Тема: Возбудитель лептоспироза

Цель занятия: Ознакомить студентов с правилами взятия пат. материала, его пере­сылки в лабораторию и с методами бактериологического и серологического ис­следования при диагностике лептоспироза. Обучить методике микроскопирования в темном поле, методике постановки реакции микро- и макроагглютинации.

Задание:

1. Приготовить препарат с раздавленной каплей из чистой культуры лептоспир.

2. Просмотреть под микроскопом в темном поле микроскопа.

3. Микрокартину зарисовать.

4. Поставить реакцию микроагглютинации.

Материалы и оборудование: Пробирки с чистой культурой лептоспир, стекла предметные и покровные чистые и обезжиренные, стерильные пастеровские пи­петки (одна пачка), пипетки мерные (стерильные, на 1 мл 2 пипетки), резиновые груши, спирт, микроскоп с темнопольным конденсором и осветителем ОИ-17, пробирка с дистиллированной (стерильной) водой — 5 мл, пластины из плекси­гласа с луночками (или чистые пробирки и штативы к ним), лептоспирозные агг­лютинирующие сыворотки (две ампулы двух различных серогрупп лептоспир, пробирка стерильного физраствора, антигены для диагностики лептоспироза, ре­акцией микроагглютинации). Для демонстрации необходимы таблицы, пробирки с культурой лептослир (например, L. biflexa), чашки Петри с агаровой культурой лептоспир два готовых препарата-мазка (один — из культуры лептоспир, окрашенный методом Романовского — Гимзы, другой мазок — обработанный для лю­минесцентной микроскопии). МЛ-2, нефлуоресцирующее масло, биопрепараты.

Классификация:

Отдел – Firmicutes;

Секция – 1, спирохеты;

Порядок – Spirochaetales (м/о, состоящие из осевой нити, вокруг которой спиралеобразно

закручена цитоплазма. Подвижны.);

Семейство – Spirochetaceae;

Род – Leptospira;

Виды – L.interrogans, L.biflexa.

Среди лептоспир различают две группы — патогенные для животных и человека (L. interrogans) и непатогенные (L. biflexa). У патогенных лептоспир выделено 25 се­рологических групп, более 180 серовариантов (сероваров). Основными возбуди­телями лептоспироза считают лептоспиры серогрупп батавие, гебдомадис, гриппотифоза, иктерогеморрагие, каникола, помона, тарассови. Лептоспироз –инфекционное заболевание разных видов животных, болеет и человек.Заболевание характе­ризуется кратковременной лихорадкой, острым и подострым течением болезни, нередко с гемоглобинурией (особенно у телят), анемией, желтушностью, атонией желудочно-кишечного тракта, истощением. Переболевшие животные длительное время остаются лептоспироносителями и лептоспировыделителями. Следует учи­тывать, что у коров и свиноматок лептоспироз может проявляться абортами.

Патологический материал направляют в лабораторию при жизни животно­го и посмертно. При жизни животного отправляют кровь 5 мл для бактериологи­ческого исследования в период лихорадки и 5—10 мл для серологического иссле­дования, обязательно нужно брать пробу крови от абортировавшего животного. Мочу собирают в стерильные емкости во время естественного мочеиспускания утром (до кормления). Абортированный плод посылают целиком или его желу­док с содержимым (перевязанный с двух сторон), паренхиматозные органы плода (отдельно от желудка). Посмертно от крупных животных посылают сердце с пе­ревязанными сосудами, кусочки паренхиматозных органов, почку, лучше цели­ком (если кусочки, то стараются сохранить корковый слой), транссудат грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым (перевязанный лигатурой), спинномозговую жидкость. Трупы мелких животных посылают целиком.

Помимо материала от больных (и павших) животных, в лабораторию могут быть направлены для исследования пробы воды (редко корм, навоз). Пробу воды объемом 1—2 л из водоема.

