Тема 3. Аллергическая и серологическая диагностика инфекционных заболеваний.

Задание 1.Классификация биопрепаратов, их назначение, применение, утилизация

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Перечислить биопрепараты, применяемые для лечения в хозяйстве, их назначение и применение

Биопрепараты — средства, полученные методом биотехнологии (биологического происхождения), предназначенные для диагностики, профилактики и лечения инфекционных болезней животных и людей, а также повышения продуктивности животных.

Все биопрепараты выпускают по единым нормативным документам (ОСТам и ТУ); к биопрепаратам обязательно прилагают наставления по их применению.

Биопрепараты выпускают несколько крупных федеральных унитарных биологических предприятий (биофабрики и биокомбинаты, научно-исследовательские институты), а также коммерческие фирмы. Биопрепараты классифицируют следующим образом:

профилактические: вакцины, сыворотки-глобулины, интерферон;

лечебные: сыворотки-глобулины, бактериофаги, антибиотики, пробиотики;

диагностические: сыворотки, антигены, аллергены, бактериофаги, моноклональные антитела;

стимулирующие: иммуностимуляторы, кормовые антибиотики, гормоны, витамины.

Лечебные биопрепараты.

Применяемые в хозяйстве-это-Сыворотки и глобулины - препараты, содержащие антитела к определенным возбудителям болезней, получаемые от гипериммунизированных или переболевших животных и предназначенные для пассивной иммунизации или лечения, а также диагностики инфекционных болезней.

Сыворотки выпускают нативными и консервированными, жидкими и сухими. Примерами биопрепаратов: антитоксические сыворотки против столбняка, ботулизма энтеротоксемии и других анаэробных инфекций; антибактериальные сыворотки — содержащие антитела, способствующие фагоцитозу и лизису бактерий; противовирусные — содержащие вируснейтрализующие антитела; иммуноглобулины — против сибирской язвы, бешенства, болезни Ауески, столбняка, а также неспецифические; сыворотки реконвалесцентов против ринотрахеита, аденовироза, хламидиоза.

2. Перечислить биопрепараты, применяемые для профилактики в хозяйстве, их назначение и применение

Иммунопрофилактика. Вакцины — специфические антигенные биопрепараты, полученные из микроорганизмов, их компонентов или продуктов жизнедеятельности и предназначенные для создания активного иммунитета к инфекционным болезням в организме животных.

Живые вакцины – наиболее эффективные биопрепараты: быстро формируется иммунитет, достаточно малых доз антигены и, как правило, однократной вакцинации.

Недостатки: достаточно высокие реактогенность, питрогенность, остаточная вирулентность. Живые вакцины изготавливают из авирулентных или слабовирулентных (аттенуированных) штаммов микроорганизмов, не способных возвращаться к первоначальным свойствам (реверсии), но сохранивших иммуногенность; дефектных мутантов; вирулентных (не ослабленных) микроорганизмов; гетерогенных возбудителей. К основным методам аттенуации относят следующие:

• ослабление возбудителя многократными пассажами на невосприимчивых или слабовосприимчивых животных и адаптация к ним (вакцины Конева против рожи; антирабическая Пастера: АСВ из штамма К против чумы свиней; из штамма ЛТ против чумы КРС);
• ослабление путем многократных пассажей на куриных эмбрионах (вирусные вакцины: сухая ВГНКИ против болезни Ауески, 668-КФ против чумы собак, многие вакцины против болезней птиц);
• ослабление возбудителя путем культивирования на питательных средах с добавлением неблагоприятных веществ (БЦЖ против туберкулеза);
• ослабление возбудителя посредством ультрафиолетового облучения - УФО (против ИРТ КРС-ВИЭВ, листериоза из штамма АУФ);
• отбор авирулентных штаммов: естественных или полученных путем селекции в лабораториях (вакцины из штамма 55 ВНИИВВиМ против сибирской язвы; из штаммов 19 и 82 против бруцеллеза; ВР-2 против рожи).

