Материальное обеспечение

Для бактерий: аквариумы с отстоявшейся водой, рыба для по­становки биологической пробы, изотонический раствор хлорида натрия, оптический стандарт мутности, стери­лизатор со стерильными шприцами и иглами для внутрикожных, внутримышеч­ных и внутривенных инъекций, скарификатор, скальпель, пинцет анатомический, ножницы, стерильные ватные тампоны, спирт в баночке, спиртовка, спички, мар­левые салфетки для заворачивания рыбы, лоток или кювета для отработанных тампонов, стерильные пробирки, градуированные пипетки на 1,0 и 5,0 мл.

Для вирусов: вируссодержащая культуральная жидкость, культуральная жидкость незараженной культуры клеток, рыба, чувствительная к данному вирусу, стерильные шприцы с иглами.

Для грибов: инокулюм гриба (частицы мицелия, конидии или зооспоры), микроскоп, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, микологические крючки, лезвия безопасной бритвы, пинцеты, скальпели.

Для установления окончательного диагноза на инфекционную болезнь в ряде случаев, а также при решении вопроса о снятии карантина или каран­тинных ограничений с хозяйства при аэромонозе (краснухе), фурункулезе и др. ставят биологическую пробу. При постановке ее с целью определения патогенности и вирулентности возбудителей используют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовлен­ные из различных органов и тканей больных или подозреваемых в заражении рыб.

Вирулентность – биологическое свойство микроорганизмов, ко­торое характеризует степень их патогенности в момент изучения, является индивидуальным признаком и может варьировать в очень широких пределах.

Степень вирулентности характеризуется способностью изучае­мой культуры вызывать развитие клинических признаков и гибель экспериментально зараженных рыб и зависит, как от культурально-морфологических и токсигенных свойств возбудителя, так и от резистентности рыбы, связанной с ее видом, возрастом, условиями содержания (особенно температурного режима), а также от спосо­ба заражения.

Биопробы ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей по основ­ным гидрохимическим показателям. Наблюдения ведут ежедневно, учитывают число погибших рыб, клинические признаки болезни и характер патолого-анатомических изменений. Длительность опытов устанавливают с учетом инкубационного периода и длительности течения заболевания в естественных условиях. В опыты отбирают рыб наиболее восприимчивого к данному забо­леванию вида и возраста из благополучного хозяйства. В каждой серии для заражения и контроля берут не менее 10 рыб.

Для подтверждения бактериальной природы болезни испытывают чистые культуры, выделенные при бактериологическом исследовании. Здоровых рыб заражают 2-суточными бульонными культурами внутрибрюшинно или внутримышечно в дозах 0,1-0,2 мл. Очень молодые или старые культуры для биопробы не пригодны, так как они недостаточно проявляют свои виру­лентные свойства. Музейные штаммы перед опытом пассируют через вос­приимчивых рыб.

При вирусных болезнях в качестве инфекционного материала берут свежеприготовленную вируссодержащую суспензию культуры клеток или безбактериальные фильтраты суспензий патологического материала (органов больных рыб). Количество вируссодержащего материала и способ заражения подбирают индивидуально для каждого заболевания. Наиболее часто мате­риал вводят внутрибрюшинно, контактным методом, орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей вирус. Параллельно ставят конт­рольные опыты.

При постановке биологической пробы для диагностики микозов исполь­зуют нативный материал, в котором содержится возбудитель на всех ста­диях развития, или выращивают патогенные грибы на специальных пита­тельных средах до стадий, пригодных для заражения. Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном слу­чае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биологическая проба считается положительной, если не менее чем у 80% зараженных рыб четко проявляется весь комплекс клинических признаков и патолого-анатомических изменений болезни и погибает не менее 50% боль­ных рыб при полном сохранении их в контроле, а также при выделении от заболевших рыб исходных возбудителей. Сроки появления клинических признаков болезни и гибель рыб для каждой болезни различны.

По окончании опытов воду в аквариумах обеззараживают, создавая в ней 4 %-ную концентрацию формалина или 10%-ную раствора хлорной извести. Через час воду спускают в канализационную сеть, а рыб сжигают. Весь инвентарь и посуду, бывшие в контакте с больной рыбой, дезинфици­руют в 4%-ном растворе формалина в течение часа.

При завершении биологической пробы в бетонированных бассейнах, земляных садках, карантинных прудах проводят дезинфекцию воды хлори­рованием, доводя содержание свободного хлора в воде до 4-5 мг/л. Через 24 ч воду пропускают через известковый фильтр (используя только свежую негашеную известь). После этого ложа прудов или садков и бассейны дезин­фицируют негашеной известью (10 т/га) или хлорной известью (3 т/га) и оставляют без воды на один месяц.

В случае, если ставится вопрос о снятии карантина или других ограни­чений, биопробу проводят непосредственно в прудах хозяйства согласно инструкции по борьбе с соответствующим заболеванием.

Контрольные вопросы

1. Что такое биопроба и для чего она проводится?

2. Какие требования предъявляются к рыбе, используемой для биопробы?

3. Каковы требования, предъявляемые к условиям содержания рыбы при постановке биопробы?

4. Что используют в качестве патологического материала для заражения рыбы?

5. Что такое инкубационный период и от чего он зависит?

6. Каковы пути введения патологического материала и для воспроизведе­ния каких заболеваний они применяются?

7. На чем основан выбор путей введения патологического материала при каждом конкретном заболевании?

8. Какие контроли ставят в биопробе и для чего?

9. В каком случае биопроба считается положительной?