Влияние физических факторов на микроорганизмы
Занятие № 14
ДЕЙСТВИЕ ФИЗИЧЕСКИХ И ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ
Цель занятия:
изучить действие на микробы физических и химических факторов; понятия «асептика» и «антисептика»; методы стерилизации и аппаратуру.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
- Действие на микроорганизмы высоких и низких температур, давления. Понятие «стерилизация».
- Понятия «асептика» и «антисептика»
- Методы стерилизации, аппаратура.
- Действие на микроорганизмы факторов высушивания. Лиофильное высушивание.
- Действие света, ультразвука, лучистой энергии, ионизирующей радиации.
- Действие химических факторов на микробы. Дезинфицирующие и антисептические вещества.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
- готовить посуду к стерилизации в сухожаровом шкафу и автоклаве;
- оценить результаты контроля стерильности работы автоклава и сухожарового шкафа;
- оценить результаты определения чувствительности микробов к антимикробным веществам (дезинфектанты, антисептики).
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ
об индексе токсичности при применении антисептиков; о режиме асептики при изготовлении лекарств; о химических консервантах крови, биопрепаратов, живых вакцин.
Методические указания
Работа № 1. Методы и режим стерилизации различных материалов
Цель:изучить методы стерилизации различных материалов.
Разработать и занести в тетрадь таблицу «Методы и режим стерилизации различных материалов».
Дано: таблица.
МЕТОДЫ И РЕЖИМ СТЕРИЛИЗАЦИИ РАЗЛИЧНЫХ МАТЕРИАЛОВ
Метод стерилизации | Аппаратура | Температура | Время (мин) | Материал |
Кипячение | ||||
Прокаливание | ||||
Автоклавирование | ||||
Сухим жаром | ||||
Пастеризация | ||||
Тиндализация | ||||
Фильтрование | ||||
Лиофильная сушка | ||||
Лучистая энергия | ||||
Ионизирующая радиация |
Вывод:____________________________________________________________
Работа № 2. Контроль эффективности стерилизации
Цель:оценить качество работы автоклава. Объяснить механизм стерилизации.
Дано: методические рекомендации, опыт № 1.
![]() | ![]() |
![]() | ![]() |
«К» «О»
Результат:___________________________________
Вывод:____________________________________________________________
Работа № 3. Определение чувствительности микроорганизмов к антисептикам
Цель:оценить чувствительность микробных клеток к антисептикам. Объяснить механизм действия антисептика в каждом конкретном случае. Зарисовать. Сделать вывод.
Дано: опыт № 2 (посев кишечной палочки с внесенными антисептиками - йод, метиленовый синий, карболовая кислота, хлорамин); таблица «Классификация антисептиков по механизму действия» (см. методические рекомендации).
![]() |
![]() | |||
![]() | |||
Результат:___________________________________
Вывод:____________________________________________________________
Теоретическая справка
Влияние физических факторов на микроорганизмы
Температура является наиболее значимым фактором, оказывающим влияние на жизнедеятельность микробов. Температура, необходимая для роста и размножения бактерий одного и того же вида варьирует в широких пределах. Различают температурный оптимум, минимум и максимум.
Температурный оптимум соответствует физиологической норме данного вида микробов, при которой размножение происходит быстро и интенсивно. Для большинства патогенных и условно-патогенных микробов температурный оптимум соответствует 370С.
Температурный минимум соответствует температуре, при которой данный вид микроба не проявляет жизнедеятельность.
Температурный максимум – температура, при которой рост и размножение прекращается, все процессы метаболизма снижаются и может наступить гибель.
В зависимости от температуры, оптимальной для жизнедеятельности, различают 3 группы микроорганизмов:
1) психрофильные, холодолюбивые, размножающиеся при температуре ниже 200С (иерсинии, психрофильные варианты клебсиелл, псевдомонады, вызывающие заболевания человека. Размножаясь в пищевых продуктах, они более вирулентны при низких температурах);
2) термофильные, оптимум развития которых лежит в пределах 550С (в организме теплокровных не размножаются и медицинского значения не имеют);
3) мезофильные, активно размножаются при температуре 20-400С, оптимум температуры развития для них 370С (патогенные для человека бактерии).
Микроорганизмы хорошо выдерживают низкие температуры. На этом основано длительное сохранение бактерий в замороженном состоянии. Однако ниже температурного минимума проявляется повреждающее действие низких температур, обусловленное разрывом клеточной мембраны кристаллами льда и приостановкой метаболических процессов.
Низкая температура приостанавливает гнилостные и бродильные процессы. Это лежит в основе консервации субстратов (в частности, пищевых продуктов) холодом.
Губительное действие высокой температуры (выше температурного максимума для каждой группы) используется при стерилизации. Стерилизация – обеспложивание – это процесс умерщвления на изделиях или в изделиях или удаление из объекта микроорганизмов всех видов, находящихся на всех стадиях развития, включая споры (термические и химические методы и средства). Для гибели вегетативных форм бактерий достаточно действия температуры 600С в течение 20-30 мин; споры погибают при 1700С или при температуре 1200С пара под давлением (в автоклаве).
Асептика– комплекс мероприятий, направленных против возможности попадания микроорганизмов в рану, ткани, органы, полости тела больного при хирургических операциях, перевязках, инструментальных исследованиях, а также на предотвращение микробного и другого загрязнения при получении стерильной продукции на всех этапах технологического процесса.
