Раздел: «частная бактериология»
Занятие 1. Дата _____. Тема: «Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Возбудители кишечных бактериальных инфекций: сальмонеллы, шигеллы»
Таблица 20. Протокол бактериологического исследования рвотных масс больного при сальмонеллезе
Материал для исследования – рвотные массы больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – сальмонеллез ( ?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из рвотных масс больного выделены бактерии вида _____________________. |
______E. сoli_____Salmonella enteritidis __Shigella sonnei__
(чистая культура)(чистая культура) _(чистая культура)
 |  | ||||
 | |||||
Окраска по Граму Окраска по Граму Окраска по Граму
Занятие 2. Дата _______. Тема: «Возбудители кишечных бактериальных инфекций: возбудители дизентерии и сальмонеллезов. Возбудители бруцеллеза»
Таблица 21. Протокол бактериологического исследования фекалий (копрокультуры) больного при шигеллезе (бактериальной дизентерии)
Материал для исследования – фекалии больного
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – дизентерия ( ?)
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из фекалий больного выделены _______________________ . |
Таблица 22. РПГА с парными сыворотками и сальмонеллезным диагностикумом
| Результаты | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | контроль |
| Сыворотка 1 | ||||||||
| Сыворотка 2 | ||||||||
| ВЫВОДЫ: РПГА _____________________ (положительная /отрицательная). v Титр антител к сальмонеллезному антигену в первой сыворотке _________. v Титр антител к сальмонеллезному антигену во второй сыворотке ________. v _____- кратное увеличение титра антител во второй сыворотке ___________ (подтверждает/не подтверждает) диагноз ___________________________ . |
Таблица 23. Биохимические свойства энтеробактерий
| Название бактерий | Среда Гисса с глюкозой | Среда Гисса с лактозой | МПБ, индол/сероводород |
| ü Незасеянные пробирки |  | |     |
| ü Salmonella sp. | | | |
| ü Shigella sp. | | |      |
| ü Escherichia sp. | | | |
Таблица 24. Реакция агглютинации для серологической диагностики бруцеллеза (реакция Райта)
| Номера пробирок | Контроль антигена | Контроль сыворотки | |||||
| Разведения сыворотки: | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | ─ | ─ |
| Результат: | |||||||
| ВЫВОДЫ: Реакция агглютинации __________________ (положительная/отрицательная). Титр антител к бруцеллам _____, что подтверждает/не подтверждает диагноз бруцеллеза. |
__Brucella abortus__
_(чистая культура)
 |
Окраска по Граму
Занятие 3. Дата ______. Тема: «Возбудители кишечных инфекций. Возбудитель ботулизма. Возбудитель холеры»
_Clostridium botulinumVibrio cholerae__
(чистая культура)(чистая культура)
 | |||
 | |||
окраска по Граму окраска по Граму
Таблица 25. Определение типа ботулинического токсина с помощью РПГА (РОНГА)
| Ингредиенты | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | Конт-роль |
| Изотонический раствор натрия хлорида, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Исследуемый материал (промывные воды желудка, разведение 1:5), мл |  0,5 | вылить 0,5 | --- | |||||
| Антительный эритроцитарный диагностикум соответствующего серотипа, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| РЕЗУЛЬТАТЫ: | ||||||||
| Ø с поливалентным диагностикумом АВЕ | ||||||||
| Ø с диагностикумом А | ||||||||
| Ø с диагностикумом В | ||||||||
| Ø с диагностикумом Е | ||||||||
| ВЫВОД: |
Занятие 4. Дата ______. Тема: «Возбудители респираторных бактериальных инфекций: туберкулеза, дифтерии, коклюша, скарлатины, цереброспинального менингита»
