Санитарно - бактериологическое исследование объектов окружающей среды

ЗАНЯТИЕ 1.3.1.

САНИТАРНО - БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:

Изучить методы и показатели, необходимые для санитарно - микробиологической оценки объектов окружающей среды.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

· Природные микробиоценозы. Экологические связи в биоценозах.

· Экологическая среда обитания микроорганизмов. Нормальная микрофлора объектов окружающей среды.

· Принципы санитарно - микробиологического контроля воздуха, воды и почвы.

· Санитарно - показательные микроорганизмы объектов окружающей среды.

· Роль воздуха, воды и почвы в распространении инфекционных болезней.

· Значение санитарно - бактериологического контроля в работе аптеки.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

проводить оценку санитарно - бактериологического состояния воздуха, воды и почвы по микробиологическим тестам.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

методами анализа и оценки изученного материала,
способами интеграции в профессиональную сферу изучаемого материала.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Работа № 1. Санитарно - бактериологическая оценка состояния воздуха аптеки

Цель:провести оценку санитарно - бактериологического состояния воздуха зала обслуживания аптек по общему микробному числу (ОМЧ) на МПА и количеству гемолитических стрептококков на кровяном агаре.

Самостоятельная работа: Сделать расчет ОМЧ по формуле Омелянского. Оценить чистоту воздуха по микробиологическим нормативам (см. теоретическую справку).

Опыт № 1. Посев воздуха методом седиментации по Коху на МПА. Зарисовать.

Подсчитать количество выросших колоний. Рассчитать ОМЧ по формуле Омелянского.

Оценка санитарно - бактериологического состояния воздуха по ОМЧ на МПА по методу Коха проводится по формуле Омелянского:

Х= Ах100х5х1000

Вх10хТ

X- количество микробов в м³ воздуха;

А-количество колоний в чашке;

100-площадь (см³), на которую происходило оседание микробов;

5- время по расчету Омелянского, мин;

1000- искомый объем воздуха в литрах;

В- площадь чашки Петри в см ³(78,5 см²);

10- объем воздуха (л), из которого происходило оседание микробов;

Т- время экспозиции, мин.

Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Опыт № 2. Посев воздуха методом седиментации по Коху на кровяной агар. Зарисовать. Подсчитать количество выросших колоний

Данные внести в таблицу:

Опыт	Метод	Результат	Нормативы	Оценка (чистый, грязный)
	Посев по Коху	ОМЧ
	Посев по Коху	Количество гемолитических стрептококков

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ответить на вопросы:

1. Соответствует ли воздух зала обслуживания аптеки нормативам?_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. Какие отклонения были отмечены?___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3. Какие мероприятия следует проводить, чтобы устранить загрязненность воздуха?___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Цель микробиологического анализа____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Методы исследования

1.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Критерии оценки и нормативы:

1.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Санитарно - бактериологическая оценка состояния воды

Цель:

1. Оценить санитарно - бактериологическое состояние дистиллированной воды, используемой для приготовления лекарственных препаратов по ОМЧ на МПА.

2. Провести оценку санитарно - бактериологического состояния водопроводной воды по показателям ОМЧ, индексу бактерий группы кишечной палочки (БГКП), коли - титру; Оценить чистоту воды по результатам посевов (см. теоретическую справку).

Опыт № 3. Посев дистиллированной и водопроводной воды глубинным методом на МПА. Зарисовать. Подсчитать количество выросших колоний.

Посев дистиллированной Посев водопроводной

воды воды

Опыт № 4. Посев водопроводной воды методом мембранных фильтров на среду Эндо. Зарисовать. Подсчитать количество выросших колоний на мембранном фильтре.

Данные внести в таблицу:

Опыт	Метод	Результат	ГОСТ	Оценка (норма, выше нормы, ниже нормы)
	Глубинный посев	ОМЧ дистиллированной воды
ОМЧ водопроводной воды
	Мембранных фильтров	Индекс БГПК Коли – титр водопроводной воды

Ответить на вопросы:

1. Соответствует ли дистиллированная и водопроводная вода ГОСТу?_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

______________________________________________________________________________

3. Какие мероприятия следует проводить, чтобы устранить загрязненность воды?

Методы исследования

1._______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2._______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3._______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Критерии оценки и нормативы:

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА

Микробиологический анализ объектов окружающей среды проводится в плановом порядке и по эпидемиологическим показаниям.Гигиенические нормативы по микробиологическим показателям включают определение:

1. Общего микробного числа - ОМЧ (количество мезофильных аэробных и факультативно - анаэробных микроорганизмов.ОМЧ оценивается как показатель интенсивности загрязнения объектов окружающей среды.

