Работа № 2. Микрофлора желудочно-кишечного тракта
Цель: изучить микрофлору толстого кишечника (см. теоретическую справку).
Задача:
В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, энтерококкагар, Блаурокка. Через 24 часа на всех средах наблюдался рост характерных колоний.
Самостоятельная работа
оценить результат анализа кала на дисбактериоз, сделать вывод о качественном и количественном составе микрофлоры толстого кишечника. При выявлении дисбактериоза рекомендовать препараты для нормализации кишечного микробиоценоза.
Результаты микробиологического исследования кала на дисбактериоз:
№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть)
от «_____»_________________20_____г.
Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________
возраст___24 года_____________________________________________
Диагноз______________________________________________________
Откуда направлен______________________________________________
| Микроорганизмы | Количество микроорганизмов в 1 гр. фекалий | |||
| норма до 1 г | Норма от 1г до 60 л | норма старше 60 л | у пациента | |
| Патогенные энтеробактерии | нет | нет | нет | |
| E. coli с нормальной ферментативной активностью | 107 - 108 | 107 - 108 | 107 - 108 | 103 |
| E. coli лактозонегативные | < 105 | < 105 | < 105 | |
| E. coli гемолитические | нет | нет | нет | нет |
| Другие условно-патогенные энтеробактерии: | < 104 | < 104 | < 104 | < 104 |
| Неферментирующие бактерии | ≤ 103 | ≤ 104 | ≤ 104 | |
| Энтерококки | 105 - 107 | 105 - 108 | 106 - 107 | 105 |
| Стафилококк золотистый | нет | Нет | нет | |
| Стафилококки (сапрофитный, эпидермальный) негемолизирующие | ≤ 104 | ≤ 104 | ≤ 104 | ≤ 103 |
| Бифидобактерии | 1010 -1011 | 109 - 1010 | 108 - 109 | 107 |
| Лактобактерии | 106 - 107 | 107 - 108 | 106 - 107 | 106 |
| Лактострептококки | 107 - 108 | 107 - 108 | 107 - 108 | 108 |
| Грибы | ≤ 103 | ≤ 104 | ≤ 104 | ≤ 104 |
| Клостридии | ≤ 103 | ≤ 105 | ≤ 106 | ≤ 105 |
| Прочие микроорганизмы |
Вывод:
_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 3. Урогенитальная микрофлора
Цель: изучить микрофлору влагалищного секрета по готовым препаратам-мазкам.
Самостоятельная работа: микроскопировать препараты-мазки, приготовленные из влагалищного секрета и окрашенные по Граму. Результаты внести в таблицу (см. теоретическую справку).
| Критерии чистоты влагалища | степень чистоты влагалища | |||
| I | II | III | IV | |
| 1. Палочка Додерлейна 2. Кокки 3. Гр- палочки 4. Грибы - кандида 5. Микоплазмы 6. Простейшие 7. Клетки плоского эпителия 8. Лейкоциты |
Вывод: _______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Подпись преподавателя_______________________________________________________
Самостоятельная работа студента во внеурочное время:
Ответить на вопросы:
Виды микрофлоры:
1. Облигатная -_____________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2. Транзиторная -___________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
Микрофлора кожи:
Облигатная_______________________________________________________________________
Транзиторная_____________________________________________________________________
Методы санитарно-биологического исследования кожи:
1_______________________________________________________________________________
2_______________________________________________________________________________
Микрофлора желудка содержит________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Микрофлора тонкого кишечника содержит________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Облигатная часть микрофлоры толстого кишечника представлена:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
Транзиторная часть микрофлоры толстого кишечника представлена:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
Методика исследования фекалий на дисбактериоз_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Пробиотики- это______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
Микрофлора уретры мужчин представлена__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Микрофлора влагалища представлена__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Подпись преподавателя _____________________________________________________
Теоретическая справка
К работе № 1
Характеристика микрофлоры кожи
Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время мытья тела человека с кожи смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается из микробов, находящихся на поверхности и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез).
На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут.
Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Неповрежденные кожные покровы для большинства микроорганизмов, в том числе и патогенных, непроходимы. При нарушении целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами.
Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды – из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.).
На поверхности кожи обнаруживаются преимущественно кокки (стафилококки, стрептококки), а также сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.
Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк – Staphylococcus epidermidis, золотистый и лимонно-желтый стафилококк.
Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумя методами:
1) посев отпечатков пальцев рук на МПА или специальные среды (например, кровяной агар, Эндо) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний;
2) посев смывов с рук при помощи тампона, смоченного в стерильном физ. растворе (8-10 мл), исследуют на ОМЧ и наличие кишечной палочки.
Определение общего микробного числа – ОМЧ. 1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем в чашку заливают 12 – 15 мл расплавленного и остуженного до 45ºС МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 – 48 часов, при температуре 37ºС. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы.
Определение кишечной палочки. Оставшееся количество смыва наливают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и помещают в термостат при температуре 43ºС. На следующие сутки высевают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи.
Среда Кесслера – содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу - Е.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке.
Характеристика микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ)
Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы. Но иногда через желудок проходят и патогенные микроорганизмы.
Микрофлора тонкого кишечника также не многочисленна (благодаря действию ферментов), в этой полости обнаруживаются лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, порфиромонады, превотеллы, анаэробные кокки, дрожжевые и дрожжеподобные грибы.
Микрофлора толстого кишечника: в этом биотопе регистрируется самая разнообразная по составу микрофлора. Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов.
Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть – аэробы.
Вся микрофлора кишечника подразделяется на:
1) облигатную (резидентную) – это микроорганизмы, постоянно входящие в состав нормальной микрофлоры и играющие очень важную позитивную роль в макроорганизме (бифидобактерии, лактобактерии, бактероиды, энтерококки, энтеробактерии);
2) факультативную - микроорганизмы, достаточно часто встречающиеся у здоровых людей, но иногда, в случаях снижения общей резистентности организма человека, эти микробы могут быть условно-патогенными и выступать в качестве этиологических факторов заболеваний (стафилококки, стрептококки, бациллы, клостридии, клебсиеллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы, протеи, серации, атипичные кишечные палочки и др.). Некоторые представители этой микрофлоры не способны к длительному пребыванию, персистированию в кишечнике (флавобактерии, ацинетобактеры, отдельные виды псевдомонад). Многие из них являются сапрофитами, некоторые относятся к возбудителям оппортунистических инфекций. В этой группе могут быть, в небольших количествах, и возбудители инфекционных заболеваний.
Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника. Показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др.
Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника
Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа.
Исследуемый материал помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробной, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратные разведения надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высевают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов.
Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 370С.
Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа.
Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника.
Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 1 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев.
Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.