Mycobacteriumtuberculosis _____ M. bovis __ Corynebacterium diphtheriae
____(в ткани легкого) ____(чистая культура) __(чистая культура)__
 |  | ||||
 | |||||
Окраска по Цилю-Нельсену Окраска по Цилю-Нельсену Окраска по Нейссеру
__Bordetella pertussis__Streptococcus pyogenes Neisseria meningitidis
__(чистая культура) __(чистая культура)__ __(чистая культура)__
 | |  |
Окраска по Граму Окраска по Граму Окраска по Граму
Таблица 26. Дифференциация бордетелл
| Признаки | Bordetella pertussis | B.parapertussis |
| Рост на МПА | -- | + |
| Время культивирования | 3-5 сут. | 48 ч. |
| Образование колоний коричневого цвета | -- | + |
| Образование уреазы | -- | + |
| Образование каталазы | + | + |
| Рост на среде с тирозином | -- | + (коричневый пигмент) |
| Реакция агглютинации с типовыми сыворотками к: Ø Bordetella pertussis Ø B. parapertussis | + -- | -- + |
Таблица 27. Дифференциация коринебактерий
| Признаки | C. diphtheriae | C.pseudodiphtheriticum |
| Зерна волютина на полюсах (два в каждой клетке) | + | -- |
| Диффузное расположение зерен волютина (от 1 до 3 в каждой клетке) | -- | + |
| Расположение клеток под углом друг к другу | + | -- |
| Параллельное расположение клеток («частоколом») | -- | + |
| Ферментация глюкозы | + | -- |
| Ферментация крахмала | Биовар gravis “+” / mitis “--“ | -- |
| Цистиназная активность | + | -- |
| Уреазная активность | -- | + |
| Токсигенность | +/-- | -- |
| Агглютинабельность типовой сывороткой | + | -- |
Занятие 6. Дата ______. Тема: «Бактерии – возбудители инфекций, передаваемых контактным путем. Возбудители контактных венерических инфекций (сифилиса, гонореи, урогенитального хламидиоза»
Neisseria gonorrhoeae в гное Treponema pallidum
(незавершенный фагоцитоз)
 | |||
 | |||
Окраска метиленовым синим окраска серебрением по Морозову
Таблица 28. Схема РПГА для серологической диагностики сифилиса
| Номера пробирок | Контроль антигена | ||||||
| Сыворотка пациента, в разведении | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | ─ |
| Эритроцитарный трепонемный диагностикум, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 1,0 |
| Результаты: | |||||||
| ВЫВОДЫ:РПГА ___________________________(положительная/отрицательная). Титр антител к бледным трепонемам ________, что подтверждает/не подтверждает диагноз сифилиса. (Диагностический титр 1:8 – 1:16) |
Занятие 7. Дата ______. Тема: «Бактерии – возбудители инфекций, передаваемых контактным путем. Возбудители гнойно-воспалительных инфекций: стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, кишечная палочка»
Streptococcus pneumoniaeStreptococcus pyogenesS.aureus в гное _Pseudomonas aeruginosa_
(в органах) (чистая культура) _ ______________ ___(чистая культура)
 |  |  |  |
Окраска водным фуксином Окраска по Граму Окраска по Граму Окраска по Граму
Рисунок 10. Факторы вирулентности стафилококков
Плазмокоагулаза Рост на 5% кровяном агаре (β-гемолиз) Рост на ЖСА (лецитовителлаза)
 | |||
 | |||
Таблица 29. Протокол бактериологического исследования гноя
Материал для исследования – гной из абсцесса
Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя
Предварительный клинический диагноз – абсцесс мягких тканей бедра
| День исследования | Ход исследования | Результат исследования |
| 1. Приготовление мазка из гноя и окраска по Граму. 2. Посев гноя на желточно-солевой и 5% кровяной агар | ||
| 1. Микроскопия колоний (окраска по Граму). 2. Пересев на скошенный МПА | ||
