Схема определения колицингенотипов шигелл Зонне
Рисунок 9.
Колицинотипирование, т.е. определение спектра чувствительности культур Зонне к колицинам, определяют следующим образом.
Свежие эталонные колициногенные штаммы Фредерика, выросшие на среде Ресселя, сеют уколом петли в соответствующие квадраты чашки с 1,5%-ным МПА, подкрашенным генцианвиолетом, и инкубируют при 37º в течение 24 часов. Выросшие колонии бактерии убивают парами хлороформа, и поверхность агара заливают 2,5 мл расплавленного 0,7%-ного МПА, содержащего 2 капли 6-часовой испытуемой бульонной культуры шигелл Зонне. После 20-часового роста при 37° производят учет результатов опыта. При наличии чувствительности к колицинам испытуемого штамма бактерии Зонне вокруг колоний колициногенных культур образуются зоны задержки роста подобно зонам задержки роста вокруг дисков с антибиотиками. Культура считается чувствительной к колицину, если ширина задержки роста бактерий более 2 мм. Результаты регистрируют плюсами: + - зона задержки 2 мм; ++ - зона задержки 2-5 мм, +++ - зона задержки 5-10 мм, ++++ - зона задержки более 10 мм.
В.
Вирулентность дизентерийных бактерий обусловлена наличием у них факторов адгезии и колонизации, инвазии. (Эти факторы патогенности контролируются главным образом плазмидами). Кроме того, шигеллы способны вырабатывать 2 типа экзотоксинов: цитотонины (термолабильный и термостабильный) и цитотоксины (способностью вырабатывать цитотоксины шигеллу наделяют конвертирующие умеренные фаги).
Патогенность шигелл определяется с помощью кератоконъюнктивальной пробы на морской свинке.
Типовые и индикаторные культуры набора Абботта и Шеннона для колициногенотипирования шигелл Зонне.
| Типовые колициногенные культуры | Индикаторные культуры | |||
| Наименование штамма | Колициногенотип | Наименование штамма | Оригинальный № по схеме Абботта и Шеннона | Регистрационный № по списку Интернационального центра по шигеллам в Лондоне |
| S. sonnei | 1A | S. sonnei | ||
| S. sonnei | 1B | S. sonnei | ||
| S. sonnei | S. sonnei | |||
| S. sonnei | S. sonnei | 2M | ||
| S. sonnei | 3A | S. sonnei | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 56/56 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 56/98 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | R 1 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | R 6 | ||
| S. sonnei | S. dysenteriae 2 | M 19 | CTC8218 | |
| S. sonnei | S. sonnei | 2/7 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 2/64 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | 2/15 | ||
| S. sonnei | S. sonnei | R5 | ||
| S. sonnei | E. coli K-12 | ROW | ||
| S. sonnei | ||||
| S. sonnei |
Схема колициногенотипирования шигелл Зонне по Абботту и Шеннону.
| Индикаторные культуры | |||||||||||||||
| 2M | 56/56 | 56/98 | R 1 | R 6 | M 19 | 2/7 | 2/64 | 2/15 | R5 | ROW | |||||
| 1A | + | + | + | - | - | + | + | - | - | + | - | - | - | - | + |
| 1B | + | + | + | - | - | + | + | - | + | + | - | - | - | - | + |
| - | + | + | - | - | - | - | - | + | - | - | - | - | - | + | |
| + | + | + | - | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | + | |
| 3A | + | + | + | - | + | + | + | + | + | - | + | + | + | + | + |
| + | + | + | V | + | - | - | + | + | - | + | + | + | - | + | |
| + | + | + | V | + | + | + | + | + | + | + | + | + | - | + | |
| - | + | - | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - | - | + | |
| - | - | + | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| + | - | + | - | + | - | - | + | - | - | - | - | + | - | + | |
| + | + | + | - | V | + | + | + | + | - | - | - | + | - | + | |
| + | + | + | - | + | + | + | + | + | + | - | - | + | - | + | |
| - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | + | |
| + | + | - | - | + | + | + | + | + | - | - | - | + | - | + | |
| - | + | + | - | - | + | + | - | + | - | - | - | - | - | + | |
| + | + | + | V | + | + | + | + | + | - | + | + | + | - | + | |
| + | - | + | + | + | - | - | + | - | - | + | + | + | + | + |
Обозначения: + наличие зоны торможения индикаторных штаммов,
- отсутствие зоны торможения,
V – вариабельные результаты.
Занятие 8.
Дата________
Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
(продолжение).
План занятия.
А. Микробиологический диагноз пищевых токсикоинфекций (окончание).
1. Учет результатов посева на среды "пестрого ряда" и микроскопия выделенной культуры.
2. Разбор серологической классификации сальмонелл.
3. Агглютинация выделенной культуры на стекле с адсорбированными монорецепторными 0- и Н-сыворотками.
Б. Микробиологический диагноз дизентерии (продолжение).
I. Изучение результатов посева, сделанного на предыдущем занятии. Посев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда".
В. Микробиологический диагноз эшерихиозов.
1. Посев испражнений больных эшерихиозом детей на среды Эндо и Левина.
Методические указания.
A. Микробиологический диагноз пищевых токсикоинфекций (окончание).
§ 1. Зарегистрировать результаты посева выделенной культуры на среда "пестрого ряда", промикроскопировать посевы на МПА и зарисовать. На основании изучения биохимизма и морфологии выделенной культуры решить вопрос о ее принадлежности к роду сальмонелл и записать в тетради.
§ 2. Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной серологической классификации сальмонелл (демонстрация схемы).
§ 3. Поставить реакцию агглютинации выделенной культуры на стекле с адсорбированными монорецепторными 0- и Н-сыворотками.
Результаты реакции агглютинации зарисовать и записать в тетради.
Б. Микробиологический диагноз дизентерии (продолжение).
§ 1. Внимательно рассмотрев посевы на дифференциально-диагностических средах Левина и Плоскирева, найти колонии, подозрительные на дизентерийные (бесцветные, прозрачные). Часть колонии промикроскопировать с окраской по Граму и зарисовать, а оставшуюся часть засеять на скошенный МПА, среду Ресселя, среду Пешкова для определения подвижности и среды "пестрого ряда".
B. Микробиологический диагноз эшерихиозов.
§1. Произвести посев испражнений ребенка, больного эшерихиозом, на чашки с дифференциально-диагностическими средами Эндо и Левина.