В лаборатории присланный материал положено исследовать в течение 6 ча­сов с момента отбора проб (или гибели животного) и 10—12 часов — при хране­нии его в охлажденном состоянии, мочу — в течение 3 часов (то есть сроки вы­живания лептоспир в данных условиях). Лептоспироз диагностируют бактериоло­гическим, серологическим и гистологическим методами.

Для бактериологического исследования предварительно материал следует подготовить: мочу — центрифугируют (при 10—15 тыс об/мин 30 минут) и ис­следуют осадок и надосадочную жидкость; кровь (цитратную) отстаивают, иссле­дуют плазму; из проб органов готовят суспензию в стерильном физрастворе, ис­следуют в нативном состоянии или после центрифугирования.

Микроскопия. Лептоспиры плохо воспринимают окраску. Их исследуют ме­тодом раздавленной капли (не менее трех мазков) при темнопольном конденсоре (объек­тив х20, Х40). Морфологически лептоспиры характеризуются спиралеобраз­ной формой, это прямые или S-образные тонкие светящиеся в темном поле подчужные нитевидные организмы; длина лептоспир 5—20 мкм, диаметр 0,1—0,2 мкм, концы загнуты в виде крючков или имеют булавовидные утолщения. Дви­жение лептоспир может быть поступательное, вращательно-поступательное и коле­бательное. Жгутиков у лептоспир нет, подвижность их осуществляется за счет сокращений фибрилл осевой нити тела, идущих во встречном направлении от полюсов клетки. Лептоспиры по Граму окрашиваются отрицательно, по Романовскому — Гимзе (при длительной окраске в 48 часов) — в розово-фиолетовый цвет. Рассмат­ривают эти препараты при обычном конденсоре светового микроскопа (конденсор Аббе). Для люминесцентной микроскопии, готовят препараты-мазки из того же ма­териала, окрашивают флуоресцирующим глобулином для диагностики лептоспироза (глобулины агглютинирующей лептоспирозной сыворотки, меченной ФИТЦ). Просматривают препараты в люминесцентном микроскопе.

Выделение культуры лептоспир, культуральные свойства. Материал высевают на специальные питательные среды – среда Любащенко, Терских (на обычных средах не растут). Из каждой пробы засевают пастеровской пипеткой по 3—5 капель несколько пробирок (5—6) с полужидкой или жидкой средой. Мочу для посева и выделения лептоспир используют только из утренних порций (до кормления животных).

Лептоспиры — факультативные аэробы, культивируются при +28—30°С в течение 3 месяцев. Через 3, 5, 7, 10, а затем каждые 5 дней из содержимого всех пробирок готовят препараты для исследования методом раздавленной капли, про­сматривают их в темном поле микроскопа. Обычно рост микробов появляется на 3—5-й день. При обнаружении лептоспир по 0,5 мл культуры пересевают в 3—5 пробирок с 5—10 мл свежей питательной среды, культивируют при +28—30 °С. Через 4—7 дней наблюдается максимальное накопление лептоспир в среде. Нали­чие роста и чистоту культуры определяют просмотром пробирок в луче света от осветителя (ОИ-19) и с помощью микроскопии.

Посевами материала на питательные среды культуру лептоспир не всегда удается выделить. Прибегают к постановке биопробы. Заражают 20—30-дневных золотистых хомяков и 10—20-дневных крольчат (сосунов). Исследуемый матери­ал (кровь, моча, суспензии паренхиматозных органов животных, абортированных плодов и др.) вводят подкожно или внутрибрюшинно: 0,3—0,5 мл хомякам и 2—3 мл крольчатам. В опыт берут по два животных на каждую пробу. На 4—5-й день убивают одно животное; другое, если оно не погибнет,— на 14—16-й день. Жи­вотных вскрывают, кровь исследуют в РМА с лептоспирами (антиген) 13 серог-рупп (разведение кровяной сыворотки начинают с 1: 10). Положительная РМА свидетельствует о наличии лептоспир в исследуемом материале. Кроме того, если была выделена культура и нужно определить ее патогенность, животным вводят 5—7-дневную культуру внутрибрюшинно (70—100 лептоспир в поле зрения мик­роскопа). Высоко вирулентной считают культуру, которая в дозе 0,1 мл вызывает гибель золотистых хомяков на 5—12-й день.

