Работа № 3. Методы изучения антибиотикочувствительности

Занятие № 15

ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА МИКРООРГАНИЗМЫ. АНТИБИОТИКИ. БАКТЕРИОФАГИ

Цель занятия:

Изучить характер влияния и механизмы действия биологических факторов на микроорганизмы; химиотерапевтические вещества.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Биологические факторы, влияющие на микроорганизмы.
2. Химиотерапия. Понятие о химиотерапевтических препаратах и химиотерапевтическом индексе. Принципы антимикробной терапии.
3. Микробный антагонизм, его механизмы. Микроорганизмы-антагонисты – продуценты антибиотиков.
4. Классификация антибиотиков по химическому строению, происхождению, механизму и спектру антимикробного действия, способам получения.
5. Методы изучения антибиотикочувствительности бактерий.
6. Механизмы лекарственной устойчивости возбудителей инфекционных болезней. Пути ее преодоления.
7. Осложнения антибиотикотерапии, их предупреждение.
8. Бактериофаги (умеренные и вирулентные). Принципы применения в медицине.
9. Эубиотики (пробиотики).

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

• определять чувствительность бактерий к антибиотикам и бактериофагам; расшифровать антибиотикограмму и определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ

о возможности использования бактериофагов для выявления источников инфекции (эпидемическое маркирование – метод фаготипирования).

Работа № 1. Микробный антагонизм

Цель работы:

а) объяснить механизм микробного антагонизма между кишечной палочкой (штамм E. coli М-17) и вибрионом (водный вибрион). Зарегистрировать результат опыта действия бактериоцинов.

водный вибрион

кишечная палочка

Результат:___________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________

б) Объяснить назначение и механизм действия эубиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу.

Название	Действующее начало	Получение	Применение	Способ применения

Вывод:______________________

Работа № 2. Фитонциды

Цель работы:определить действие фитонцидов чеснока на микроорганизмы (сарцину, кишечную палочку, стафилококк). Объяснить, почему препараты из фитонцидов не нашли широкого применения в медицине.

Сарцина

Стафилококк

Кишечная палочка

Результат:_____________________________________

Вывод:_______________________________________________________________

Работа № 3. Методы изучения антибиотикочувствительности

• Метод бумажных дисков

Цель работы:определить чувствительность бактериальной культуры к антибиотикам по алгоритму. Зарисовать, сделать вывод.

Алгоритм чтения антибиотикограммы

а) Замерить на чашке со средой АГВ (агар Гурьева-Васильева) диаметр задержки роста (зона задержки роста) в мм.

Результат:______

б) По таблице оценить полученные результаты, данные внести в таблицу.

№ п/п	Название антибиотика	Диаметр задержки роста (мм)	Устойчивые	Умеренно устойчивые	Чувствительные

Вывод:_______________________________________________________________

• Метод серийных разведений

Цель работы:определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков по отношению к культуре золотистого стафилококка (St. aureus). Выбрать антибиотик для лечения.

Дано: разведения антибиотиков гентамицин и ампициллин с одинаковой дозой

внесенной культуры.

Гентамицин к.к. к. а/б к.б.

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:______

Ампициллин к.к. к. а/б к.б.

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:______

Вывод:_______________________________________________________________

Работа № 4. Методы изучения бактериальных вирусов (фагов)

а) Метод Отто

Цель работы:учесть результат опыта по определению видовой принадлежности исследуемой культуры, выделенной от больного с кишечной инфекцией неясной этиологии (КИНЭ) с помощью диагностических бактериофагов.

Дано: культура и бактериофаги: 1. коли-протейный, 2. дизентерийный, 3. сальмонеллезный.

Результат:______

Вывод:_______________________________________________________________б) классифицировать набор предложенных бактериофагов по назначению, объяснить невозможность применения диагностических фагов для лечения.