Инактивированные вакцины, как правило вырабатывают менее напряженный иммунитет, чем живые. Особенности использования: необходимость значительно большего количества антигена, а также повторных вакцинаций (ревакцинаций) и депонирующих веществ (адъювантов) при введении - для усиления иммуногенности. Преимущества инактивированных вакцин: они более безопасны, так как не способны спровоцировать заболевание у животных, общие реакции слабее, чем при иммунизации живыми вакцинами. В то же время местная реактогенность при иммунизации депонированными вакцинами (особенно эмульгированными) может быть достаточно высокой.

Субъединичные и генно-инженерные вакцины распространены в ветеринарии недостаточно широко (наработки по сальмонеллёзу, эшерихиозу, бруцеллёзу, ящуру). Их иммуногенность уступает живым и инактивированным вакцинам, но они лишены их недостатков, поэтому могут применяться для иммунизации молодняка, беременных и ослабленных животных.

Вакцины выпускают в жидком или сухом (лиофилизированные) виде. Различают 3 вида иммунизации в зависимости от способа формирования иммунитета:

• активная – применяют вакцины, при этом иммунитет вырабатывается самим организмом;
• пассивная — применяют сыворотки или иммуноглобулины, при этом в организм вводят готовые антитела (полученные при иммунизации других животных — продуцентов);
• смешанная (пассивно-активная) — при которой вначале вводят сыворотку или глобулин (пассивная вакцинация), а через некоторое время вакцину (активная вакцинация). При этом способе пассивные антитела в организме могут отрицательно влиять на формирование активного иммунитета.

Способы вакцинации:

• простая вакцинация — применяют одну вакцину (но не против одной инфекционной болезни).
• комплексная вакцинация — применяют нескольких вакцин (при этом их вводят раздельно или смешивают перед введением).

Методы введения вакцин могут быть парентеральными — подкожный, внутрикожный, внутримышечный, интраназальный, внутрицистернальный, накожный (скарификационный), аэрозольный (респираторный, ингаляционный), инсталляционный (введение по каплям в отверстия) и энтеральный.

В данное время в хозяйстве используют инактивированные вакцины в простой а так же комплексной вакцинации.

3. Описать способы и методы утилизации биопрепаратов.

Остатки вакцин в ампулах или флаконах, использованные одноразовые иглы, шприцы, скарификаторы, ватные тампоны, салфетки, перчатки после инъекции сбрасывают в контейнеры с дезинфицирующим раствором, приготовленным в соответствии с инструкцией по его применению.

После дезинфицирующей обработки медицинские отходы утилизируют в соответствии с санитарными правилами и нормами СанПиН 2.1.7.728-99 "Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений".

Задание 2.Прием больных животных и оказание лечебно-профилактической помощи при инфекционных болезнях. Специфическая терапия, введение сывороток, иммуноглобулинов. Антибиотикотерапия в хозяйствах.

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Провести прием животного, данные занести в журнал приема форма №1-вет (приложение 8)

2. Записать какая проводилась специфическая терапия. Записать какая проводилась вакцинотерапия:

На 8-й день жизни телят прививали от диклококка, на 10-й от парагриппа, на 12-й против вирусной диареи. Ровно в месяц делали укол от трихофитии, а в два месяца от пастереллеза. На сроке 90-95 дней жизни прививали от эмкара и сибирсокй язвы, а на 120-130 сутки от бруцеллеза и ящура. Последняя прививка (против ящура) повторялась еще и на 10-й месяц жизни животного.

Взрослым коровам лептоспироз прививался дважды в год, через каждые шесть месяцев, точно по той же схеме делалась и прививка от пастереллеза, то есть два раза в году.

Прививка от колибактериоза делалась двукратно: в первый раз за 100 дней до отела и во второй - за 90 дней. Вакцинация от паратифа делалась за 80 дней до отела и затем повторная ревакцинация за 70 дней. Вакциной "Комбовак" прививали коров за 40 - 50 дней до отела в первый раз и за 14 - 21 день до отела во второй, телят, рождённых от вакцинированных коров, для предотвращения инфицирования возбудителей ОРВИ КРС так же вакцинировали вакциной «Комбовак» двухкратно в возрасте 30 дней и 44 дней в дозе 0,2 мл внутрикожно, далее в возрасте 3 месяца двухкратно интервалом в 14 дней прививали всех телят в дозе 0,4 мл внутрикожно и далее в 6 и 12 месяцев однократно в дозе 0,2 мл внутрикожно.

