Сбор и доставка патологического материала

Для микробиологической диагностики бактериальных менингитов используют спинномозговую жидкость (СМЖ), кровь, носоглоточную слизь, соскоб из геморрагических элементов сыпи, секционный материал. Наиболее часто для бактериологического анализа используется спинномозговая жидкость, взятая при люмбальной пункции или пункции боковых желудочков мозга

Взятие материала для исследования. Ликвор необходимо исследовать до начала антибактериальной терапии, а взятие материала производит врач.

· Место пункции обрабатывают антисептиком и 70% этиловым спиртом. Иглу с мандреном вводят между поясничными позвонками L3-L4, L4-L5 или пояснично-крестцовыми L5-S1. Достигнув субарахноидального пространства, удаляют мандрен и ликвор появляется на конце иглы.

· Медленно набирают ликвор в стерильные герметично закрывающиеся пробирки. Обычно используют 3 пробирки для микробиологического, клинического и биохимического анализов. Для микробиологического анализа присылают вторую пробирку (желательно центрифужную) или пробирку с самым мутным содержимым в нужном объеме (табл.2).

· Ликвор немедленно доставляют в лабораторию, где тотчас, пока он теплый, его подвергают анализу. При отсутствии такой возможности материал сохраняют при 37°С в течение нескольких часов, а для его пересылки используют изотермальные ящики, грелки, термос или любую другую упаковку, где поддерживается температура около 37°С (для вирусологического исследования материал присылают во льду!). Охлаждение ликвора ниже 30°С ведет к утрате жизнедеятельности менингококков!

· Перед проведением микробиологического исследования оценивают его мутность, опалесценцию (ксантохромию), наличие крови.

Таблица 2.

Минимальные объемы ликвора, необходимые для анализа.

Микробы	Объем (мл)*	Примечание
Бактерии		Присылают наиболее мутную порцию СМЖ в наикратчайшие сроки; пробирка №2 предпочтительней.
Грибы		Необходимо исключить Cryyptococcus spp., Coccidioides immitis
Микобактерии		M.tuberculosis, M.avium, M.intracellulare
Анаэробы	>2	При абсцессах мозга или при биопсиях ЦНС
Паразиты	>2	При абсцессах мозга или при биопсиях ЦНС на Entamoeba histolytica, Toxoplasma gondii и др.
Вирусы	1-2	СМЖ присылают во льду

*Большие объемы материала увеличивают вероятность обнаружения возбудителей.

Проведение исследования.

Исследование ликвора предусматривает следующие этапы:

• Центрифугируют образец при 2500-3000 об/мин (1500 х g) 15-20 мин., если позволяет объем материала (>1мл).

• Стерильной пастеровской пипеткой собирают надосадочную жидкость, оставляя в пробирке 0,5-1 мл осадочного материала.

• Надосадочную жидкость используют для обнаружения антигена серологическими методами (в реакции встречного иммуноэлектрофореза, в латекс-агглютинации) и сохраняют ее в холодильнике до 1 недели на случай необходимости проведения дополнительных исследований.

• Осадок тщательно перемешивают вращением пробирки не менее 30 сек; не следует для этих целей использовать пипетку, так как бактерии и клетки могут осесть на стенках пробирки, что может привести к получению ложно отрицательного результата.

• Стерильной пипеткой засевают по 1 -2 капли ликвора на предварительно прогретые в термостате плотные питательные среды, а оставшийся в пробирке материал - в 0,1% питательный полужидкий агар (среда обогащения). Если ликвора мало, то его засевают только на среду обогащения.

• Из оставшегося после посевов материала готовят мазок на обезжиренном в спирте стекле, позволяя капле свободно растечься до большого размера; высушивают на воздухе в биологически защищенном боксе. При исследовании ликвора с неопределённым возбудителем или на менингококк мазки после высушивания фиксируют спиртом или на пламени и окрашивают метиленовым синим или по Граму в модификации Калины. Результаты микроскопии оценивают сразу же и сообщают клиницисту.

Если пробирка с ликвором выглядит пустой или содержит всего 1-5 капель жидкости, а дополнительно получить образец не удается, предпринимают следующее:

• При наличии всего 1 капли ликвора стерильной пастеровской пипеткой берут частичку материала для приготовления мазков в окраске по Граму.
• Стерильной пастеровской пипеткой вносят около 1 мл бульона в пробирку, закупоривают ее и переворачивают несколько раз для перемешивания содержимого, а затем уже производят посевы как указано выше.

Если ликвор прозрачный, то центрифугирование не производится, мазок не делается, и вся его часть, оставшаяся после посева в чашки и серологических проб, засевается в среду обогащения. При необходимости проводят специальные исследования на грибы, микобактерии, паразиты и вирусы.

Посев исследуемого материала

Так как гнойные менингиты имеют различную этиологию, то при исследовании СМЖ с неопределённым возбудителем необходимо производить посев ликвора на несколько питательных сред с целью выделения более широкого спектра возбудителей.