Раздел vii обмен и функции белков

ЗАНЯТИЕ 5

ТЕМА: Переваривание и всасывание белков.

ЦЕЛЬ: Разобрать процессы переваривания белков в желудочно-кишечном тракте и механизм всасывания аминокислот в тонком кишечнике.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Источники аминокислот в клетках. Азотистый баланс.

2. Переваривание белков в желудке. Механизм активации пепсина.

3. Переваривание белков в кишечнике. Панкреатические ферменты и ферменты тонкого кишечника.

4. Механизм всасывания аминокислот в кишечнике и их транспорт в клетки.

Оснащение занятия:

Реактивы: 1. Панкреатин или 0,1%-ный раствор трипсина

2. 1%-ный раствор едкого натра

3. 1%-ный раствор соляной кислоты

4. окрашенный яичный белок

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1. Переваривание белков панкреатином

Принцип метода:О действии панкреатина - вытяжки из поджелудочной железы - можно судить по расщеплению окрашенного яичного белка, так как краска при этом переходит в раствор.

Ход работы:В три пробирки наливают по 2 мл панкреатина или 0,1%-го раствора трипсина. В первую пробирку добавляют 1%-ный раствор едкого натра до появления слабощелочной реакции на лакмус. Вторую пробирку также подщелачивают и кипятят 2-3 мин, после чего охлаждают. В третью пробирку добавляют 1%-ный раствор соляной кислоты до появления слабокислой реакции на лакмус. Во все пробирки добавляют по 100 мг окрашенного яичного белка и инкубируют при 38°С 20 мин.

Делают выводы по работе.

ЗАНЯТИЕ 6

ТЕМА: Метаболизм аминокислот. Трансаминирование и дезаминирование аминокислот.

ЦЕЛЬ: Разобрать пути превращения аминокислот в организме человека.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Трансаминирование. Роль витамина В6 в этом процессе.

2. Диагностическая роль определения активности трансаминаз.

3. Дезаминирование аминокислот. Типы дезаминирования.

4. Роль глутаматдегидрогеназы в трансдезаминировании аминокислот.

Оснащение занятия:

Реактивы: 1. Сыворотка крови или водный экстракт ткани печени(навеску ткани

растереть в ступке со 100-кратным объемом воды и дать отстояться)

2. Субстратный раствор(29 мг a-кетоглутаровой кислоты и 2 мг

аланина в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 7,4)

3. 2,4-динитрофенилгидразин( 20 мг в 100 мл 1н соляной кислоты)

4. 0,4 н раствор едкого натра

5. Стандартный раствор ПВК(11 мг пирувата натрия в 100 мл воды)

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1. Определение активности аланинамино-трансферазы динитрофенилгидразиновым методом

Принцип метода:В процессе трансаминирования под действием аланинаминотрансферазы (АлАТ) образуется пировиноградная кислота(ПВК), которая, реагируя с 2,4-динитрофенилгидразином, образует динитро-фенилгидразон, дающий в щелочной среде красное окрашивание. Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству ПВК.

Ход работы:Берут две пробирки, в каждую из которых добавляют по 0,5 мл субстратного раствора. Инкубируют их 5 мин при 37°С в водяной бане, после чего в контрольную пробирку добавляют 0,1 мл воды, а в опытную - столько же сыворотки крови или тканевого экстракта, и снова инкубируют в течение 30 мин. Затем в обе пробирки добавляют по 0,5 мл 2,4-ДНФГ и инкубируют 15 мин при комнатной температуре. Добавляют по 5 мл 0,4 н едкого натра, перемешивают и снова инкубируют 10 мин при комнатной температуре. Оптическую плотность раствора измеряют на ФЭКе при 500-560 нм (зеленый светофильтр) против контрольной пробы. Расчет производят, исходя из калибровочного графика зависимости оптической плотности и соответствующего содержания ПВК в мкг. При этом учитывается, что 1 мл стандартного раствора пирувата натрия содержит 110 мкг, что соответствует 88 мкг ПВК.

Активность фермента выражают в микромолях ПВК, образовавшейся при инкубации 1 мл сыворотки крови (экстракта ткани) в течение 1 часа при 37°С.

Расчет производят по формуле:

А = С´2´10/ 88

где А - активность фермента,

С - количество ПВК в мкг, определенная по калибровочному графику,

2 - коэффициент пересчета на 1 час инкубации,

10 - коэффициент пересчета на 1 мл сыворотки(экстракта ткани),

88 - вес 1 микромоля ПВК в мкг.

Нормальные показатели активности АлТ в сыворотке крови, определенные таким способом, составляют от 0,1 до 0,68 мкМ.

ЗАНЯТИЕ 7

ТЕМА: Пути нейтрализации аммиака в организме. Синтез мочевины.

ЦЕЛЬ: Разобрать основные пути образования и обезвреживания аммиака в организме человека.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Источники образования аммиака в организме человека.

