Методы обнаружения микроорганизмов в воде

Для обнаружения микроорга­низмом в воде и других биосубстратах и определения их количества могут быть использованы бактериологическийи микроскопическийметоды.

Основные этапы бактериологического исследования:гомогенизация образца, десорбция микроорганизмов с плотных частиц, приготовле­ние разведений, посев на питательные среды, идентификация выде­ленных культур.

Гомогенизациюобразца проводят для равномерного распределения бактерий в анализируемом объекте. При исследовании жидких, плот­ных, сыпучих продуктов, в зависимости от характеристик испытуе­мого материала, используют перемешивание простым встряхиванием или специальные приборы.

Десорбциябактерий с плотных частиц необходима для анализа объектов твёрдой консистенции. Для этого материал суспензируют в жидкости или с поверхности объекта берут смывы и отпечатки. При суспензировании к навеске образца массой 10 г добавляют 90 см³ воды и интенсивно перемешивают (вручную или в гомогенизаторе). В даль­нейшем условно принимают 1 см³ полученной суспензии эквивалент­ным 0,1 г исходного материала.

Общие колиформные бактерии – грамотрицательные, оксидазонегативные, не образующие спор палочки, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре +37 °С в течение 24-48 ч.

Термотолерантные колиформные бактерии – входят в состав ОКБ и обладают всеми их признаками, но ферментируют лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре +44 °С в течение 24 ч.

Сульфитредуцирующие клостридии- спорообразующие анаэроб­ные палочковидные микроорганизмы, восстанавливающие сульфит натрия в условиях культивирования на железо-сульфитном агаре при температуре 44 °С в течение 16-18 ч.

Коли-фаги– бактериальные вирусы, способные лизировать Е. coli и формировать при температуре 37 °С через 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки) на питательном агаре.

Санитарно-показательные микроорганизмы, характеризующие загрязнение почвы.

Общее количество бактерий - количество микроорганизмов, образующих колонии на МПА при температуре 37 °С в течение 24 ч, - суммарный показатель микробиологического загрязнения почвы микрофлорой преимущественно фекального происхождения.

Термофильные микроорганизмы - микроорганизмы, образующие колонии на МПА при температуре 60 °С в течение 24 ч, - показатель загрязнения почвы компостом или навозом. Почвы, показывающие высокое содержание кишечных палочек и низкое - термофилов, считают фекально загрязнёнными.

БГКП- грамотрицательные не образующие спор короткие палочки, ферментирующие лактозу и глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24-48 ч, не обладающие оксидазной активностью.

Перфрингенс-титр - титр грамположительных облигатно-анаэробных спорообразующих палочек, восстанавливающих сульфиты. Присутствие Clostridium perfringens (споровых форм) свидетельствует о давнем фекальном загрязнении.

Аммонификаторы - микроорганизмы, превращающие азот в катионы аммония. Аммонификация (гниение) белков - результат деятельности гнилостной микробиоты (актиномицеты, грибы, анаэробные бациллы). Высокое содержание в почве этой микробиоты свидетельствует о присутствии органических веществ.

Нитрификаторы - микроорганизмы, окисляющие азот из солей аммония в нитраты и нитриты. К этой группе относятся представители родов Nitrosococcus, Nitrosolobus, Nitrosobacter. Их присутствие свидетельствует о наличии органического загрязнения и активно идущих процессах самоочищения.

Аэробные целлюлозоразрушающие микроорганизмы - почвенная микробиота, использующая целлюлозу в качестве источника углерода. В этой группе велика роль неспоровых бактерий, базидиальных, дрожжеподобных и несовершенных грибов.

Общая численность сапрофитов - количество микроорганизмов образующих колонии на МПА при температуре 28-30 °С в течение 72 ч. Высокая численность сапрофитной микробиоты свидетельствует об органическом загрязнении почвы.

Патогенные микроорганизмы - сальмонеллы (Salmonella spp.), патогенные клостридии (С. tetani, С. botulinum), возбудитель сибирской язвы (Bacillus anthracis), вирусы.

З А Н Я Т И Е11

Дата ______________

Тема: Санитарно-бактериологическое исследование воды, воздуха, почвы (2 день). Исследование кала на дисбактериоз (разбор схемы).

План занятия:

1. Знакомство с микрофлорой человеческого тела. Регистрация результатов посева отпечатков пальцев и слизи из зева.

2. Провести регистрацию результатов посева воздуха седиментационным методом Р. Коха.

3. Исследование кала на дисбактериоз (разбор схемы).

Методические указания

1.Сосчитать количество колоний, выросших на МПА и среде Эндо из посевов отпечатков пальцев, особо обратив внимание на колонии кишечной палочки на среде Эндо. Промикроскопировать при ок­раске по Граму несколько колоний со среды Эндо и МПА.

Промикроскопировать колонии, выросшие при посеве слизи из зева (окраска по Граму). Результаты работы оформить в виде протокола.