Выделенную чистую культуру исследуют в РМА для определения антиген­ной (серогрупповой) принадлежности с групповыми агглютинирующими лептоспирозными сыворотками, предварительно разведенными стерильным физио­логическим раствором 1 : 50, 1 : 500, 1 : 1000, 1 : 2000, 1 : 4000, 1 : 16 000 и 1 : 32 000. Сыворотки биопромышленность выпускает в двух наборах: первый набор включает 15 сывороток к лептоспирам серогрупп, главным образом гриппотифоза помона,тарассови каникола, иктерогеморрагие, батавие, гебдомадис и др. Второй набор-20 сывороток. Реакцию ставят в пластинах с луночками (или в пробирках), смешивая 0,1 мл сыворотки каждого разведения с 0,1 мл выделенной (типируемой) 5—7—10-С очной культуры лептоспир с накоплением 70—100 подвижных микробных клеток. Разведения сыворотки последовательно удваиваются. Пластины (пробирки) выдерживают 1 час в термостате при +37 "С, затем проводят учет результатов — из каждой лунки (каждого разведения, сыворотки, начиная с наибольшего) готовят препараты раздавленной капли, которые исследуют в темном поле микроскопа. Ре­акцию оценивают в крестах, основываясь на наличии и характере агглютинации лептоспир: ++++ (четыре креста) — полная 100 %-пая агглютинация лептоспир— склеивание лептоспир с образованием скоплений в виде «паучков», состоящих из разного количества лептоспир (от нескольких клеток до нескольких десятков и да­же сотен), свободные концы которых сохраняют подвижность; +++(три креста) — агглютинированы 75% лептоспир; ++ (два креста)—50%-+ (один крест) — агглю­тинированы 25 %; (—) минус ~ агглютинация отсутствует. Положительную РМА считают если она выражена на четыре, три и два креста. Испытуемую культуру от­носят к серологической группе лептоспир, с сывороткой которой она дает реакцию на 2—4 креста до 50—100 % ее титра, указанного на этикетке.

Бактериологическое исследование воды осуществляется несколькими мето­дами. Чаще используют следующую методику: пробу воды 500 мл центрифуги­руют при 10—15 тыс. об/мин в течение 30 минут. Осадок в дозе 2—3 мл вводят подкожно взрослым кроликам, кровь которых предварительно исследовали в РМА на наличие антилептоспирных антител. Результаты должны быть отрица­тельными. Через 7, 14 и 20 дней кровь кроликов исследуют методом РМА с лептоспирами 13 серологических групп. Положительная РМА в титре 1 : 10 и выше свидетельствует о наличии патогенных лептоспир в данной пробе воды.

Серологическая диагностика лептоспироза осуществляется методами РМА и РА (реакция макроагглютинации). Разработаны также методики РСК и двухсту­пенчатого варианта МФА (флуоресцирующих антител), которые позволяют уста­новить наличие антител у больных лептоспирозом животных. Кровь (сыворотку крови) для исследования необходимо брать на 5-7-й день болезни и повторно — через 7—10 дней

Контрольные вопросы:

1. Возбудитель лептоспироза, его морфологическая, тинкториальная характеристика;

2. Правила взятия и пересылки патологического материала для микробиологиче­ской

диагностики лептоспироза;

3. Особенности культивирования лептоспир;

4. Особенности микроскопирования лептоспир;

5. Методы серологической диагностики лептоспироза, серологической идентификации

лептоспир;

6. Антиген для серологических исследований, подготовка материала для

бактериологической диагностики.

Тема: Возбудители микозов

Цель занятия: Ознакомить студентов с правилами взятия патологического мате­риала и методами микологического исследования на дерматомикозы (трихофития, микроспория), кандидамикоз и плесневые микозы.

