Расчет наиболее вероятного числа бактерий (НВЧ)
В 100 мл питьевой воды централизованного
Хозяйственно-питьевого водоснабжения
| Число положительных результатов из 3-х объемов | НВЧ бактерий в 100 мл | Довери-тельный интервал (95%) | Число положительных результатов из 3-х объемов | НВЧ бактерий в 100 мл | Довери-тельный интервал (95%) | ||||||
| по 100 мл | по 10 мл | по 1 мл | ниж-ний | верх-ний | по 100 мл | по 10 мл | по 1 мл | ниж-ний | верх-ний | ||
| 0,3 * * 0,3 * * * 0,6 * * * * * * * 0,4 0,7 * * 0,7 1,1 * * 1,1 * * * * * * * 0,9 | 0,1 0,2 0,1 1,1 1,2 0.3 0,1 0,2 0,3 0,3 0,2 0,3 0,3 0,4 0,1 0,2 0,2 0,3 0,2 0,2 0,3 0,4 0,2 0,3 0,4 0,5 0,3 0,4 0,5 0,6 0,2 | 1,4 2,8 4,2 1,4 2,8 4,3 5,7 2,8 4,3 5,8 7,3 4,4 5,9 7,4 8,9 1,7 3,4 5,0 6,9 3,4 5,2 7,1 8,9 5,3 7,1 9,0 11,1 7,3 9,3 11,3 13,4 4,3 | 1,4 * * 1,5 * * * * * * * * * ≥ 240 | 0,3 0,4 0,6 0,3 0,4 0,6 0,7 0,5 0,6 0,7 0,9 0,6 0,8 0,9 1,1 0,5 0,8 1,4 2,0 0,9 1,6 2,5 3,4 2,0 3,2 4,6 6,2 5,1 9,3 23,5 - | 6,7 9,3 12,1 6,9 9,6 12,5 15,7 9,9 12,9 16,3 19,8 13,3 16,8 20,6 24,6 10,8 18,0 29,7 44,6 20,0 35,0 53,8 74,2 43,6 69,8 100,3 136,4 112,1 216,0 516,0 - |
Примечание: * - вероятность ниже допустимого уровня, количественный учет невозможен.
Таблица 6
Расчет наиболее вероятного числа бактерий (НВЧ)
В 100 мл воды водоемов
| Число положительных результатов из 3-х объемов | НВЧ бактерий в 100 мл | Число положительных результатов из 3-х объемов | НВЧ бактерий в 100 мл | ||||
| по 1 мл | по 0,1 мл | по 0,01 мл | по 1 мл | по 0,1 мл | по 0,01 мл | ||
| менее 30 60* 90* 61* 92* 120* 62* 93* 120* 94* 130* 160* 190* 110* 150* 150* 190* 150* 200* 240* 160* 200* 240* 290* | 200* 260* 270* 340* 350* 420* 360* 440* 530* 950* 1600* более 11000 |
Примечание: * - вероятность ниже допустимого уровня.
3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий в воде методом мембранных фильтров (Составить схему. Оформить протокол)
Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие палочки, анаэробы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре, с образованием черных колоний, при температуре 44°С в течение 16–18 часов.
1 день
Пробы воды по 20 мл, предварительно прогретые на водяной бане при температуре 75°С в течение 15 минут (для удаления вегетативной флоры), фильтруют.
Железосульфитный агар, перед нанесением фильтров, расплавляют на водяной бане и поддерживают его нагретым в пределах 70–80°С.
1. Фильтры помещают в пробирки с горячим железосульфитным агаром – сворачивают пинцетом в трубочку, таким образом, чтобы сторона фильтра с осевшими бактериями была обращена внутрь, а затем разворачивают по стенке пробирки. Пробирки быстро охлаждают холодной водой и культивируют при 44°С в течение 16-18 часов.
2. Фильтры помещают на чашки Петри с железосульфитным агаром, залитым тонким слоем, поверхностью с осевшими микроорганизмами. Заливают расплавленный железосульфитный агар до верхнего края чашки и инкубируют при 44°С в течение 16–18 часов.