Вывод:______________

Теоретическая справка

Микробный антагонизм

При посеве исследуемого материала или смеси микробов присутствие микробов-антагонистов обнаруживается по светлым зонам, окружающим их колонии. Эти зоны свидетельствуют о подавлении роста угнетаемого микроба, причем величина зоны угнетения определяет ту или иную степень активности антагониста. Механизмы микробного антагонизма: 1) разная скорость роста микроорганизмов; 2) синтез метаболитов: экзотоксинов и бактериоцинов.

Методика.

На чашку с МПА широкой полосой засевают суточную бульонную культуру E.coli М-17. Через сутки перпендикулярно посеву вплотную подсевают суточную бульонную культуру угнетаемого микроба (вибрион). Результат учитывают через сутки пребывания в термостате: рост угнетаемого микроба отступает от полосы, заселенной антагонистом.

Практическое значение антагонизма для медицины:1) использование микробов-антагонистов для производства антибиотиков; 2) применение эубиотиков (пробиотиков) - бактериальных препаратов, содержащих живые антагонистически действующие микроорганизмы, для угнетения патогенных и условно-патогенных микробов и лечения нарушений нормального микробиоценоза кишечника (дисбактериоза): колибактерин, бифидумбактерин, лактобактерин, бификол.

Механизм действия пробиотиков (эубиотиков): лечебный эффект обусловлен антагонистическим действием эубиотиков к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам. Иммунотропное действие проявляется стимуляцией макрофагального фагоцитоза, нормализацией соотношения Т-хелперов, Т-супрессоров, активацией Т-киллеров, индукцией интерферона Оказывают корригирующее действие на микробиоценоз, стимулируют местные репаративные процессы в кишечнике, обеспечивают организм витаминами групп В и К, способствуют полноценному перевариванию пищи.

Схема описания пробиотиков:

Название препарата ………………….

Классификационное положение:пробиотик

Действующее начало: метаболиты - бактериоцины

Получение: методом лиофильной сушки живых представителей нормальной микрофлоры организма человека

Применение: для коррекции дисбактериоза

Способ применения: перорально

Фитонциды

Фитонциды - антибиотики,образуемые высшими растениями. Подробное изучение антибиотических веществ высших растений было проведено русским ученым Б. П. Токиным (1951 г). Биологически активные вещества высших растений Токин назвал фитонцидами (продуцентами являются эвкалипт, лук, чеснок черемуха, сосна и др.). В настоящее время изучено большое число антибиотиков образуемых высшими растениями, некоторые из них получены в химически чистом виде. Это аллицин, рафанин и др. Однако следует знать, что большинство из них является эфирными соединениями и в результате этого при изготовлении и хранении быстро утрачивают антимикробную активность.

Антибиотики

Антибиотики –химические соединения биологического происхождения, оказывающие избирательно повреждающее или губительное действие на микроорганизмы. Антибиотики, применяемые в медицинской практике, продуцируются актиномицетами (лучистыми грибами), плесневыми грибами, а также некоторыми бактериями. К этой группе относят также и синтетические аналоги и производные природных антибиотиков.

По спектру микробного действия антибиотики отличаются: одни влияют преимущественно на Гр⁺ бактерии (биосинтетические пенициллины, макролиды), другие – в основном на Гр^- бактерии (полимиксины). Ряд антибиотиков обладает широким спектром действия (полусинтетические пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, тетрациклины, левомицетин, рифампицин и т.д.).

Антибиотики воздействуют на микроорганизмы, оказывая бактериостатический эффект, подавляя их размножение, или бактерицидный эффект, вызывая гибель микробов.

Известны следующие основные механизмы антимикробного действия антибиотиков:

1. нарушение синтеза клеточной стенки бактерий (пенициллины, цефалоспорины);

2. нарушение проницаемости цитоплазматической мембраны (полимиксины);

3. нарушение биосинтеза белка (тетрациклины, аминргликозиды. левомицетин и др);

4. нарушение синтеза ДНК (рифампицин).