Задание:

1. Приготовить препараты раздавленной капли из культур грибов;

2. Исследовать культуральные свойства возбудителей.

Материалы и оборудование:Культуры грибов (Trichophyton verrucosum, Microsporum canis, Candida albicans) на среде Сабуро (или другой), патологиче­ский материал от животных, больных трихофитией и микроспорией, препаро­вальные иглы, микологические крючки, предметные и покровные стекла, а также плакаты, таблицы, биопрепараты.

Микозы — группа специфических болезней, вызываемых патогенными микроскопическими грибами, активно паразитирующими в животном организме.

Возбудители дерматомикозов.К дерматомикозам относятся микозы, сопрово­ждающиеся поражением кожи и ее производных. Зона паразитирования возбудителей ограничена тканями, в которых имеется кератин. Болеют сельскохозяйственные жи­вотные всех видов (преимущественно молодняк), пушные и хищные звери, а также человек. Возбудителей дерматомикозов относят к высшим несовершенным грибам (класс Deuteromycetes). Несмотря на сходство клинического проявления болезни (стригущий лишай), возбудителей относят к различным родам — Trichophyton(вызы­вающий трихофитию),Microsporum(вызывающий микроспорию) и Achorion(возбудитель парши). Основными воз­будителями трихофитии крупного рогатого скота и овец являются Trichophyton verrucosum, Tr.faviforme, а для других видов животных — Тr. mentagrophytes, Тr. equinum. Тr. gallinae, вызывающие трихофитию у птиц, у млекопитающих, кур и индеек, а также у мышей, крыс, собак, кошек, пушных зверей.

Трихофития – дерматомикоз, характеризующийся появлением облысевших участков кожи, в первую очередь в области головы, затем поражение может распространиться на поверхность тела животного. в области поражения волос ломкий, хрупкий, эпидермис отторгается в виде слипшихся чешуек.

Морфологические и культуральные свойства возбудителей трихофитии млекопитающих. В местах поражения, как это видно в препаратах из патологиче­ского материала, гриб располагается снаружи или внутри пораженного волоса в виде правильных рядов септированного мицелия. Аналогичным образом в виде цепочек располагаются округлые или овальные споры, нередко образующие че­хол у основания волоса. На питательных средах возбудители трихофитии могут образовывать артроспоры, алейрии, хламидоспоры, микроконидии и веретенооб­разные макроконидни, одиночные или пучками, расположенные на концах мице­лия, чего не наблюдается при паразитировании гриба на животных тканях.

Возбудитель трихофитии — аэроб, хорошо растет на специальных питатель­ных средах. На агаре Сабуро через 10—20 суток инкубирования в термостате при температуре +26—28 °С образует гладкие, кожистые, складчатые, иногда с мучни­стым налетом колонии, от которых отходят мощные глубокие ветвления в субстрат.

При трихофитии птиц(фавус — белый гребень, парша) болезнь характе­ризуется поражением кожи, перьев, внутренних органов. На гребне, сережках, ближе к клюву, обнаруживают корки (скутулы), имеющие серовато-белый цвет.У кошек и собак стукулярная форма возникает на лапах,когтях и голове.При генерализованной форме поражаются голова, оперенная часть туловища, носоглотка зоб, тонкий отдел кишечника.

Морфологические и культуральные свойства возбудителя трихофитии птиц. Trichophyton gallinae имеет часто вид ветвящихся гифов, которые образуют густые скопления в виде войлока. Гифы мицелия септированные, состоящие из пря­моугольных клеток с двухконтурной оболочкой. Распавшийся мицелий образует округлые или многогранные споры, располагающиеся цепочками или отдельными скоплениями. Мицелий в молодой культуре тонкий, в старой — грубый, четко сегментированный. Концы мицелия могут иметь различные образования: верете­нообразные, боковые вздутая, утолщенные стенки. Края и ветвления на концах могут иметь вид рога оленя, гребешка. В препарате обнаруживаются и хламидос­поры, мицелии с артроспорами, многоклеточными (5—8) макроконидиями. На агаре Сабуро Т. gallinae через 4—5 суток культивирования образует се­роватые маленькие колонии, которые к 10—12-му дню достигают размеров 10— 12 мм. Колонии имеют желтовато-белый цвет, розовый, красный или малиновый, гладкую и кожистую поверхность. Позднее они становятся восковидными с мор­щинистой поверхностью (как губка). Старые культуры сухие с порошкообразным налетом, приобретают серо-белый цвет.