2. Санитарно - показательных микроорганизмов - СПМ (выявление патогенных микробов и их метаболитов). СПМ косвенно указывают на присутствие патогенов в окружающей среде.

Требования к СПМ:

- постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и выделяться в

окружающую среду;

- не должны размножаться в окружающей среде, исключая пищевые продукты;

- длительность выживания в окружающей среде не меньше, чем у патогенов;

-устойчивость в окружающей среде должна быть больше, чем у патогенов;

- не должно быть «двойников» в среде;

- не должны изменять свои биологические свойства в окружающей среде;

- методы индикации должны быть простыми.

Правила отбора проб

Правила регламентированы для каждого объекта нормативными документами. Общие требования заключаются в следующем:

1. Соблюдение правил стерильности;

2. Оптимальные условия транспортировки;

3. Исследование образцов не позднее, чем через 6 часов от момента забора материала (оптимально до 2 часов);

4. Взятие проб из разных участков объекта;

5. Повторность отбора проб, позволяющих получить более достоверную информацию по загрязнению объекта;

6. Применение только стандартных методов исследования;

7. Использование комплекса тестов.

К Работе№1

Методы исследований

1. Естественная седиментация - метод Коха - оседание микробов под действием силы тяжести - является простым способом изучения микрофлоры воздуха. Он заключается в том, что чашки с питательной средой остаются открытыми на определенное время (5 - 10 минут на общую обсемененность и не менее 40 минут на кокковую микрофлору), затем закрывают, пописывают и выдерживают в термостате 24 часа, затем 24 часа при комнатной температуре. Количество выросших колоний соответствует степени загрязненности воздуха: по приблизительному подсчету на площадь 100 см в течение 5 минут оседает столько микробов, сколько содержится в 10 литрах воздуха. Метод прост, но не точен

2.Принудительная седиментация - метод Кротова (аспирационный) - более точный
количественный метод определения микробного числа воздуха. Посев воздуха
проводят с использованием прибора - аппарата Кротова. Аппарат устроен таким
образом, что воздух с заданной скоростью пропускается через узкую щель
алексиглазовой пластины, закрывающей чашку Петри с питательным агаром. При
этом частицы аэрозоля с содержащимися на них микроорганизмами равномерно
фиксируются на всей поверхности среды благодаря постоянному вращению чашки
над входной щелью. После инкубации посева в термостате проводят расчет
микробного числа по формуле:

Х = Ах1000

X - количество микробов в м³ воздуха;

А - количество колоний в чашке;

1000 - искомый объем воздуха в литрах;

V - искомый объем воздуха, дм ³

3. Фильтрационный метод - воздух продувается через мембранные фильтры с последующим высевом на питательную среду. Метод трудоемок.

Критерии оценки

1. ОМЧ - число бактерий в 1 м воздуха;

2. индекс СПМ - представители микрофлоры дыхательных путей - гемолитические стрептококки и золотистый стафилококк.

НОРМАТИВЫ:чистый воздух зимой: ОМЧ - не более 4500, гемолитических стрептококков - до 35; грязный воздух зимой: ОМЧ более 7000, гемолитических стрептококков - до 124.

К Работе №2

Методы исследований

1. Глубинный посев - количественный метод определения бактерий и грибов. Вносят 1 мл воды в стерильную чашку Петри, затем наливают расплавленный агар до температуры 45 ⁰ С 10-12 мл и тщательно перемешивают. Результат оценивают по общему количеству выросших колоний на поверхности и в толще агара.

2. Метод мембранных дисков - количественный метод определения СПМ.Мембранный фильтр помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая соединяется с вакуумным насосом. Воду фильтруют в объеме 500 мл. Затем фильтры помещают на поверхность среды Эндо в чашки Петри и после инкубации при 37° С в течение суток подсчитывают количество выросших колоний, типичных для бактерий группы кишечной палочки (БГКП). Из 2-3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по методу Грама и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Echerichia от грамотрицательных бактерий рода Pseudomonas, обитающих в воде.

3. Бродильный метод - качественный метод определения БГКП. 1 мл воды засевается на жидкую среду Кесслера (1мл дистиллированной воды, 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 10 г лактозы, рН 7,4 -7,6; 4мл 1% водного раствора генцианового фиолетового). Разливают в пробирки с поплавками. Инкубируют при 43° С. Через 24 часа по изменению цвета среды и газообразованию судят о наличии БГКП.

