Окраска по Цилю-Нильсену
1. На фиксированный препарат помещают полоску фильтровальной бумаги, наливают карболовый фуксин Циля и осторожно нагревают на горелке до появления пара, не допуская кипения жидкости. Нагревание повторяют 3 раза.
2. Снимают бумагу, промывают водой.
3. Погружают 3 раза в 5% раствор серной кислоты.
4. Промывают препарат водой и докрашивают метиленовой синью 5 минут.
5. Промывают водой, высушивают препарат фильтровальной бумагой, микроскопируют.
Контрольные вопросы.
Перечислите и охарактеризуйте основные этапы развития микробиологии. Назовите основные открытия Л. Пастера, Р. Коха, И.И. Мечникова. Заслуги отечественных учёных в развитии микробиологии. Назовите отрасли микробиологии, разделы медицинской микробиологии. Значение микробиологии в работе врача-стоматолога. Положение микроорганизмов среди других живых существ. Перечислите основные группы микроорганизмов. По каким признакам отличаются между собой эукариоты и прокариоты? Основные формы бактерий. Как называется кокки, располагающиеся: попарно, цепочкой, гроздьями, по четыре, пакетами? Как называются палочки, образующие споры? Как называются палочки, не образующие споры? Как называются извитые формы с одним завитком спирали? Как называются извитые формы с несколькими завитками? Методы исследования в микробиологии. Микроскопический метод: что изучает, с помощью чего? Устройство светового микроскопа. Что такое иммерсионная система? Правила работы с иммерсионной системой. Что такое разрешающаяспособность микроскопа и чему она равна у микроскопа с иммерсионной системой? Какова роль иммерсионного масла? Каким свойством должно обладать иммерсионное масло? Куда помещают иммерсионное масло при микроскопии? Нужно ли применять иммерсионное масло при микроскопии с объективом: x8, x40, x90?
Этапы приготовления препарата-мазка. Для чего фиксируют мазок? Способы фиксации мазков. Какие способы окраски называются простыми? Какие красители применяются для окраски бактерий? Какие способы окраски называются сложными, на чём они основаны? Как производится окраска по Граму в модификации Синёва: в какой цвет окрашиваются грамположительные бактерии, почему? В какой цвет окрашиваются грамотрицательные бактерии, почему? Чем обусловлена способность бактерий различно окрашиваться по Граму? Какие бактерии (кокки, палочки, извитые) красятся по Граму положительно и какие отрицательно? Из каких слоёв состоит клеточная стенка грамположительных и грамотрицательных бактерий? Принцип и техника окраски по Цилю-Нильсену. Какие патогенные бактерии являются кислотоустойчивыми?
Работа студента на практическом занятии.
1. Промикроскопируйте демонстрационные мазки - препараты различных форм бактерий: круглые (стафилококк, сарцина, стрептококк), палочковидные (кишечная палочка, стрептобациллы), извитые (вибрионы). К рисункам сделайте подписи: название бактерии, способ окраски, увеличение микроскопа.
2. Заполните в тетради таблицу: «Место микробов среди других живых существ».
3. Опыт окраски по Граму в модификации Синёва.
Цель опыта: определить, имеет ли метод Грама преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение этого метода.
Материалы: стафилококки (грамположительные бактерии) и кишечные палочки (грамотрицательные бактерии).
Ход опыта: приготовить 2 одинаковых мазка из смеси стафилококков и кишечных палочек; один мазок окрасить водным фуксином, другой - по Граму в модификации Синёва. Микроскопировать.
Результат: 2 рисунка и описание их.
Вывод: содержит ответы на вопросы, поставленные в цели опыта.
4. Опыт окраски по Цилю-Нильсену.
Цель опыта: определить имеет ли метод Циля-Нильсена преимущество перед простым методом и в чём оно состоит; определить, в каких случаях целесообразно применение этого метода.
Материалы: 2 одинаковых мазка из смеси туберкулёзной палочки (кислотоустойчивые бактерии) и кишечной палочки (кислотоподатливые бактерии)
Ход опыта: окрасить один мазок простым способом (метиленовой синью), другой - по Цилю-Нильсену. Микроскопировать.
Результат: 2 рисунка и описание их.
Вывод: содержит ответы на вопросы, поставленные в цели опыта.
Занятие 2
Методы микроскопического исследования. Структура бактериальной клетки.
Цель самоподготовки.
После самостоятельного изучения материала необходимо знать:
- структуру бактериальной клетки;
- принцип тёмнопольной, фазово-контрастной, люминесцентной и электронной микроскопии.
Исходный уровень знаний.
Для усвоения материала темы необходимо вспомнить:
- принципы классификации микроорганизмов;
- основные размеры и формы бактерий;
- назначение сложных методов окраски.
- устройство и принцип работы тёмнопольного и фазово-контрастного микроскопов;
- устройство и принцип работы люминесцентного микроскопа;
- устройство и принцип работы электронного микроскопа.
Цель занятия.
1. Отметить различия в строении и химическом составе прокариотов и эукариотов.
2.Ознакомиться с основными методами сложной окраски, применяемыми для выявления структурных элементов бактерий.
План изучения темы.
1. Принципы классификации микроорганизмов. Основные формы бактерий и назначение сложных методов окраски (повторить).
2. Постоянные структурные элементы бактериальной клетки.
3. Непостоянные структурные элементы.
4. Биологическая роль структурных элементов бактериальной клетки, методы их выявления.