3. Записать какая проводилась серотерапия (применение специфических сыво­роток и гамма-глобулинов).

Лечение специфическими гипериммунными сыворотками занимает важное место в оздоровительной работе при инфекционных болезнях животных. Лечебное действие их связано с введением в организм специфических антител, обезвреживающих болезнетворные микроорганизмы или их токсины. С другой стороны, неспецифические компоненты сыворотки, ее белково-солевой комплекс, активизируя клетки и ткани, усиливают общую иммунореактивность макроорганизма и его защитные механизмы в борьбе с возбудителем инфекции. Лечебные сыворотки получают от гипериммунизированных животных и реконвалесцентов.

По механизму действия, зависящему от свойства антител, специфические сыворотки разделяют на антимикробные и антитоксические. Первые главным образом воздействуют на возбудителей болезней, подавляя их жизнедеятельность, вторые – обезвреживают ядовитые продукты метаболизма микробов. К антимикробным сывороткам относятся сыворотки против сибирской язвы, рожи свиней, пастереллеза, септицемии и др., а к антитоксическим – сыворотки против столбняка, анаэробной дизентерии ягнят, инфекционной энтеротоксемии овец и др.

Гамма-глобулин получают из сыворотки крови крупного рогатого скота (КРС) в возрасте 1,5 - 2 года массой 250 - 280 кг. Гипериммунизацию животных возбудителем болезни осуществляют в два цикла с интервалом в 30 дней. Во время первого цикла антиген вводят животным однократно в течение 3 дней в дозе по 4 мл, включающей 1 мл водной суспензии гриба (50 млн/мл), 1 мл физраствора и 2 мл 1%-ного раствора сапонина. Во время второго цикла антиген вводят животным также однократно в течение 2 дней в дозе по 8 мл, включающей 2 мл водной суспензии гриба, 2 мл раствора и 4 мл 1%-ного раствора сапонина. Через 5 дней после окончания второго цикла гипериммунизации животных подвергают обескровливанию. Из полученной крови отделяют гипериммунную сыворотку, pH которой устанавливают в пределах 6,9 - 7,2. В сыворотку добавляют 50%-ный водный раствор полиэтиленгликоля до конечной концентрации 20% и после двухчасовой экспозиции при 10^oC сыворотку подвергают центрифугированию при 2500 об/мин в течение 30 мин для выделения гамма-глобулина с последующей его лиофилизацией для обеспечения стабильности свойств препарата при хранении. Перед использованием сухой гамма-глобулин разводят в 10 мл физраствора.
В данном случае в хозяйстве давно не наблюдалось возникновения тяжёлых инфекций, поэтому и лечения их не требовалось.

4.Записать какая проводилась неспецифическая терапия.

Из неспецифической терапии применялась аутогемотерапия.

Аутогемотерапия является простым и доступным методом неспецифической стимулирующей терапии. Осуществляют ее следующим образом. Берут кровь из яремной вены больного животного шприцем Жанэ и сразу же инъецируют ее этому же животному внутримышечно или подкожно. Дозы крови крупному рогатому скоту составляют от 30 до 150 мл. Кровь вводят три раза с интервалом между инъекциями 2—4 сут. В первый раз вводят 30 мл крови, во второй — 50 мл, в третий — 75 мл.

Действие аутогемотерапии на организм животных аналогично действию аутопротеинотерапии, применяемой в комбинации с ауто-серотерапией и аутовакцинацией.

Задание 3.Принципы аллергической диагностики туберкулеза. Оформление документации

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Описать технику введения туберкулина различным видам сельскохозяйственных животных и птице.

Туберкулез (Tuberculosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь всех видов животных и человека, характеризующаяся образованием в различных органах специфических узелков, подвергающихся казеозному некрозу и обызвествлению.