Критерии оценки

1. ОМЧ - число бактерий в 1 см (мл) воды; для дистиллированной воды дополнительно определяется наличие плесневых и дрожжевых грибов в 1 см³(мл);

2. индекс БГКП - количество БГКП в 1 литре

3. коли - титр водопроводной воды - наименьший объем воды, в котором обнаружена 1 БГПК

ГОСТ 2674 – 82 «Критерии оценки воды»

Вода	ОМЧ	Индекс БГПК	Коли – титр, мл
Водопроводная	Не более 100	Не более 3
Дистиллированная: мезофильные аэробные и факультативные анаэробные бактерии; плесневые и дрожжевые грибы	Не более 10-15	-	-

К Работе№3

Методы исследований

Глубинный посев - количественный метод определения бактерий и грибов. Почву берут на глубине 10-15 см стерильным ножом (из разных мест не менее 10 проб) в стерильную банку. Из проб готовят навеску 30 г, которую разводят в колбе с водой (270 мл) и тщательно встряхивают. Готовят разведения 10¹, 10², 10³, 10⁴, 10⁵, 10⁶. Из двух последних разведений 0,1 мл смешивают с 40 мл 0,7 % расплавленного и остуженного до 45 °С МПА, после чего выливают двойным слоем в чашки с 2% агаром. Инкубируют в термостате. Результат оценивают по количеству выросших колоний.
Бродильный метод - качественный метод определения БГКП. Различные разведения почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки со средой Кесслера. Инкубируют 48 часов. При помутнении среды и наличии газообразования производят высев на среду Эндо. Отбирают типичные для кишечной палочки колонии, делают мазки, окрашивают по Грамму, микроскопируют. При выявлении в мазках Гр- палочек ставится проба на оксидазу. Коли - титр определяют по наименьшему объему, в котором обнаружена БГКП.

3. Посев на среду Вильсон-Блера. Различные разведения почвенной суспензии засевают в пробирки со стерильной железосульфитной средой Вильсон - Блера. Инкубация при 43 ⁰ С 48 часов. Результат учитывают по образованию черных колоний CI. perfringens в агаровом столбике среды. Мазки окрашивают по Граму, микроскопируют (Гр+ крупные палочки со спорами овальной формы, центрального или субтерминального расположения). Рассчитывается перфрингенс - титр (наибольшее разведение посевного материала, посев которого приводит к почернению и разрыву среды впервые 12 часов роста при 43 ⁰ С).

Критерии оценки

1. ОМЧ - число бактерий в 1 гр. почвы

2. титр БГКП - наименьший объем почвы, в котором обнаружена 1 БГКП

3. перфрингенс - титр – наименьший объём почвы, в котором обнаружена 1 Cl.perfinges

Нормативные оценки почвы

Санитарная оценка почвы	ОМЧ	Коли - титр	Перфрингенс - титр
Чистая	100-1000	1 и выше	0,01 и выше
Загрязненная	1000-100 000	0,9-0,01	0,009-0,0001
Сильно загрязненная	100 000-4 000 000	0,009 и ниже	0,00009 и ниже

К Работе№4

Цель микробиологического анализа: плановый текущий надзор и по эпидемиологическим показаниям.

Санитарный надзор за состоянием объектов аптек осуществляется взятием смывов. Смывы делают с поверхности предметов при помощи трафаретов из проволоки, имеющих площадь 25 см³. Тампон помещают в среду Кесслера. Посевы выдерживают в термостате при температуре 43 ⁰ С в течение суток. Для определения ОМЧ производят высевы на МПА. При наличии брожения в среде Кесслера делают высев на среду Эндо. Колонии, подозрительные на кишечную палочку идентифицируют.

Критерии оценки

1. ОМЧ - число мезофильных аэробных и факультативных анаэробных бактерий;

2. индекс БГКП

3. численность стафилококка золотистого

НОРМАТИВЫ:на производственных столах, посуде, пробках, машинных устройствах и других объектах аптеки: ОМЧ не более 150 колоний в посеве, БГКП и золотистый стафилококк не допускаются

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА ВО ВНЕУРОЧНОЕ ВРЕМЯ

Как правильно провести санитарно-бактериологические исследования объектов окружающей среды_____________________________________________________________

_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы

А) воздуха____________________________________________________________________

Б) воды______________________________________________________________________

В) почвы _____________________________________________________________________

Требования, предъявляемые к СПМ______________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микрофлоры молока______________

Методы качественного и количественного изучения микрофлоры мяса, колбасных изделий и мясных продуктов ____________________________________________________

Методы качественного и количественного изучения микрофлоры консервированных продуктов ___________________________________________________________________

Подпись преподавателя_________________________________________________________

ЗАНЯТИЕ 1.3.1.

САНИТАРНО - БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: