Лабораторная работа № 3.14. Определение группы крови (в системе АВО).
Цель работы: определить групповую принадлежность с помощью стандартных сывороток и синтетических цоликлонов.
Оборудование:цоликлоны анти-А, и анти-В, предметное стекло, белая бумага, стеклянные палочки, стерильный скарификатор, спирт, вата и карандаш по стеклу.
ХОД РАБОТЫ
1. Взять предметное стекло, карандашом по стеклу нанести цифры 1, 2.
2. Ниже надписи нанести по капле (0,1 мл) реагента анти-А и анти-В и предметное стекло поместить на белую бумагу.
3. Ватным тампоном, смоченным спиртом протереть мякоть 4-го пальца левой руки и скарификатором проколоть протертый палец, отступив от середины на 1-2 мм влево.
4. Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Со второй капли отдельными чистыми палочками перенести ее в каждую каплю реагента, с таким расчетом, чтобы на капле реагента было в 10 раз меньше крови (0,01 мл).
5. Реактив и кровь тщательно перемешать стеклянной палочкой, пока смесь не будет иметь равномерную розовую окраску.
6. Покачивая стекло, наблюдать в течение 1-5 минут за каплями смеси. Если капля смеси остается гомогенной, равномерно окрашенной, то это значит, что реакции гемагглютинации (РГА) нет. Если проявляются красные мелкие комочки, разделенные прозрачной плазмой, значит РГА есть. Группу крови определите по таб. 20 и рис. 18
Таблица 20-Определение групп крови с помощью синтетических цоликлонов
| Эритротест цоликлон анти-А | Эритротест цоликлон анти-В | Группа крови |
| - | - | О (I) |
| + | - | А (II) |
| - | + | В (III) |
| + | + | АВ (IY) |
«-» - реакции агглютинации нет
«+» - реакция агглютинации есть
Оценка результатов.Отсутствие агглютинации в обеих пробах служит доказательством принадлежности исследуемой крови к I (О) группе крови. Если агглютинация произошла с реагентом анти-А, то кровь принадлежит ко II (А) группе. Если агглютинация произошла с реагентом анти-В, то кровь III (В) группы. В случае агглютинации в обеих пробах, кровь следует отнести к IY (АВ) группе.
Рис. 21 Определение групп крови с помощью стандартных сывороток (А) и синтетических цоликлонов анти-А и анти-В (Б)
Таблица 21 -Совместимость различных групп крови
| Группа сыворотки | Группа эритроцитов | |||
| I (О) | II (А) | III (В) | IV (АВ) | |
| I б,в | - | + | + | + |
| II в | - | - | + | + |
| III б | - | + | - | + |
| IV | - | - | - | - |
Примечание: «+» - группы несовместимы (наличие агглютинации),
«-» - группы совместимы (отсутствие агглютинации)
По вертикали – кровь отдает, по горизонтали – кровь принимает. (Знак «-»).
Оформление протокола:
1. Запишите результаты исследования в тетрадь, заполнив таблицу 22.
Таблица 22 Результаты определения
| Цоликлон Анти-А | Цоликлон Анти –В | Групповая принадлежность |
2. Перенесите в тетрадь общую схему четырех групп крови, обозначив штриховкой реакцию агглютинации в соответствующих кружках.
3. Зарисуйте наблюдаемую вами картину с образцом исследованной крови, сделайте заключение о ее групповой принадлежности.
4.По таблице 20 сделайте заключение о совместимости своей группы крови с другими группами.
Лабораторная работа № 3.15. Определение резус-фактора (Rh)
Оборудование:стерильный скарификатор, вата, спирт, стеклянная палочка, предметное стекло, стандартный цоликлон анти-Д-супер, физиологический раствор (0,9%).
ХОД РАБОТЫ
1. Нанесите на предметное стекло каплю стандартной сыворотки «цоликлон анти-Д-супер». Рядом с сывороткой поместите каплю исследуемой крови (размер капли должен быть вдвое меньше, чем капля сыворотки).
2. Стеклянной палочкой перемешайте каплю крови с каплей сыворотки, образуя общую каплю размером с копеечную монету.
3. Покачивая предметное стекло, наблюдайте за реакцией. Для лучшего выявления наличия или отсутствия аггллютинации можно добавить в пробу каплю физиологического раствора (0,9%).
4. Если исследуемая кровь резус-положительна (Rh+), то в пробе со стандартной сывороткой «цоликлон анти-Д» наблюдается агглютинация эритроцитов. Если кровь резус-отрицательна (Rh-), агглютинация в пробе будет отсутствовать. При наличии агглютинации кровь считают резус-положительной, а при отсутствии агглютинации – отрицательной.
Оформление протокола:
1.Определите Rh-принадлежность исследуемой крови.
2. Запишите результаты в тетрадь, заполнив таблицу 23
Таблица 23: Результаты собственных исследований
| Группа крови (система АВО) | Анти-А (наличие агглютинации – знак «+», отсутствие – «-») | Анти-В (наличие агглютинации – знак «+», отсутствие – «-») | Результаты исследований (Ваша группа крови) |
| Резус-фактор | Цоликлон анти-Д | ||
| Наличие агглютинации (кровь резус-положительна – знак «+») | Отсутствие агглютинации (кровь резус-отрицательна – знак «-») | Результаты исследований (Ваш резус-фактор) | |
Контрольные вопросы для самостоятельного изучения
1. Что положено в основу деления людей по группам крови?
2. Что представляют собой агглютинины и агглютиногены? Где они располагаются?
3. Основные правила переливания крови.
4. Понятие о резус-факторе.
5. Объясните значение Rh-фактора при переливании крови.
6. Свертывание крови в онтогенезе.
7. Особенности переливания крови у детей.
8. Физиологическое обоснование мероприятий при длительном кровотечении после операции удаления зуба.
9.Физиологическое обоснование способов предотвращения и остановки кровотечения при операциях в ротовой полости.
10. резус – конфликт между организмом матери и плода.