Возбудители микроспории (стригущий лишай)вызывают заболевание у собак, кошек, хищных зверей, редко обезьян, морских свинок, овец и других животных. Болеет и чело­век, особенно чувствительны дети. Род Microsporum включает три вида Microsporum lanosum, M.equinum и M.gypseum.

Морфологические и культуральные свойства. В патологическом материале грибы рода Microsporum имеют вид разветвленного мицелия, который, распада­ясь, образует округлые споры. Вокруг пораженного волоса образуется чехол (муфта), состоящий из спор с беспорядочным мозаичным расположением. На ага­ре Сабуро с глюкозой при температуре +26—28 °С М. equinum развивается на 6— 7-й день, образуя кожистые колонии, покрытые серо-белым воздушным мицели­ем. Цвет зрелой колонии желтый или коричневый. Мицелий септирован. Обра­зуемые микроконидии имеют грушевидную форму, макроконидии — многокле­точные. М. canis на сусло-агаре на 3—4-й день образует серовато-белого цвета округлые колонии с концентрическими кругами с лучистым центром. Зрелые ко­лонии желтого и коричневого цвета. Образуемые микроконидии имеют вид мно­гокамерных клеток. М. gypseum на сусло-агаре образует плоские мучнистые жел­товато-светло-коричневые колонии. Мицелий ракетообразной формы. Образуе­мые макроконидии имеют многоклеточную форму. Грибы рода Microsporum про­дуцируют флуоресцирующий пигмент (птеридин).

Патологическим материалом служат соскобы с пораженных частей тела животного вместе с корочками и чешуйками, пораженные волосы с участков, гра­ничащих со здоровой кожей.

Лабораторные исследования включают микроскопию, люминесцентный анализ и выделение чистой культуры гриба. Микроскопическое исследование является основным в лабораторной диаг­ностике дерматомикозов. Чаще готовят неокрашенные (нативные) препараты. Ис­следуемый материал помещают в чашки Петри, измельчают ножницами и расщепляют с помощью скальпеля. Затем кусочки волос, чешуек, корочек переносят на предметное стекло, наносят каплю 20 %-ного раствора NaOH или КОН и слегка подогревают над пламенем горелки. После этого добавляют каплю 50 %-ного водного раствора глицерина. На приготовленный таким образом препарат накла­дывают покровное стекло и просматривают сначала под малым увеличением су­хого объектива (Х8), а потом — под большим (Х40) или с помощью иммерсион­ной системы. Обнаружение мицелия гриба и различных спор в патматериале яв­ляется достаточным основанием для постановки диагноза на дерматомикозы.

С целью дифференциации грибов родов Trichopthyton и Misrosporum учи­тывают характер расположения спор в пораженном волосе (цепочками или моза­ичное) и результаты люминесцентного анализа. В сомнительных случаях для под­тверждения диагноза идентифицируют культуру гриба.

Люминесцентный анализ. Исследуемый материал помещают в чашки Петри и просматривают под ультрафиолетовыми лучами ртутно-кварцевой лампы типа ПРК-2 или ПРК-4 с фильтром Вуда на расстоянии 20 см в затемненном помеще­нии. Пораженные возбудителем микроспории волосы дают яркое зеленоватое свечение под действием у/ф лучей (возбудители трихофитии не флюоресцируют). Корочки, чешуйки не светятся. Кроме того, люминесценция позволяет провести раннюю диагностику атипичных и скрытых форм микроспории.

