Определение группы крови в системе АВО

Для предотвращения осложнений при переливании крови вследствие реакции агглютинации необходимо предварительно определять группу крови человека.

Цель работы: определить группы крови в системе АВО (с помощью цоликлонов).

Оснащение: цоликлоны, стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования — человек.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины (антитела).

На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно следующие агглютинины: I-α и β, II-β и III - α. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество её в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.

1. Если агглютинации нет во всех трёх каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.

2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины α + β и α, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит II (А) группе.

3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины α + β и β, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III (В) группе.

4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно α + β, β и α агглютинины, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV (АВ) группе.

В последнее время определение групп крови человека системы АВО проводят с помощью цоликлонов Анти-А и Анти-В (антитела моноклональные Анти-А и Анти-В), которые применяют или взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Таблица 1. Оценка результатов определения групп крови с применением цоликлонов

Результаты реакции с цоликлоном	Группа крови
Анти-А	Анти-В
-	-	0 (1)
+	-	А (II)
-	+	В(III)
+	+	АВ (IV)

Проведение работы. Нанесите на пластину индивидуальными пипетками цоликлоны Анти-А и Анти-В по одной большой капле. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.

Оформление протокола. Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите: реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь и кровь какой группы можно переливать вам?

Ситуационные задачи для определения конечного уровня знаний студентов:

Задача№1

При длительном голодании у людей появляются так называемые голодные отёки. В чём причина?

Задача №2

Человек съел недоброкачественную пищу. Через некоторое время у него обнаруживается повышение вязкости в крови. Чем можно объяснить это?

Задача№3

При исследовании крови обнаружено, что 80% гемоглобина составляет фетальный гемоглобин. Кому принадлежит кровь?

Задача №4

При подсчёте в больших квадратах камеры Горяева оказалось 580 эритроцитов. Сколько их содержится в 1мл крови, если кровь в меланжер набиралась до метки 0,5?

Задача №5

В 25 больших квадратах камеры Горяева оказалось 100 лейкоцитов. Сколько их содержится в 1мм³ крови, если она набиралась в меланжер до метки 0,5?

Задача №6

В 1мм³ крови содержится 6млн. эритроцитов. Сколько всего их в циркулирующей крови, если 20% всей крови находится в кровяном депо? Вес тела принять за 80кг.

Задача №7

В результате переливания несовместимой группы крови произойдет склеивание эритроцитов, что в дальнейшем приведет к гемолизу. Назовите вид гемолиза?

Задача №8

Почему женщинам запрещено работать на производстве с высоким уровнем вибрации, водить большегрузные машины и т.д.?

Задача №9

В чём причина увеличения билирубина в крови при отравлении уксусной кислотой?

Задача №10

Кровь отца резус-положительная, матери резус-отрицательная, первая беременность. Существует ли опасность резус-конфликта матери и плода, если плод имеет резус-положительную кровь?

Задача №11

Отец имеет резус-отрицательную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между плодом и матерью?

Задача №12

Почему при остром психическом стрессе может произойти инфаркт миокарда?

Задача №13

Свёртывание крови представляет собой сложный многокомпонентный «каскадный» ферментативный процесс. Нормальное протекание каждой предшествующей фазы обеспечивает развитие и завершение каждой последующей. Что происходит в первую, вторую и третью фазы коагуляционного гемостаза? Что включает послефаза гемокоагуляции?

Задача №14

Для нормального протекания свёртывания крови необходим ряд факторов: протромбин, тромбопластин, АС – глобулин, ионизированный кальций, проконвертин и др. Назовите фактор, участие которого необходимо для протекания всех фаз гемокоагуляции. Какой фактор обеспечивает превращение растворимого фибрин – полимера в нерастворимый фибрин? Где образуется протромбин? Какие факторы принимают участие в образование плазменной и тканевой протромбиназ?

ЗАНЯТИЕ №10

Итоговое занятие №2.Тестированию и обсуждению подлежат вопросы предыдущих тем (6 – 9).

ЗАНЯТИЕ №11

ТЕМА: Этапы дыхания (внешнее дыхание, газообмен в лёгких, транспорт газов). Функциональная система, поддерживающая постоянство газового состава крови.

Дыханием называется совокупность процессов, обеспечивающих обмен кислорода и углекислого газа между организмом и внешней средой. Процессы эти имеют определённую последовательность. Газообмен между лёгкими и внешней средой называется лёгочной вентиляцией (внешним дыханием); между альвеолами и кровью – лёгочным дыханием; между лёгкими и тканями – тканевым (клеточным) дыханием. Обязательным компонентом дыхания является транспорт газов кровью. Дыхательная система представляет собой совокупность органов, выполняющих воздухопроводящую и газообменную функции. В неё входят полость носа, носоглотка, гортань, трахея, бронхи и лёгкие.

