Получение спорового шприца из отпечатка

ПРИМЕЧАНИЕ: Максимальная эффективность этих инструкций достигается при условии работы в наиболее стерильном окружении из доступных. В идеале стоило бы воспользоваться стерильным и чистым главбоксом (glovebox). Существует много несложных способов конструирования главбоксов; на популярных микологических сайтах можно найти большое количество их схем. Если же у вас отсутствует сам главбокс или желание его конструировать, все следующие шаги с успехом могут быть осуществлены с изпользованием техники "oven tek", которая состоит в привлечении обычной духовки, как способа снижения количества микроорганизмов. Реализуется она следующим способом: зажгите огонь, опустите дверцу. Теперь вы можете использовать ее как рабочую поверхность, или наполовину вытянуть один из лотков и работать на нем. Теория (недоказанная) состоит в том, что тепло поднимаясь заставляет летучие микроорганизмы также подниматься вверх, сохраняя таким способом вашу рабочую поверхность от их оседания и уменьшая число заражений.
Материалы:
-Пустые, стерильные шприцы
-Двухлитровая (или больше) кастрюля
-Одна бутылка 91% изопропилового спирта
-Несколько бумажных салфеток
-Зажигалка или спиртовка
-Рюмка
-Стерильный отпечаток спор

Процедура 1: Приготовление стерильного шприца
1. Наполовину наполните вашу кастрюлю водопроводной или дистиллированной водой (используйте дистиллированную воду если в водопроводной содержится большое количество минералов или химических добавок).
2. Кипятите воду на большом огне не менее десяти минут, этого должно хватить для стерилизации.
3. Возьмите пустой шприц и наберите в него кипятку. Пусть горячая вода остается в нем на протяжении приблизительно двух минут.
4. Выпрысните горячую воду из шприца в раковину (не назад в кастрюлю).
5. Повторите шаги 3 и 4 еще два раза. После второго раза оставьте горячую воду в шприце.
6. Поместите шприц в прохладное чистое место, лучше в чистом zip-lock пакете.
7. Дайте ему остыть несколько часов перед тем как переходить к процедуре 2.

Процедура 2: Перемещение спор в шприц
1. Сначала очистите вашу рабочую зону. Для этого протрите все рабочие поверхности слабым раствором побелки и щедро увлажните рабочую зону дезинфицирующим средством (Lisol).
2. Поместите в glovebox или на рабочую поверхность дверцы духовки: рюмку, остывшие шприцы, бутылочку со спиртом, бумажную салфетку, отпечаток спор (все еще в zip-lock пакете) и зажигалку или спиртовку.
3. Помойте руки с антибактериальным мылом перед тем как продолжать.
4. Сложите салфетку треугольником и увлажните ее кончик спиртом.
5. С помощью пропитанной спиртом салфетки протрите внутреннюю поверхность рюмки, основательно стерилизуя таким образом поверхность, которую вы будете использовать для перемещения. Позвольте рюмке высохнуть, это должно длится несколько секунд.
6. Снимите колпачок со стерильного шприца и в пламени зажигалки простерилизуйте иглу. Потом протрите ее пропитанной спиртом салфеткой. Далее, пока этого прямо не потребует инструкция, попытайтесь ничего не касаться иглой.
7. ПРИМЕЧАНИЕ: очень важно проделывать все настолько быстро, насколько только возможно, чтобы свести на нет возможность того, что зараза попадет в вашу рабочую зону и таким образом испортит ваш шприц.
8. Достаньте отпечаток из упаковки. Разверните его таким образом, чтобы получить доступ к спорам. Легонько соскребите иглой от шприца часть отпечатка в рюмку. Для отпечатка среднего размера обычно хватает 1/5 отпечатка.
9. Теперь у вас в рюмке находится небольшое количество спор. Выпрысните из шприца (не более половины) воды в рюмку, осторожно смывая споры.
10. Втяните воду со спорами в шприц. Если нужно, выпрысните еще немного воды в рюмку, чтобы повторно втянуть взвесь и собрать все споры.
11. После того, как вы втянули взвесь спор в шприц, вода в нем должна приобрести темноватый оттенок, также можно заметить плавающие в воде небольшие скопления спор. Это будет означать, что вы успешно завершили процесс.
12. Стерилизуйте иглу еще раз с помощью пропитанной алкоголем салфетки, оденьте на иглу колпачок и поместите шприц обратно в чистый zip-lock пакет.
13. Взвесь спор в шприце должна отстаиваться на протяжении не мене 12 часов, перед тем как её можно будет использовать для инокуляции банки. Это очень важный момент, так как перед тем как вводить споры в материал субстрата, они должны пройти процесс регидрации. Невыполнение этого пункта может привести к тому, что споры либо вообще не прорастут, либо будут прорастать очень медленно.

Наши рекомендации