Овладение методикой микроскопирования с иммерсионной системой

Перед работой проверяются части микроскопа, исправность и чистота оптической системы. В начале работы настраивается освещение, для чего необходимо поднять до отказа конденсор, полностью открыть диафрагму и установить плоское зеркало; затем повернуть револьвер и поставить объектив с малым увеличением (х 8), опустить его на расстоянии около 0,5 см от предметного столика. Смотря в окуляр, вращать зеркало до тех пор, пока не установиться предварительное освещение. Поле зрения должно быть освещено равномерно и ярко.

При микроскопировании с иммерсионной системой на приготовленный мазок при помощи тонкой стеклянной палочки наносят небольшую каплю кедрового масла, после чего препарат помещают на предметный столик и укрепляют зажимами.

Вращая револьвер установить объектив ОИ х 90 и, смотря с боку, осторожно опускать его с помощью макрометрического винта до соприкосновения с маслом. Затем, глядя в окуляр, макровинтом медленно поднимать тубус до тех пор, пока не появится мелькание препарата. Окончательная фокусировка производиться микрометрическим винтом, который рекомендуется вращать в пределах одного оборота.

Окончательно отрегулировать освещение препарата.

Во избежании утомления глаз микроскопирование необходимо вести попеременно обоими глазами, не закрывая другого глаза.

Во время микроскопирования правой рукой производится вращение микрометрического винта, пальцами другой руки – передвижение препарата. При микроскопировании обратить внимание на форму (кокки, палочки, извитые), цвет (грамположительные, грамотрицательные, кислотоустойчивые и др.) и расположение бактерий (парами, в цепочку и др.).

Особое внимание должно быть обращено на чистоту оптики. Не следует начинать микроскопировать, не проверив чистоту зеркала, верхней поверхности линзы, конденсора и окуляра. Ни в коем случае нельзя прикасаться к поверхности линз руками, оставляющими на них отпечатки пальцев. При чистой оптике поле зрения должно быть совершенно чистым. Загрязнение на линзах окуляра обнаруживается при вращении окуляра, с которым вращаются и частицы грязи.

По окончании работы микроскоп необходимо привести в порядок. Для этого необходимо приподнять тубус микроскопа, снять препарат, вытереть чистой тряпочкой масло с объектива, поставить объектив с малым увеличением, опустить конденсор, полностью открыть диафрагму и погрузить объектив в отверстие предметного столика.

При переносе микроскопа его необходимо брать за колонку и поддерживать другой рукой за подковообразную ножку.

Сложные методы окраски: методы Грама, Циля- Нильсена, Нейссера и Бурри-Гинса

Окраска мазка по Граму

Метод Грама применяется для выявления грамположительных и грамотрицательных бактерий (рис.1).

Методика окраски:

Ход работы   ____________________   1.На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты.	Методические указания   ____________________   Генцианвиалет – основная краска.     Раствор Люголя - протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.   Спирт – обесцвечивающий фактор.   Водный фуксин – дополнительная краска.	Ориентировочные данные ___________________   Грамположительные бактерии (кокки) синефиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.
2.Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту.
3.Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течении 30 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски.
4.Промывают водой.
5.Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течении 1-2 минут.
6.Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.

Способность грамположительных бактерий при окраске по Граму удерживать комплекс генцианвиолета с йодом связана со свойствами многослойного пептидогликана. Обработка спиртом вызывает сужение пор пептидогликана и тем самым задерживает краску. Наоборот, грамотрицательные бактерии после воздействия спиртом утрачивают краситель, обесцвечиваются и окрашиваются фуксином в красный цвет вследствие меньшего содержания пептидогликана, у них наиболее выражен липополисахаридный слой.