Выделение чистой культуры. Делают посевы из культуры гриба на специаль­ные питательные среды — Сабуро, сусло-агар, МПА с 2 % глюкозы, Чапека и неко­торые другие. Перед высевом патматериала на питательные среды иногда прибегают к его обработке 60%-ным спиртом в течение 5-7 минут, а затем дважды отмывают дистиллированной водой и подсушивают в термостате при +37 °С с целью освобож­дения от сопутствующей микрофлоры или в питательные среды добавляют антибио­тики (пенициллин, стрептомицин) из расчета 100—200 ЕД/мл среды. Посевы инку­бируют при температуре +26—28 °С в течение 20—30 суток. У выросших культур грибов изучают культуральные и морфологические свойства.

Возбудители плесневых микозов— это различные виды микроскопических грибов родов Aspergillus, Penicillium, Mucor и др.

Возбудители аспергиллезов относят к высшим несовершенным грибам класса Deuteromyces, рода Aspergillus. Данные грибы — постоянные обитатели организма многих здоровых животных. При нарушении условий содержания и кормления жи­вотных, влекущих снижение резистентности организма, грибы могут стать причи­ной аспергиллеза, а токсинообразующие штаммы вызывают аспергиллотоксикозы.

Аспергиллез— незаразное заболевание домашних и диких птиц, редко млекопи­тающих (крупный рогатый скот, овцы, свиньи, козы, лошади, пчелы). Болезнь ха­рактеризуется гранулематозным поражением органов дыхания, в основном легких. Патологическим материалом служат свежие трупы мелких животных, наложения, узелки, пораженные органы или кусочки их, яйца, соскобы с трупов.

Лабораторный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования препаратов из патматериала и выделения чистой культуры возбудите­ля. Для посева используют агар Чапека, Сабуро, кровяной, мозговой и ку­курузный агары, МПА (рН 5,5—6,5). Гранулематозную ткань обжигают над пла­менем, вырезают стерильно кусочки из середины и раскладывают их на агар в 56 чашке Петри, а экссудат засевают в пробирки со средой, инкубируют при +25 и 37°С На 3—5-е сутки на плотных средах образуются характерные для аспергилл колонии.

A. flavus, A. niger на агаре Чапека образуют разрастающиеся широко коло­нии с обильным спороношением. Цвет колоний зависит от массы конидий, разви­вающихся на конидиеносцах. Под микроскопом обнаруживают бесцветный или светлоокрашенный септированный мицелий. Часто образуются склероции шаро­видной формы, представленные толстостенными клетками.

Возбудители мукоромикоза— различные представители рода Mucor, относя­щиеся к низшим, совершенным грибам класса Oomycetes. Наиболее часто возбудите­лем является М.racemosus. Мукоромикоз (фикомикоз)- хроническое заболева­ние, характеризующееся развитием гранулематозного процесса, сходного с туберку­лезом в лимфатических узлах и в легких, реже в других органах и тканях. К воз­будителю мукоромикоза восприимчивы свиньи, лошади, крупный рогатый скот, ов­цы, пушные звери; из лабораторных животных — морские свинки, мыши. Описаны случаи заболевания человека. Материалом для лабораторного исследования являются гной, некротическая ткань, экссудат, гранулематозная ткань. Диагноз ставят на осно­вании микроскопии патологического материала и выделения чистой культуры. При микроскопии препаратов в положительных случаях обнаруживают несептированный мицелий. В крупных спорангиях на спороносной гифе видны развивающиеся споры. Для старых культур характерно наличие хламидоспор.

Для выделения чистой культуры возбудителя кусочки гранулематозной ткани обжигают над пламенем горелки и стерильно вырезают из середины кусоч­ки, которые раскладывают на поверхности среды Чапека (в чашках Петри) или других сред. Инкубируют посевы при +25—30 °С. Культуры грибов вырастают на третьи сутки в виде войлочных клочковатых серовато-белых колоний, в после­дующем цвет может изменяться до коричневого или бурого.