При внутрикожном методе туберкулинизации туберкулин вводят крупному рогатому скота, буйволам, зебу видному скоту, оленям (маралам) в середину шеи, быкам-производителям — в под хвостовую складку, верблюдам -в область наружной поверхности уха в 2см от его основания, козам -в толщу нижнего века; собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки; норкам — интрапальпебрально в верхнее веко; кошкам — в область внутренней поверхности уха курам — в бородку; индейкам -в подчелюстную сережку; гусям, уткам- в подчелюстную складку; фазанам –самцам -в кавернозные тела головы; павлинам, попугаям, голубям, журавлям, цаплям, аистам, фламинго- в область наружной стороны голени на 1...2см выше голеностопного сустава. Перед введением туберкулина шерсть (волос) в месте инъекции выстригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом. Читку реакции на внутрикожное введение туберкулина проводят у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов и оленей через 72ч; у коз, овец, свиней, собак, кошек, обезьян, пушных зверей через 48ч; у птицы через 30-36ч. В неблагополучных по туберкулезу пунктах крупному рогатому скоту и верблюдам допускается вводить туберкулин повторно через 72ч после первого введения в той же дозе и в то же место. Учет и оценку реакции на повторное введение проводят через 24ч. При учете внутрикожной реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина, у норок визуально сравнивают веки левого и правого глаза. При обнаружении во время читки утолщения кожи на месте введения туберкулина у крупного рогатого скота, буйволов, зебувидного скота, верблюдов, оленей берем кутиметр и измеряем толщину складки в миллиметрах и определяем величину ее утолщения, сравнивая ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина.

2. Описать основное оборудование и материалы для туберкулинизации животных и птицы. Методы стерилизации инструментов.

Следующие предметы должны быть подготовлены для того, чтобы провести туберкулинизацию:

1. Кутиметр

2. шприц Hauptner Syntena II туберкулина для бычьего туберкулина

3. шприц Hauptner Syntena II туберкулин для птичего туберкулина

4. Новые канюли

5. машинка для стрижки с запасным аккумулятором и запасной головкой для стрижки

6. флакон масла для смазывания ножей для стригательной машинки

7. из холодильника взятый туберкулин, либо уже установлены в шприцах, или ещё во флаконах, чтобы набрать локально (не входит в комплект)

8. лампочка для мест с неблагоприятными условиями освещения

9. маркировачный карандаш для документирования толщины кожи

Четкая маркировка каждого шприца для туберкулина (бычий и птичий) облегчает различие (у нас способом разными цветами отмечены кнопки) в условиях низкой освещенности чтобы не перепутать.

Список животных для проверки заранее выпечатать.

Инъекции птичево и бычьего туберкулина должны быть в направлении, параллельной линии от плеча. Инъекции бычьего туберкулина осуществляется около 12,5 см ниже, чем инъекция птичего. Как правило "Птица летит сверху".

Места инъекций должны быть выбритые и чистые!

На каждом выбритом месте необходимо сформировать складку кожи помощью большим и указательным пальцами и измерить их толщину с кутиметром и записать результаты. Документация должна осуществляться непосредственно с помошью помошника.

Короткой стерильную иглой, на градуированном шприце Хауптнер фиксируется, на искасок ввести в глубокие слоя кожи. Туберкулин вводят. Инъекции выполнены правильно, если можно найти небольшую горошину, как припухлость в каждом месте инъекции при проверке пальцами.

Через 72 часов (+/- 4 часа) после инъекции проводится контрольное измерение и также записывается.

Каждый флакон с туберкулином перед применением просматривают. При нарушении целостности стекла или укупорки, отсутствии надписей на флаконах их выбраковывают.

Для внутрикожного и пальпебрального введения туберкулина используют шприцы с бегунком вместимостью 1 - 2 см и иглы для внутрикожных инъекций или безыгольные инъекторы БИ-7. ИБВ-02 и другие.

Для нанесения туберкулина на конъюнктиву применяют глазные пипетки, для внутривенного введения - шприцы вместимостью 5 - 10 см3 и иглы для подкожных инъекций.

Туберкулин используют только в день вскрытия флакона, остатки туберкулина инактивируют кипячением в течение 10 минут.

Инструменты, используемые для туберкулинизации, не разрешается применять для введения животным других вешеств.

