Тема: Патогенные анаэробы - возбудители столбняка, ботулизма

Фузариобактериоза

Цель занятия: Усвоить особенности взятия материала для диагностического ис­следования при каждом из трех заболеваний, принципы и методы их исследова­ния в лаборатории.

Задание:

1. Готовые фиксированные мазки окрасить по Граму;

2. Просмотреть под микроскопом, микрокартину зарисовать в тетради.

Материалы и оборудование: Белые мыши с клиническими признаками ботулизма и столбняка (животные подготовлены заранее); готовые фиксированные препараты-мазки микробных культур С. tetani, С. botulinum. Мазки (фиксированные) из некротизированной ткани кролика, зараженного Fusobacterium necrophorum; биопрепараты.

Возбудитель столбняка — Clostridium tetani широко распространен в при­роде — почве, воде, навозе, фекалиях; вызывает остропротекающую неконтагиозную раневую токсикоинфекцию у животных (и человека), при которой нервная система поражается экзотоксином микроба. Болезнь возникает в результате различных травм и ранений при условии внесения в них спор возбудителя, и сопровождается тоническими и клоническими сокращениям мышц.

Патологический материал направляют в лабораторию в сомнительных случаях. Для этого исследуют раневой воспалительный экссудат: пастеровской пипеткой высевают его в среду Китта-Тароцци (можно использовать также бульон и агар Мартена, казеиновые, рыбно-казеиновые среды). Посевы инкуби­руют в термостате 5—7 дней (срок накопления токсина). Полученную смешан­ную культуру фильтруют через асбестовые фильтровальные пластинки, фильтрат подкожно вводят белым мышам или морским свинкам. При наличии столбнячно­го токсина животные гибнут с выраженной клинической картиной столбняка. Па­раллельно (если необходимо) материал (экссудат) исследуют под микроскопом, а затем делают высевы на глюкозно-кровяной агар.

При исследовании выделяют возбудителя столбняка и его токсин.

Морфологические, культурально-биохимические особенности.С. tetani — крупная тонкая подвижная грамположительная палочка, длиной 4—8 мкм; образует спо­ру, как правило, терминально, диаметр споры превышает диаметр вегетативной клетки, придавая форму барабанной палочки. Столбнячные споры очень стойкие, выдерживают длительное кипячение. Палочки со спорами не подвижны. Капсуле не синтезируют.

С. tetani — строгий анаэроб, оптимальная температура роста +37 °С, рН среды 7,4—7,9. Рост проявляется равномерным помутнением жидкой среды Китта-Тароцци с последующим ее просветлением за счет осаждения микробной массы на дно пробирки (3—4 дня) в виде рыхлого осадка. Висмут сульфит-агар (и мозговая среда) при росте С. tetani чернеет. На глюкозно-кровяном агаре растет в виде не­больших колоний с неровными краями, нежные беловато-серые колонии в виде капелек росы. Зона гемолиза проявляется не у всех штаммов.

В процессе роста на питательных средах происходит ферментация белков (протеолиз) с образованием газообразных продуктов с неприятным запа­хом. Медленно разжижает желатину. Углеводы почти не ферментирует, молоко не свертывает. Образует сероводород, аммиак, индол. Встречаются штаммы, слабо ферментирующие глюкозу, мальтозу, сахарозу.

Токсин в организме животного распространяется по осевым цилиндрам нерва или по экто- и эндоневральным лим­фатическим путям. Иммунитет при столбняке — антитоксический.

Ботулизм

Возбудитель ботулизма — Clostridium botulinum. Ботулизм — кормовое (пищевое) отравление, кормовая токсикоинфекция, вызывающая заболевание нервно-паралитического характера, проявляющаяся параличом глотки, гортани и конечностей. Смертность 85—100 %.

Патологическим материалом служат остатки корма, вызвавшего отравление (у крупных животных), рвотные мас­сы (у собак, кошек). У павших животных исследуют содержимое желудка, кишечни­ка, лимфоузлы, селезенку, головной мозг. Чтобы избежать, инактивации токсина, каждый вид материала помещают в отдельную банку из темного стекла (или оберты­вают банку черной бумагой), закрывают герметично. Поступивший в лабораторию материал хотя и проверяют на данную культуру, но главным образом исследуют на обнаружение токсина возбудителя. Для выделения культуры взвесь пробы материала высевают на жидкие и плотные питательные среды.