Антисептика – комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направленных на уничтожение микроорганизмов, способных вызвать инфекционный процесс на поврежденных или интактных участках кожи или слизистых оболочек.
Дезинфекция– обеззараживание объектов окружающей среды: уничтожение патогенных для человека и животных микроорганизмов с помощью химических веществ, обладающих антимиробным действием.
Рост и размножение микробов происходит при наличии воды, необходимой для пассивной и активного транспорта питательных веществ в цитоплазму клетки. Снижение влажности (высушивание) приводит к переходу клетки в стадию покоя, а затем к гибели. Наименее устойчивыми к высушиванию являются патогенные микроорганизмы – менингококки, гонококки, трепонемы, бактерии коклюша, ортомиксо-, парамиксо- и герпес-вирусы. Микобактерии туберкулеза, вирус натуральной оспы, сальмонеллы, актиномицеты, грибы устойчивы к высушиванию. Особой устойчивостью к высушиванию обладают споры бактерий. Устойчивость к высушиванию повышается, если микробы предварительно замораживают. Для сохранения жизнеспособности и стабильности свойств микроорганизмов в производственных целях используется метод лиофильной сушки - высушивание из замороженного состояния под глубоким вакуумом.
В процессе лиофилизации производят: 1) предварительное замораживание материала при t -400 - -450 С в спиртовых ваннах в течение 30-40 мин; 2) осуществляют сушку из замороженного состояния в вакууме в сублимационных аппаратах в течение 24-28 часов.
Процесс высушивания имеет 2 фазы: сублимация льда при t ниже 0°С и десорбцию - удаление части свободной и связанной воды при t выше 0°С.
Лиофилизацию используют для получения сухих препаратов, когда не происходит денатурации белков и не изменяется структура материала (антисыворотки, вакцины, сухая бактериальная масса). В лабораторных условиях лиофилизированные культуры микробов сохраняются в течение 10-20 лет, причем культура остается чистой и не подвергается мутациям.
Прокаливание производят в пламени спиртовки или газовой горелки. Этим способом стерилизуют бактерирологические петли, препаровальные иглы, пинцеты и некоторые другие инструменты.
Кипячениеприменяют для стерилизации шприцев, мелкого хирургического инструментария, предметных, покровных стекол и т.д. Стерилизацию проводят в стерилизаторах, в которые наливают воду и доводят ее до кипения. Для устранения жесткости и повышения температуры кипения к воде добавляют 1-2% бикарбонат натрия. Инструменты обычно кипятят в течение 30 мин. Данный метод не обеспечивает полной стерилизации, так как споры бактерий при этом не погибают.
Пастеризация- стерилизация при 65-70°С в течение 1 часа для уничтожения бесспоровых микроорганизмов (молоко освобождается от бруцелл, микобактерий туберкулеза, шигелл, сальмонелл, стафилококков) Хранят на холоде
Тиндализация- дробная стерилизация материалов при 56-580С в течение 1 часа 5-6 дней подряд. Применяется для стерилизации легко разрушающихся при высокой температуре веществ (сыворотка крови, витамины и др.).
Действие лучистой энергиина микроорганизмы. Солнечный свет, особенно его ультрафиолетовый и инфракрасный спектры, губительно действуют на вегетативные формы микробов в течение нескольких минут.
Инфракрасное излучение используется для стерилизации объектов, которая достигается за счет теплового воздействия температурой 3000С в течение 30 мин. Инфракрасные лучи оказывают воздействие на свободнорадикальные процессы, в результате чего нарушаются химические связи в молекулах микробной клетки.
Для дезинфекции воздуха помещений лечебно-профилактических учреждений и аптек широко используются ртутно-кварцевые и ртутно-увиолевые лампы, являющиеся источником ультрафиолетовых лучей. При действии УФЛ с длиной волны 254 нм в дозе 1,5-5 мк Вт т/с на 1 см2 при 30-ти минутной экспозиции погибают все вегетативные формы бактерий. Повреждающее действие УФ излучения вызвано повреждением ДНК микробных клеток, приводящим к мутациям и гибели.
Ионизирующая радиацияобладает мощным проникающим и повреждающим действием на клеточный геном микробов. Для стерилизации инструментов одноразового использования (игл, шприцев) используют гамма-излучение, источником которого являются радиоактивные изотопы 60Со и 137Сs в дозе 1,5-2 МN.рад. Этим методом стерилизуют также системы переливания крови и шовный материал. Действие ультразвука в определенных частотах на микроорганизмы вызывает деполимеризацию органелл клетки, денатурацию входящих в их состав молекул в результате локального нагревания или повышения давления. Стерилизация объектов ультразвуком осуществляется на промышленных предприятиях, так как источником УЗ являются мощные генераторы. Стерилизации подвергаются жидкие среды, в которых убиваются не только вегетативные формы, но и споры.
Стерилизация фильтрованием- освобождение от микробов материала, который не может быть подвергнут нагреванию (сыворотка крови, ряд лекарств). Используются фильтры с очень мелкими порами, не пропускающими микробы: из фарфора (фильтр Шамберлена), каолина, асбестовых пластинок (фильтр Зейтца). Фильтрование происходит под повышенным давлением, жидкость нагнетается через поры фильтра в приемник или создается разрежение воздуха в приемнике и жидкость всасывается в него через фильтр. К фильтрующему прибору присоединяется нагнетающий или разрежающий насос. Прибор стерилизуют в автоклаве.