Шприцы, иглы и глазные пипетки до и после их использования стерилизуют кипячением в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих вешеств. Безыгольные инъекторы стерилизуют в соответствии с наставлением по их применению.

Во время проведения внутрикожной, пальпебральной и внутривенной туберкулинизации для каждого животного используют отдельную стерильную иглу.

3. Описать методы оценки реакции.

Современная эпизоотология различает 2 группы неспецифической реакции на туберкулин: параллергические и псевдоаллергические. Параллергические реакции на туберкулин - это реакции, вызванные атипичными микобактериями, возбудителем паратуберкулезного энтерита и птичьим видом возбудителя туберкулеза, а также М. fortuituum и М. smegmatis. Псевдоаллергические реакции на туберкулин - реакции, вызванные факторами немикобактериальной природы. Сенсибилизация организма к туберкулину может проявляться: при актиномикозах, гельмитозах (фасциолез, дикроцеллиоз), гнойных абсцессах и флегонах. 1) Аллергический метод Запрещено исследовать при помощи аллергической пробы животных в течение трех недель после вакцинации их против инфекционных болезней, а также после применения ангельминтиков. Туберкулин вводят строго внутрикожно в дозе 0,2 мл: крупному рогатому скоту, буйволам, зебу, оленям, маралам в область средней трети шеи; быкам-производителям - в одну из подхвостовых складок; верблюдам - в кожу брюшной стенки в области паха на уровне горионтальной линии седалищного бугра; свиньям - в область средней части наружной поверхности уха в двух сантиметрах от его основания. В кожу одного уха вводят туберкулин для млекопитающих, в кожу другого - туберкулин для птиц. Свиньям в возрасте 2-3 месяцев туберкулин лучше вводить в кожу поясничной области, отступая 5-8 см от позвоночника (с одной стороны - туберкулин для млекопитающих, с другой для птиц), используя для этого только безыгольный инъектор. Козам и овцам вводят в нижнее веко под кожу, отступая от его края на 1,5-2 см; собакам, и хищникам - в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки; обезьянам, пушным зверям, норкам - интрапальпебрально в верхнее веко; кошкам - в область внутренней поверхности уха; курам - в бородку; индейкам - в подчелюстную сережку; гусям, уткам - в подчелюстную складку; зоопарковой птице - в область наружной стороны голени на 1-2 см выше голеностопного сустава. Учет и оценку реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов и оленей проводят через 72 часа после введения препарата; у коз, овец, свиней, собак, кошек, обезьян, пушных зверей - спустя 48 часов; у птиц - через 30-36 часов. У зараженных животных в месте введения туберкулина образуется хорошо видимая припухлость тестоватой консистенции без четких границ с окружающей тканью. При учете туберкулиновой реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения препарата. Для удобства оценки реакции и нахождения места введения кожный покров выстригают в виде крестика и инъекцию проводят в центр скрещивания. При обнаружении изменений в месте введения туберкулина у крупного рога­того скота, буйволов, зебувидных, верблюдов и оленей считают реа­гирующими на туберкулин при утолщении кожной складки на 3 мм и более; быков-производителей - независимо от характера реакции; у коз, овец, свиней, птиц, собак, кошек, обезьян и пушных зверей - при образовании припухлости в месте введения туберкулина. В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах (садах, фермах) животных, реагирующих на туберкулин, признают больными, в бла­гополучных - их убивают для уточнения диагноза. Кроме внутрикожной туберкулиновой пробы, в практике используют глазную (офтальмопробу), которую применяют для диагностики туберкулеза лошадей и других представителей непарнокопытных. У крупного рогатого скота ее применяют только одновременно с внутрикожной туберкулиновой пробой