2. Основные транспортные формы аммиака в организме человека.

3. Пути обезвреживания аммиака: амидирование аминокислот, восстановительное аминирование a-кетоглутарата, образование солей аммония и синтез мочевины.

4. Орнитиновый цикл - главный способ обезвреживания аммиака в организме человека.

Оснащение занятия:

Реактивы: 1. Моча

2. 2%-ный раствор парадиметиламинобензальдегида

3. Стандартный раствор мочевины ( 2г в 100 мл воды)

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1. Определение мочевины в моче

Принцип метода:Метод основан на способности мочевины, содержащей аминогруппы, образовывать с парадиметиламинобензальдегидом в кислой среде комплексное соединение, окрашенное в желтый цвет. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации мочевины в исследуемой моче и определяется фотометрически.

Ход работы:Пипетки и пробирки обязательно должны быть сухими. В пробирку наливают 0,2 мл мочи, добавляют 1,2 мл раствора парадиметиламино-бензальдегида и тщательно перемешивают. Через 15 минут пробу фотометрируют в сухой кювете шириной 3 мм при синем светофильтре против воды. По калибровочному графику определяют концентрацию мочевины в пробе. Рассчитывают количество выделяемой мочевины в течение суток, исходя из того, что в среднем суточный объем экскретируемой мочи составляет 2 литра. В норме за сутки выделяется 20-30 г мочевины.

Делают выводы по работе, сравнивая полученные результаты с нормой.

ЗАНЯТИЕ 8

ВОПРОСЫ 1-Й РУБЕЖНОЙ АТТЕСТАЦИИ

1. Классификация и свойства липидов

2. Структура, состав и свойства жирных кислот

3. Эссенциальные жирные кислоты и их биологическая роль

4. Строение и своиства триацилглицеролов

5. Строение и свойства фосфолипидов

6. Строение и свойства сфинголипидов

7. Строение и свойства стероидов

8. Переваривание липидов в желудочно-кишечном тракте

9. Желчные кислоты и их роль в переваривании липидов

10. Всасывание продуктов гидролиза липидов в ЖКТ

11. Ресинтез липидов в стенке кишечника

12. Образование хиломикронов в тонком кишечнике

13. Строение и классификация транспортных липопротеинов

14. Синтез жиров в жировой ткани и печени. Пути образования глицерол-3-

фосфата

15. Мобилизация жиров из жировой ткани

16. Роль инсулина, глюкагона и других гормонов в регуляции обмена жиров

17. Роль карнитина в транспорте жирных кислот из цитоплазмы в митохондрии

18. b-окисление жирных кислот

19. b-окисление ненасыщенных жирных кислот

20. Энергетический выход окисления пальмитиновой кислоты

21. Биосинтез жирных кислот. Роль малонил-КоА в этом процессе

22. Синтез кетоновых тел в печени

23. Распад кетоновых тел в тканях

24. Синтез и распад глицерофосфолипидов

25. Синтез и распад сфинголипидов

26. Синтез холестерина

27. Транспорт холестерина в организме.

28. Выведение холестерина из организма.

29. Переваривание белка в желудке. Желудочные ферменты.

30. Механизм активирования пепсина.

31. Синтез и роль соляной кислоты.

32. Переваривание белка в кишечнике. Роль панкреатических ферментов в этом процессе.

33. Механизм активирования трипсина. Роль энтеропептидазы в этом процессе.

34. Механизм активирования химотрипсина и других панкреатических ферментов.

35. Ферменты тонкого кишечника.

36. Всасывание аминокислот в кишечнике. Белки-переносчики аминокислот.

37. Трансаминирование аминокислот. Механизм реакции.

38. Диагностическая роль АСТ и АЛТ в клинической практике.

39. Дезаминирование аминокислот. Виды дезаминирования.

40. Окислительное дезаминирование. Роль глутаматдегидрогеназы.

41. Источники аммиака в организме.

42. Связывание и нейтрализация аммиака в организме.

43. Транспорт аммиака в организме.

44. Орнитиновый цикл - главный способ обезвреживания аммиака в организме.

ЗАНЯТИЕ 9

ТЕМА: Особенности обмена отдельных аминокислот. Синтез креатина и креатинина. Количественное определение креатинина.

ЦЕЛЬ: Разобрать основные пути обмена фенилаланина и серосодержащих аминокислот в организме человека.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Роль метионина в реакциях трансметилирования. Активная форма метионина.

2. Синтез цистеина в организме человека. Роль метионина в этом процессе.

3. Синтез креатина и креатинина.

4. Обмен фенилаланина и тирозина. Нарушения обмена фенилаланина и тирозина (фенилкетонурия, алкаптонурия, альбинизм).

5. Синтез катехоламинов.