Деятельность функциональной системы дыхания всегда подчинена удовлетворению дыхательной потребности организма, которая в значительной степени определяется тканевым метаболизмом. Для компенсации повышенной дыхательной потребности увеличивается интенсивность лёгочной вентиляции, что выражается в увеличении частоты и глубины дыхания.

Цель занятия:

1) знать:

- значение дыхания для организма и его этапы;

- биологическое значение оксигемоглобина;

- эффект Бора;

- строение и функции лёгкого;

- характеристику лёгочной вентиляции;

- понятие функциональной системы газового состава крови и её компоненты;

2) уметь:

- приготовить модель Дондерса;

- нарисовать кривую диссоциации оксигемоглобина и двуокиси углерода.

Методическое и техническое оснащение занятия:

Основная литература:

1) Физиология человека под редакцией Покровского В.М., Коротько Г.Ф. М.: Медицина, 1998 г.

2) Физиология человека. Курс лекций под редакцией Агаджаняна Н.А., Циркина В.И. Сотис, 1998 г.

3) Физиология. Курс лекций под ред. К.В. Судакова. М.: Медицина, 2000 г.

4) Практикум по нормальной физиологии. Москва. Издательство Российского университета дружбы народов, 1996 г.

5) Задания на самоподготовку к практическим занятиям по нормальной физиологии./ Под ред. Ю.Г. Ткаченко. Курск, 1993 г.

6) Руководство к практическим занятиям по физиологии./ Под ред. К.В. Судакова.- М.: Медицина, 2002 г.

Дополнительная литература:

1) Нормальная физиология: учебное пособие для студ. вузов: в 3-х томах. Частная физиология/ В.Н.Яковлев, И.Э. Есауленко, А.В. Сергиенко и др. Под ред. Яковлева В.Н. – М.: Академия, 2006 г.

2) Физиология человека: Учебник в 3-х томах./ М. Циммерман, В. Ениг, В. Вутке и др. Пер. с англ. Алипова Н.Н. и др. под ред. Костюка П.Г. – 2-е изд. доп., перераб.- М.: Мир,1996 г.

3) Словарь физиологических терминов. / Под ред. О.Г. Газенко. - М., " Наука ", 1987 г.

4) Учебные таблицы, видеофильмы, набор тестов.

Основные вопросы темы, подлежащие тестированию и обсуждению:

1) Воздухоносные пути и их значение в дыхании для организма в целом.

2) Строение и функции лёгкого.

3) Внешнее дыхание (механизмы вдоха и выдоха).

4) Давление в плевральной полости. Пневмоторакс.

5) Характеристика лёгочной вентиляции. Значение и объём «мёртвого» пространства. Сурфактант.

6) Газообмен в лёгких и факторы его определяющие.

7) Функциональная система, поддерживающая газовый состав крови. Динамика её работы.

8) Газообмен в лёгких.

9) Транспорт кислорода. Кривая диссоциации оксигемоглобина и её биологическое значение. Эффект Бора.

10) Транспорт двуокиси углерода. Кривая диссоциации двуокиси углерода. Зависимость pH от содержания двуокиси углерода и кислорода.

Задания для самостоятельной работы на занятии:

Практическая работа №1

Расчёт дыхательных показателей (должного минутного объёма дыхания, ДМОД) по стандартизированным формулам

Многие показатели функции внешнего дыхания существенно зависят от конституции обследуемого, размеров тела (масса, рост), возраста, пола, физической подготовки и даже характера профессиональной деятельности. Поэтому при анализе полученных данных фактические значения следует сопоставлять с должными величинами. В норме отклонения фактических значений дыхательных показателей от должных колеблются в пределах 10-15%.

Цель работы: рассчитать ДМОД по стандартизированной формуле.

Содержание работы: должный минутный объём дыхания (ДМОД) рассчитывают по следующей форме:

ДМОД = ДОО / (7,07х40),

где ДОО – должный основной обмен (вычисляют по таблицам и формулам).

Таблица 1. Формулы для расчёта ДОО (должного основного обмена)

Пол	Должный основной объём
Мужчины Женщины	66,47+13,7Р+5Н-6,75А 65,59+19,56Р+1,85Н-4,67А
Р-масса тела, кг; Н-рост, см; А-возраст, годы

Минутный объём дыхания (МОД) – количество вентилируемого в лёгких воздуха за 1 минуту.

МОД=ДОхЧД,

где ДО – дыхательный объем, ЧД – частота дыхания.

Оформление протокола. Сравните полученные должные величины с рассчитанными фактическими, вычислите % отклонения.

Практическая работа №2