в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах для дополнительного выявления зараженных животных. Глазную туберкулиновую пробу желательно проводить крупному рогатому скоту старше 6 лет. Ее проводят двукратно с интервалом 5-6 дней между введениями. Туберкулин в количестве 3-5 капель наносят шприцем с бегунком на поверхность роговицы при оттянутом нижнем веке. Учет реакции проводят через 6, 9, 12 и 24 часа после первого и через 3, 6, 9, 12 часов после повторного введения туберкулина. Образование характерного слизисто-гнойного или гнойного секрета, накопившегося в конъюктивальном мешке или вытекающего виде шнура из угла глаза или отеком конъюктивы. 2) Пальпебральный метод туберкулинизации крупного рогатого скота Этот метод применяют одновременно с внутрикожной туберкулиновой пробой для дифференциации специфических и параспецифических реакций при первичной постановке диагноза. Крупному рогатому скоту туберкулин вводят пальпебрально (в толщу века) в дозе 0,2 мл в нижнее веко, отступив от его края на 1,5-2 см. Учет и оценку реакции проводят через 72 часа после введения туберкулина. Животных считают реагирующими на туберкулин при образовании ощутимой припухлости в месте введения препарата. На пальпебральную пробу реагирует крупный рогатый скот, зараженный возбудителями бычьего и человеческого видов. Животные, инфици­рованные атипичными микобактериями, на пальпебральную пробу не реагируют. 3)Внутривенный метод туберкулинизации Этот метод применяют с целью отбора животных для диагностического убоя из числа реагирующих на туберкулин в благополучных по туберкулезу стадах. Внутривенную пробу разрешается проводить только у крупного рогатого скота старше 18 месяцев. Внутривенную пробу проводят 50 %-м раствором ППД- туберкулина для млекопитающих (флакон туберкулина разводят равным количеством физиологического раствора) и каждому животному внутривенно вводят по 1 мл препарата на 100 кг живой массы. Реакцию учитывают через 3, 6 и 9 часов после введения туберкулина путем измерения температуры тела животного. Реагирующими считают животных с повышенной на 0,9°С и более по сравнению со средней температурой тела животного. Внутривенное введение туберкулина у зараженных животных вызывает общую системную реакцию, клинически проявляющуюся повышением температуры тела, учащением пульса и дыхания, угнетением общего состояния животного. Эти явления достигают максимального развития через 6-8 часов. У некоторых животных, особенно с активным туберкулезным процессом, развивается шоковое состояние, которое может закончиться гибелью. При вскрытии у таких животных обнаруживают множественные кровоизлияния в брюшной и грудной полостях, кровонаполненность печени и селезенки, изменения в легких. При слабо выраженных реакциях простой визуальный осмотр может привести к неполному выявлению животных, больных туберкулезом. При проведении исследований животных, убитых с диагностической целью, нельзя ограничиваться только осмотром поверхности органов и лимфатических узлов. Необходимо сначала прощупать органы, а потом разрезать их в местах уплотнений, так как туберкулезные узелки по плотности отличаются от окружающей ткани. Необхо­димо прощупать и места разрезов, кусочки органов с уплотнениями, участками гиперплазии и кровоизлияниями отбирают для лабораторного исследования. После окончания аллергических исследований составляют акт с приложением описи исследованных животных, в котором указывают хозяйство, фермы, вид животных, количество исследованного поголовья, наименование, номер и срок годности, серии использованных препаратов, метод исследования. В опись записывают инвентарные номера, клички животных, отмечая величину кожной складки, если замечено утолщение. В акте на исследование скота частного сектора и фермерских хозяйств указывают наименование населенного пункта, фамилию владельца, пол, возраст исследованных животных и результаты исследования.