Микроскопию препаратов, приготовленных из патматериала для исследова­ния на микозы, вызываемые грибами рода Aspergillus, Penicillium и Мисог, прово­дят в два этапа.

Исследуют под микроскопом (X200 - 300) колонии на месте их роста (в чашках Петри). При этом рассматривают расположение конидиеносцев и спор, наличие или отсутствие воздушного мицелия, общее строение конидиеносного аппарата. Изучают под микроскопом элементы гриба в препарате «раздавленная капля».

Возбудители кандидамикоза— дрожжевидные микроскопические грибы из рода Candida, среди которых наибольшего внимания заслуживает гриб Candida albicans, относящийся к высшим несовершенным грибам. Грибы данного рода факультативные паразиты, постоянно обитающие на слизистых оболочках жи­вотных, вызывают заболевание животных — кандидамикоз (кандидоз, монилиоз, молочница и др.), характеризующийся поражением слизистых оболочек пищева­рительного тракта и различных органов и тканей. С. albicans в основном поражает птиц, а также кур, гусей, уток, цесарок, индеек, голубей, фазанов и др. Более тя­жело болезнь протекает у молодняка. Реже болеют поросята, телята, ягнята, щен­ки. Возникновению кандидамикоза способствует понижение резистентности ор­ганизма животных. Кандидамикоз может быть первичным и вторичным (на фоне антибиотикотерапии). Для проникновения гриба в организм животного необхо­дима травма слизистых покровов.

Пат. материалом для исследования являются соскобы со слизистой ротовой полости, пищевода, зоба, налетов, наложений, молоко от коров, больных масти­том, и др. Диагноз ставят на основании микроскопии и выделения чистой культу­ры возбудителя.

Микроскопию патматериала проводят в неокрашенных и окрашенных по Граму, Цилю — Нильсену, Романовскому-Гимзе препаратах. В неокрашенных мазках грибы представлены бесцветными нитями псевдомицелия с перегородками, состоящего из 2—4 вытянутых почкующихся клеток, или густо переплетенным септированным мицелием. Обнаруживают также множество овальных, почкующихся и не почкующихся тонкостенных дрожжевидных клеток — бластоспор, которые име­ют фиолетовый, синий или розовый цвет с мелкозернистыми включениями.

Для получения чистой культуры патматериал высевают на агаризованные среды: агар Сабуро, сусло-агар, МПА с добавлением 2 % глюкозы и др. Так как исследуемый материал загрязнен бактериальной микрофлорой его следует обработать 0,5%-ным раствором фенола, в питательные среды добавляют пенициллин и стрептомицин. Инкубируют посевы при температуре +25—30 °С. Первичные колонии вырастают на 2— 3-й день. Для дифференциации выросшие колонии грибов снова пересевают на различные твердые питательные среды (сусло-агар, Сабуро, кукурузный агар, кровяной 5%-ный агар) и в жидкие цветные среды, содержащие 1 % пептона, 1 % реактива Андрадэ, 2 % глюкозы, сахарозы, лактозы. рН питательных сред 2,5-3,0. На твердых средах грибы рода Candida образуют S- и R-формы. При микроскопии S-формы колоний обнаруживают овальные, иногда почкующиеся клетки, в колони­ях R-формы могут быть и удлиненные клетки псевдомицелия. В жидких средах С. albicans образует пристеночное кольцо и осадок, а на кукурузном агаре — хламидоспоры и бластоспоры.

Контрольные вопросы:

1. Отличительные особенности разных родов дерматомицетов.

2. Патологический материал для исследования на дерматомикозы.

3. Морфологические и культуральные особенности возбудителей дерматомикозов.

4. Люминесцентная микроскопия при дерматомикозах.

5. Возбудители кандидамикоза, аспергиллеза, их культивирование.

6. Патогенные свойства грибов рода Candida.