2 день
Подсчитывают количество черных колоний на фильтрах и в толще среды и выражают результат в КОЕ спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл.
4. Определение колифагов в воде. Составить схему. Оформить протокол
Колифаги – бактериофаги способные образовывать зоны лизиса газонной культуры E.coli (тест-культуры К 12 StrR) на питательном агаре через 18–20 часов инкубирования при 37°С.
Титрационный метод
1 день
В исследуемые пробы воды, объемом по 100 мл, добавляют по 10 мл питательного бульона с 1% раствором пептона (10-кратного концентрированного) и 1 мл смыва тест-культуры кишечной палочки или 2 мл 4-х часовой бульонной культуры. Инкубируют в течение 18–20 часов при 37°С.
2 день
Забирают 10 мл из полученного материала и добавляют к ним 1 мл хлороформа (для освобождения от бактерий), энергично встряхивают и оставляют до полного осаждения хлороформа при комнатной температуре. В чашку Петри пипеткой вносят 1 мл воды, обработанной хлороформом (не касаясь осадка хлороформа), и заливают предварительно приготовленной смесью (100 мл агара на 1 мл смыва микроорганизма) питательного агара (сначала расплавленного, потом остуженного до 45°С) и E.coli объемом 12–15 мл. Инкубируют 18–20 часов при 37°С.
3 день
Результат определяют по наличию полного лизиса, появления нескольких или одной бляшки на чашке и при отсутствии зон лизиса на контрольной чашке. Результат выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ). Коли-фаги не должны обнаруживаться в 100 мл воды.
5. Знакомство с методикой определения количество микроорганизмов в воздухе
5.1. Определить количество микроорганизмов в воздухе. Забор воздуха в операционной был осуществлен пробоотборником аэрозольным бактериологическим (ПАБ-01). Через сутки на ЖСА на чашке с диаметром 10 см было обнаружено 134 КОЕ стафилококка. Определить количество микроорганизмов (стафилококков) в операционной в 1м3 воздуха. Дать заключение о чистоте воздуха (Оформить протокол)
Для определения количества КОЕ в воздухе стерильные чашки Петри с питательной средой открывают в исследуемом помещении на 5 минут. Частички пыли с бактериями под действием силы тяжести оседают на поверхности плотной среды. Через 48 часов инкубации при 28–30°С осевшие бактерии образуют на среде колонии, которые подсчитывают.
Известно, что на площадь 100 см2 за 5 минут осаждается примерно столько клеток, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 м3). Зная площадь чашки Петри, можно подсчитать количество бактериальных клеток в 1 м3 воздуха. Для этого число колоний, выросших на чашке Петри, относят к общей площади чашки, затем пересчитывают, сколько таких колоний поместилось бы на 100 см2 и далее в 1 м3 воздуха.
Пример расчета. В чашке Петри диаметром 10 см выросло 35 колоний.
Площадь чашки (πr2) составляет 3,14 х 52 = 78,5 (см2).
Далее подсчитывают число клеток на 100 см 2 (равнозначных 10 л или 0,01 м3 воздуха).
78,5 см2 воздуха содержит 35 клеток
100 см2 ------------------------ Х клеток
100 х 35
Х= ----------------- = 45 (клеток)
78,5
Таким образом, в 0,01 м3 воздуха находится 45 клеток, а в 1м3 их будет в 100 раз больше – 4500.
5. Подведение итогов занятия – 5 минут
ЗАНЯТИЕ 11
ТЕМА. Действие факторов внешней среды на микроорганизмы. Дезинфекция. Стерилизация
Цель занятия. Ознакомить студентов с понятием «дезинфекция», методами дезинфекции, научить применять методы дезинфекции в практической деятельности. Ознакомить студентов с понятием «стерилизация», с методами стерилизации, научить пользоваться этими методами, понятиями «асептика» и «антисептика»