Оснащение занятия:

Реактивы: 1. Моча

2. Пикриновая кислота насыщенный раствор (2 г кислоты растворить в

100 мл воды при нагревании, оставить на сутки, затем профильтровать)

3. Стандартный раствор креатинина ( 1 мг креатинина в 1 мл воды)

4. Едкий натр 10%-ный раствор

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1. Количественное определение креатинина в моче

Принцип метода:Креатинин, взаимодействуя с пикриновой кислотой, образует пикрат креатинина, который в щелочной среде дает оранжево-красное окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации креатинина.

Ход работы:В цилиндр объемом 10-25 мл добавляют 0,1 мл мочи, 0,2 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты, 0,1 мл 10%-го раствора едкого натра и преремешивают. Содержимое цилиндра оставляют на 5-10 мин при комнатной температуре, а затем доводят объем до 10 мл. Одновременно ставят контрольную пробу, где вместо мочи добавляют 0,1 мл воды, и стандартную пробу, где вместо мочи добавляют 0,1 мл стандартного раствора креатинина. Затем пробы фотометрируют в кювете с толщиной слоя 1 см при зеленом светофильтре (510-560 нм) против контроля.

Расчет производят по формуле: Х = Сст´Еоп´М/Ест´м

где Х - количество креатинина в суточной моче, мг;

Сст - количество креатинина в стандартной пробе, мг;

Еоп - экстинция опытной пробы;

Ест - экстинция стандартной пробы;

М - суточное количество мочи (2000 мл);

м - количество мочи для анализа ( 0,1 мл ).

В норме содержание креатинина у мужчин: 1-2 г/сутки, у женщин: 0,8-1,8 г/сутки.

Вычислив количество креатинина в опытной пробе по приведенной формуле, и сравнив их с нормальными значениями, делают выводы по работе.

ЗАНЯТИЕ 10

ТЕМА: Обмен нуклеопротеинов. Синтез и распад пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.

ЦЕЛЬ: Разобрать основные пути обмена пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Расщепление нуклеопротеидов в ЖКТ. Ферменты этого процесса.

2. Синтез пиримидиновых нуклеотидов. Роль оротовой кислоты в этом процессе.

3. Распад пиримидиновых нуклеотидов.

4. Источники синтеза пуриновых нуклеотидов.

5. Распад пуриновых нуклеотидов.

Оснащение занятия:

Реактивы: 1. Моча

2. Нитрат серебра 1%-ный раствор

3. Аммиак (концентрированный водный раствор)

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1. Обнаружение мочевой кислоты в моче

Принцип метода:Мочевая кислота образует с катионами серебра труднорастворимую соль (мочекислое сеебро).

Ход работы:В пробирку вносят 5 капель мочи и добавляют по 2 капли раствора аммиака и нитрата серебра. В пробирке появляется аморфный осадок мочекислого серебра.

Делают выводы по работе.

ЗАНЯТИЕ 11

ТЕМА: Обмен хромопротеинов. Синтез и распад гема. Определение билирубина.

ЦЕЛЬ: Разобрать превращения гемоглобина в тканях и освоить методы определения билирубина в биологических жидкостях.

ОСНОВНЫЕ ВОПРОСЫ

1. Синтез гема.

2. Распад гемоглобина.

3. Образование билирубина. Обезвреживание билирубина в клетках печени.

4. Обмен железа.

Оснащение занятия:

Реактивы: 1. Сыворотка крови

2. Диазосмесь: Диазореактив №1 (0,5%-ый раствор сульфаниловой

кислоты в разб. соляной кислоте) и Диазореактив №2 (0,5%-ый раствор

азотистокислого натрия). Перед работой смешивают 10 мл диазореактива

№1 и 0,3 мл диазореактива №2.

3. хлористый натрий 0,9%-ый раствор.

4. стандартный раствор билирубина (0,1 мг/мл)

5. Моча

6. азотная кислота 2%-ый раствор

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 1. Определение билирубина в сыворотке крови

Принцип метода:При взаимодействии сульфаниловой кислоты с соляной кислотой и с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфоновая кислота, которая с конъюгированным билирубином дает розово-фиолетовое окрашивание. По интенсивности окраски колориметрически определяют количество билирубина.

Ход работы:В две пробирки добавляют по 0,5 мл сыворотки. В контрольную пробирку добавляют 2 мл 0,9%-го хлористого натрия, а в опытную - 1,75 мл 0,9%-го хлористого натрия и 0,25 мл диазосмеси. Пробы колориметрируют при 500 - 560 нм. Расчет проводят по калибровочной кривой.

Норма прямого билирубина 0,1-0,3 мг%, общего билирубина 0,5-1,2 мг%.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2. Проба Гмелина на билирубин мочи.

Принцип метода:Билирубин, окисляясь дает соединения зеленого, синего и желтого цвета.

Ход работы:В пробирку вносят 10-15 капель 2%-ой азотной кислоты и по стенке - 5 капель мочи. На границе двух слоев появляется осадок белка и цветные кольца зеленого, синего, фиолетового, красного и желтого цвета.

Наши рекомендации