| 1. Приготовление мазка и окраска фуксином (для определения чистоты выделенной культуры) 2. Посев на цитратную кроличью плазму и среду Гисса с маннитом (под вазелиновым маслом для создания анаэробных условий) 3. Фаготипирование культуры типовыми стафилококковыми бактериофагами: __________________________ 4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам | Ø Доксициклин - ____мм Ø ___________________- ____ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм | |
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ: Из гноя больного выделены бактерии вида ________________ фаготип ____, чувствительные к ________________________ ______ устойчивые к __________________ ___. |
Занятие 8. Дата ______. Тема: «Бактерии – возбудители инфекций, передаваемых контактным путем. Возбудители столбняка и газовой гангрены»
Clostridium perfringens Clostridium perfringens Clostridium tetani
(в органах) (чистая культура) (чистая культура)
 |  |  | |||||
| | |||||||
Окраска фуксином Окраска по Граму Окраска по Граму
Рисунок 11. Tесты для ускоренной диагностики инфекций,
вызванных Clostridium perfringens
рост на среде Вильсона-Блера створаживание молока
РАЗДЕЛ: « САНИТАРНО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ »
Занятие 10. Дата ______. Тема: «Микрофлора воды, воздуха, почвы, тела человека. Санитарно-бактериологическое исследование объектов окружающей среды (воды, воздуха) и тела человека»
Таблица 30.Схема определения микробного числа воды
| Разведение воды | 1:10 | 1:100 | 1:1000 |
| Засеваемый объем, мл | |||
| МПА, в мл | |||
| Результат (количество колоний): | |||
| Расчет: | |||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: микробное число исследуемой воды _________________КОЕ/мл. |
Таблица 31. Схема микробиологического исследования воздуха
| Метод исследования | Место отбора проб воздуха | Время экспозиции | Объем исследуемой пробы воздуха | Описание колоний |
| Седиментационный (по Коху). Посев на МПА | · аудитория | 5 минут | 10 л | |
| · | 5 минут | 10 л | ||
| Аспирационный (аппарат Кротова или ПУ-2). Посев на МПА, кровяной агар | аудитория | Устанавлива-ется автоматически | 100 л | |
| Расчет: количество бактерий (определено методом Коха) - количество бактерий (определено аспирационным методом) - количество грибов (по Коху или методом аспирации) - | ||||
| ЗАКЛЮЧЕНИЕ: микробное число исследуемого воздуха _________________КОЕ/м3, где количество бактерий - ________КОЕ/м3; количество грибов - _____ КОЕ/м3, что соответствует (не соответствует) установленным нормативам. |
_Мазок зубного налета
окраска водным фуксином
 |
Занятия 11 и 12. Дата ______. Тема: «Санитарно-бактериологическое исследование объектов окружающей среды (воды, воздуха и др.). Микрофлора тела человека(окончание).Микрофлора лекарственного сырья и лекарственных средств. Санитарно-бактериологическое исследование готовых лекарственных форм. Асептика. Антисептика. Дезинфекция. Стерилизация»
Таблица 32. Результаты микробиологического контроля дистиллированной воды, лекарственных форм и аптечной посуды
 Питательные среды Объект исследования | МПА (определение ОМЧ) | Среда Эндо (для энтеробактерий) | Малахитовый агар с бриллиантовым зеленым (для псевдомонад) | ЖСА (для стафилококков) | Среда Сабуро (для грибов) | Тиогликолевая среда (для анаэробов) |
| Дистиллированная вода | ||||||
| Порошки | ||||||
| Глазные капли | ||||||
| Аптечная посуда | ||||||
| ВЫВОДЫ: |
Таблица 33. Эксперименты по дезинфекции/
Антисептике
 Дезинфектант Объект | Спирт этиловый 70о | Мыло | 10% хлорамин |
| Поверхность стола | |||
| Руки | |||
| ВЫВОДЫ: |
Таблица 34. Действие температуры на спорообразующие и неспорообразующие бактерии
 Метод обработки Бактерии | Кипячение 30 минут | Автоклавирование |
| Escherichia coli | ||
| Bacillus cereus | ||
| ВЫВОДЫ: |
Таблица 35.Методы стерилизации и аппаратура