4. Оформить документы о проведении туберкулинизации. (Приложение 9)

Задание 4.Диагностическое исследование на бруцеллез.

Прочитать задания и письменно ответить на них

1. Описать технику введения бруцеллезных аллергенов различным видам сельскохозяйственных животных.

Для исследования на бруцеллез животных разных видов применяют следующие методы:

крупного рогатого скота, яков, зебу, буйволов

- серологический: реакция агглютинации в пробирках (РА),

реакция связывания комплемента (РСК) или реакция длительного

связывания комплемента (РДСК), пластинчатая реакция

агглютинации с Роз-Бен галантигеном - роз бенгал проба

(РБП), кольцевая реакция с молоком (КР), реакция

иммунодиффузии с О-ПС антигеном (РИД);

овец, коз, оленей, маралов, лошадей, верблюдов

- серологический: РА, РСК/РДСК, РБП;

свиней

- серологический: РСК/РДСК, РБП;

- аллергический;

собак и животных других видов

- серологический: РА, РСК.

Повторно животных исследуют на бруцеллез серологическими методами через 15-30 дней, а аллергическим - через 25-30 дней.

Коров (нетелей), буйволиц и верблюдиц исследуют независимо от периода беременности, овцематок (козематок) и свиноматок через 1-2 месяца после окота или опороса, молодняк животных всех видов - с 4-месячного возраста.

Крупный и мелкий рогатый скот, подвергавшийся иммунизации против бруцеллеза, исследуют на эту болезнь в порядке и в сроки, предусмотренные наставлением по применению вакцины, и дают оценку их состояния по бруцеллезу.

Профилактика и лечение. Общие и специфические мероприятия ветеринарной службы. Выявляют и ликвидируют бруцеллез среди сельскохозяйственных животных, обезвреживают продукты и сырье животного происхождения. Людей, подвергающихся опасности заражения, вакцинируют живой бруцеллезной вакциной. Лечение бруцеллёза затруднено внутриклеточным паразитизмом бруцелл, что защищает их от действия антимикробных препаратов и AT. Препаратами выбора считают тетрациклин и стрептомицин. В тяжёлых и упорных случаях можно назначить рифампин (рифамицин). Смертность без лечения может достигать 5-10%.

2. Описать основное оборудование и материалы для диагностического исследования на бруцеллез. Методы стерилизации инструментов.

Лабораторная диагностика. Проводится бактериологическим и серологическим методами. Материалом для бактериологического исследования служат кровь, испражнения и моча больных, иногда – спинномозговая жидкость. Выделением возбудителя занимается специальная режимная лаборатория.

Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО. Через 4-5 сут наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина; среда остаётся слегка мутной или прозрачной. После пересева на твёрдые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации.

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) - один из основных методов диагностики бруцеллёза. Динамика реакции может быть различной, для неё характерно колебание титров в течение суток; положительная реакция с первого дня заболевания; наиболее высокие титры отмечают через 1-2 мес. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя); в эндемичных очагах, вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг. Следует помнить, что для реакции Райта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и чёткое её проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона). В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного. Выявление неполных AT (реакция Кумбса) с применением антиглобулиновой сыворотки. Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 мес заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) - протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований; бывает положительной после вакцинации.

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.

3. Описать методы оценки реакции.

Оценку реакции проводили по схеме: Положительная реакция - утолщение кожной складки против физиологической нормы на 10 мм и более; Сомнительная реакция - утолщение кожной складки против физиологической нормы от 4 мм и более; Отрицательная реакция - отсутствие каких-либо признаков на введение аллергена.

4. Описать технику разведения и применения бруцеллезной вакцины. Способы метки вакцинированных животных.

