропные эффекты. Суперантиген.

1. Ферменты:

• Плазмокоагулаза – перевод фибриногена в фибрин, препятствующему контакту с фагоцитами.

• Гиалуронидаза – разрушение соединительной ткани

• Липаза, лецитиназа – гидролиз липидов, лецитина

• Фибринолизин – разрушение фибриновых сгустков

• Дезоксирибонуклеаза – расщепление ДНК, расжижение гноя

1. Другие компоненты:

• Кератиноидные ферменты – инактивация бактерицидных форм кислорода

• Устойчивость с NaCl, жирным кислотам – размножение в потовых и сальных железах

Резистентность.Очень устойчивы. УФО убивает за 10-12 часов (защищает пигмент), кипячение за секунды. Устойчивы к NaCl, жирным кислотам, кислой рН. (обеспечивает питание на коже). Внутрибольничные штаммы (особенно S. aureus) характеризуются повышенной устойчивостью к антибиотикам, антисептикам и дезинфектантам.

Характеристика заболеваний.

Источники инфекции: больные, медперсонал. Механизм передачи: контактный, аэрозольный, алиментарный.

S. aureus вызывает:

• Местные нагноительные процессы

• Заболевания костей и суставов

• Поражения внутренних органов. Пневмонии (у детей и пожилых людей), поражения почек (пиелонефрит), цистит (часто S. epidermidis и S. saprophiticus)

• Перитонит. После операций на органах брюшной полости.

• Поражения ЦНС

• Сепсис. Септикопиемия.

• Синдром токсического шока.

• Синдром «ошпаренных младенцев». У новорожденных детей (инфицирование через пупочную вену) происходит отслоение кожи с пузырями, интоксикация. У старших детей – синдром «ошпаренной кожи» (эритема, пузыри, интоксикация).

• Пищевые отравления.

S.epidermidis может быть причиной гнойно-воспалительных процессов у лиц пожилого возраста, конъюнктивитов новорожденных, послеоперационных эндокардитов.

S.saprophyticus – сапрофит, но при ослаблении иммунитета может вызывать воспалительные процессы, послеоперационные нагноения ран.

Иммунитет.

• Естественный – выражен при неповрежденных покровах и нормальном иммунном статусе (например, для полости носа важно содержание sIg A)

• Приобретенный

– малонапряженный

– типоспецифический

– нередко – сенсибилизация

– протективные антитела к α-токсину, антимикробные к пептидогликану, протену А, тейхоевым кислотам, антиферментные.

– в процессе жизни происходит бытовая иммунизация

– наличие sIgA слизистых оболочек

Лечение.Антибиотики. Антисептики – при местных процессах.Антитоксические иммунопрепараты (иммунная плазма, иммуноглобулин). Видовой бактериофаг (местно). Аутовакцина (при рецидивирующих инфекциях).Поливакцина – для терапии хронических респираторных заболеваний (белково-ЛПС комплекс из антигенов S. aureus, P. vulgaris, E. coli, K. pneumoniaе).Иммуностимуляторы.

Специфическая профилактика.

а) Стафилококковый анатоксин.

б) Ассоциированная стафило-протейно-синегнойная вакцина (Содержит концентрированные анатоксины стафилококка и синегнойной палочки, цитоплазматические АГ стафилококка и химическую протейную вакцину.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования – гной, кровь, мокрота, моча.

1. Бактериоскопический метод имеет ориентировочное значение.

2. Бактериологический метод – выделение чистой культуры и ее идентификация. Материал засевают на МЖСА, ЖСА и кровяной агар. Проводят учет лецитиназы, пигмента, гемолиза. В колониях бактерий, выросших на МЖСА выявляют каталазу, что позволяет отдифференцировать семейство Staphylococcaceae от семейства Streptococcaeae; так у стафилококков каталаза имеется, а у стрептококков отсутствует.

Устанавливают принадлежность бактерий к роду Staphylococcus. Стафилококки образуют пигмент, обладают лецитиназой, гемолитической, каталазной активностью, являются факультативными анаэробами, а микрококки – облигатные аэробы. Поэтому стафилококки способны расти и ферментировать глюкозу в анаэробных условиях (отмечается посинение в столбике среды под слоем вазелинового масла.

Проводят видовую идентификацию стафилококков. Ведущий тест патогенности S.aureus – продукция плазмокоагулазы. Проводят посев культуры в цитратную плазму крови кролика. Отмечается коагуляция плазмы через 2-18 часов. При отрицательной реакции плазмокоагуляции ставят дополнительные тесты на наличие ДНКазы, чувствительность к новобиоцину, определяют фосфатазу. Для S.epidermidis характерны следующие тесты: чувствительность к новобиоцину, наличие фосфатазы, отсутствие окисления маннита; для S.saprophyticus – противоположные свойства.

Определение чувствительности к антибиотикам. При необходимости по эпидпоказаниям осуществляют фаготипирование. С целью эпидемиологического типирования изучают плазмидный профиль S.aureus: большие 2•10⁷ Да плазмиды кодируют образование бета-лактамаз и резистентность к эритромицину. Мелкие (3•10⁶ Да) плазмиды кодируют резистентность к тетрациклинам и хлорамфениколу.

3. Серологические методы. Для оценки состояния антитоксического иммунитета у больных определяют уровень антитоксических АТ по лизису эритроцитов крови альфа-токсином. АТ к тейхоевым кислотам стафилококков определяют методом ИФА.

Стрептококки

Морфология.

· Клетки сферической или ланцетовидной формы. Расположены цепочкой или попарно.

· Неподвижны

· Спор нет.

· У некоторых видов есть капсула.

· Грамположительны.