Раздел 3. Лабораторно-практические занятия
Занятие № 1
1. Тема: Введение в биохимический практикум.
2. Форма учебного процесса: Лабораторно-практическое занятие.
3. Актуальность темы: Знания, полученные на данном занятии, будут применяться в будущей практической деятельности, навыки работы на колориметре - для выполнения практических работ в курсе клинической биохимии.
4. Цель общая:
4.1.1. Познакомиться с основными правилами проведения лабораторных анализов, объектами биохимических исследований, основными методами, применяемыми в клинической биохимии.
4.1.2. Научиться работать на фотоэлектроколориметре (КФК), получить навыки работы с лабораторной посудой.
4.2. Конкретные цели:
Знать:
1. Правила техники безопасности при работе в биохимической лаборатории.
2. Принцип колориметрии и правила работы на КФК.
3. Принцип центрифугирования и области его применения.
Уметь:
1. Правильно пользоваться пипетками и другой мерной посудой.
2. Получить данные для построения калибровочного графика и построить его на примере определения содержания белка биуретовым методом.
Вопросы для самостоятельной подготовки студентов
1. Правила техники безопасности в биохимической лаборатории.
2. Значение биохимических анализов.
3. Оборудование биохимической лаборатории.
4. Мерная посуда и работа с ней.
5. Требования к анализируемому биологическому материалу.
6. Физико-химические методы в биохимии:
- колориметрия;
- центрифугирование;
- флюориметрия;
- пламенная фотометрия.
7. Способы оценки полученных результатов при фотоэлектроколориметрии:
- формула расчета;
- калибровочный график.
Учебно-исследовательская работа студентов на занятии
1. Построить калибровочный график на примере определения содержания белка биуретовым методом.
2. Определить содержание белка в предложенном биологическом материале биуретовым методом с использованием калибровочного графика.
Лабораторная работа
Определение белка биуретовым методом
| Оборудование: | 1. | Штатив с пробирками. |
| 2. | Пипетки на 0,1 мл и 5 мл. | |
| 3. | КФК. | |
| 4. | Кюветы на 1 см. | |
| Реактивы: | 1. | Биуретовый реактив. |
| 2. | Стандартный раствор белка (70 г/л). | |
| 3. | 0,9% раствор NaCl. | |
| 4. | Сыворотка крови. |
Принцип метода. Белки в щелочной среде образуют с сернокислой медью соединения сине-фиолетового цвета (биуретовая реакция). Интенсивность окраски пропорциональна концентрации.
Ход работы. В три пробирки внести реактивы согласно схеме:
| Реактивы (мл) | Опытная проба | Стандарт. проба | Контроль. проба |
| Сыворотка | 0,1 | - | - |
| Стандарт.р-р белка (70 г/л) | - | 0,1 | - |
| 0,9% раствор NaCl | - | - | 0,1 |
| Биуретовый реактив | 2,5 | 2,5 | 2,5 |
Пробы хорошо перемешать, оставить на 15 мин при комнатной температуре. Колориметрировать опытную и стандартную пробы при зеленом светофильтре в кювете толщиной 0,5 см против контроля.
Концентрацию белка рассчитать по формуле:
Х = ЕОП х ССТ/ ЕСТ ,
где: Х – концентрация белка в опытной пробе;
ЕОП – оптическая плотность опытной пробы;
ЕСТ - оптическая плотность стандартной пробы;
ССТ – концентрация стандартного раствора белка.
Концентрацию белка можно определить по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика берут три раствора с известной концентрацией белка в каждом из них. Эти образцы можно приготовить разведением исходного стандартного раствора белка концентрацией 70 г/л. Затем с каждым образцом проводят биуретовую реакцию как описано выше. Оптическую плотность этих растворов определяют на КФК. По результатам строят график зависимости оптической плотности от концентрации белка.
Занятие №2
1. Тема: Химия аминокислот, пептидов, белков и их функции.
2. Форма учебного процесса:Лабораторно-практическое занятие.
3. Актуальность темы:Знания, полученные на данном занятии, являются основой для изучения таких разделов биохимии как ферменты, обмен аминокислот и белков, биохимия регуляций. Они будут необходимы при обучении на клинических кафедрах.
4. Цель общая:
4.1.1. Повторить химию аминокислот и белков. Изучить их основные функции в организме.
4.2. Конкретные цели:
Знать:
1. Аминокислоты. Классификация. Свойства.
2. Пептиды. Классификация.
3. Белки. Строение. Свойства.
4. Белки плазмы крови. Функции.
Уметь:
1. Правильно пользоваться спиртовками, пипетками.
2. Проводить пробу Вельтмана и реакции осаждения белков кипячением.
3. Делать выводы по результатам проведенных опытов.
Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию
1. Аминокислоты, определение, классификация.
2. Функциональные группы аминокислот.
3. Физико-химические свойства аминокислот.
4. Биологическое значение аминокислот.
5. Определение пептидов, классификация, функции.
6. Белки. Определение, классификация. Функции.
7. Структуры белковых молекул. Физико-химические свойства белков.