1. Прививки животных вакциной из штамма Рев-1 разрешается проводить ветеринарным врачам и ветеринарным фельдшерам под контролем ветврача. Главные ветеринарные врачи районов обязаны проводить обучение ветеринарных специалистов хозяйств и учреждений государственной ветеринарной сети правилам проведения прививок вакциной животных. 2. Сухая живая вакцина готовится из слабовирулентного штамма Рев-1 бруцелла мелитензис. Вакцина представляет собой мелкозернистую массу светло-коричневого или серовато-желтого цвета. Выпускается в ампулах, запаянных под вакуумом и уложенных в коробки. 3. На каждой ампуле с вакциной должна быть надпись с указанием наименования вакцины, номера серии, срока годности и количества доз препарата. Ампулы с вакциной, не имеющие указанной надписи, а также разбитые, с трещинами, содержащие посторонние примеси или плесень, утратившие вакуум, с истекшим сроком годности препарата, упакованные в коробки без этикеток, бракуют, вскрывают и обеззараживают кипячением в течение 30 мин. 4. На этикетках коробок с вакциной должны быть указаны: наименование вакцины, наименование и товарный знак биопредприятия, изготовившего вакцину, номер серии и номер госконтроля, дата изготовления, срок годности, количество ампул в коробке и количество доз в ампуле, условия хранения вакцины и обозначение ТУ. В каждую коробку должно быть вложено наставление по применению вакцины. 5. Вакцина в ампулах под вакуумом пригодна для применения в течение 12 мес. со дня ее изготовления при условии хранения в холодильных камерах или в темном сухом помещении при температуре 2 - 10 °С. При хранении сухой вакцины при температуре выше 10 °С качество (активность) ее не гарантируется и применение не разрешается. В жаркое время года вакцину доставляют к месту применения в термочемоданах или термосах со льдом. 6. Перед применением сухую вакцину разводят специальным растворителем для сухих живых вакцин против бруцеллеза. При отсутствии такого растворителя допускается использование физиологического раствора. Разведение готовят из расчета, чтобы одна прививочная доза для животных составляла 2 мл разведенной вакцины. Для этого шейку ампулы в верхней части протирают смоченной спиртом ватой и обламывают стекло. В ампулу шприцем с иглой вносят 4 мл растворителя, осторожно встряхивают до превращения массы в равномерную взвесь. Разведенную в ампуле вакцину шприцем с длинной иглой отсасывают и переносят во флакон емкостью 500 - 1000 мл с предварительно налитым в него растворителем. С учетом жидкости, использованной для растворения вакцины, во флаконе должно быть столько растворителя, сколько требуется для приготовления необходимого количества доз вакцины в разведенном виде для прививки животных. Растворитель (физраствор), флаконы, шприцы, иглы, используемые для приготовления вакцины к применению, должны быть стерильными. 7. Приготовленную для применения вакцину защищают от прямого солнечного света и используют через 30 мин. после разведения в течение не более 4 ч. Остатки разведенной вакцины уничтожают путем кипячения в течение 30 мин. Обеззараживанию кипячением подлежат также ампулы и флаконы из-под использованной вакцины, шприцы и иглы. 8. Вакцину животным вводят подкожно в бесшерстное место за локтевым суставом. Для прививки каждого животного используют отдельную, предварительно простерилизованную иглу. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Во время прививок допускается стерилизация игл путем протирания их спиртом. Место введения вакцины протирают 70-процентным этиловым спиртом или 0,5-процентным раствором фенола. 9. Иммунитет против бруцеллеза и инфекционного эпидидимита у животных наступает через 3 нед. и сохраняется в течение не менее 2 лет после первичной прививки их вакциной. 10. Запрещается проводить прививки вакциной мелкого рогатого скота в период вспышки в хозяйстве (на ферме) острой инфекционной болезни (сибирская язва, ящур, пастереллез и др.), а также племенных животных, отобранных в благополучных по бруцеллезу хозяйствах к продаже на племенные цели хозяйствам других областей, краев и республик. 11. При проведении прививок животных вакциной прекращают применение антибиотиков (в лечебных и профилактических целях) в сроки: непролонгированных препаратов: бензилпенициллина, эритромицина, олеамдомицина - за сутки; хлортетрациклина, окситетрациклина, тетрациклина, левомицетина, полимиксина - за 3 сут.; стрептомицина, канамицина, неомицина, мономицина - за 7 сут. до вакцинации; пролонгированных антибиотиков: бициллина - за 6 сут.; дитетрациклина - за 25 и дибиомицина - за 30 сут. до вакцинации; любые антибиотики - в течение 15 сут. после вакцинации животных. 12. Каждое вакцинированное животное метят путем выщипа круглого отверстия в основании правого уха. Их берут на учет и за ними устанавливают наблюдение в течение 10 дней, имея в виду, что у привитых животных может повыситься температура тела, иногда отмечается кратковременная хромота. 13. Проведение вакцинации животных оформляют актом, в котором указывают наименование хозяйства, фермы, ее эпизоотическое состояние в отношении бруцеллеза или инфекционного эпидидимита, количество, пол и возраст вакцинированных животных, наименование предприятия, изготовившего вакцину, номер серии, дату изготовления и срок годности препарата. Один экземпляр акта направляют главному ветеринарному врачу района, другой хранят в хозяйстве.

5. Описать технику взятия крови у разных видов сельскохозяйственных животных и птицы.

Взятие крови для исследования у сельскохозяйственных животных производится разными способами. У лошадей, крупного и мелкого рогатого скота ее берут обычно из яремной вены, расположенной над тра