Приготовление эталонных растворов
а) В мерной посуде готовится раствор ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде (0,2 М). Для этого:
— на аналитических весах берется навеска ортофосфорной кислоты;
— навеска переносится в колбу на 100 мл, объем доводится дистиллированной водой до метки, и смесь встряхивается до полного растворения (раствор № 1).
б) В мерный цилиндр на 100 мл переносится 75 мл раствора № 1, 20 мл метанола и 1 мл свежеперегаанного при 5б°С диэтиламина. Смесь хорошо перемешивается.
в) Для приготовления эталонных растворов анализируемых фенилалкиламинов используются чистые субстанции норэфедрина, эфедрона, эфедрина, амфетамина и метамфетамина, и проводят
следующие операции:
— на лабораторных весах взвешивается по 25 ± 1 мг указанных веществ;
— навеска каждого вещества переносится в соответствующую маркированную отдельную колбу на 50 см и заполняется элюентом до метки;
— содержимое колбы встряхивается до полного растворения осадка.
Эталонные растворы служат для идентификации указанных веществ, определения их хроматографических параметров, а также для приготовления контрольных растворов при проведении количественных анализов.
Элюеыт и эталонные растворы сравнения перед использованием необходимо очистить от механических примесей (пыль из атмосферы, частицы вещества), которые могут забивать фильтры колонки и нарушать нормальную работу насоса и хроматографической колонки. Для удаления этих примесей используется владипоровская мембрана с размером пор 0,15 — 0,25 мкм или мелкопористый стеклянный фильтр. Элюент перед работой необходимо продегазировать в течение 10 минут. Для этого используется ток газообразного гелия при расходе 40 — 50 мл/мин, обработка на ультразвуковой бане или вакуумный насос.
АНАЛИЗ МОДЕЛЬНОЙ СМЕСИ ФЕНИЛАЛКИЛАМИНОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИХ ПАРАМЕТРОВ УДЕРЖИВАНИЯ
Тестовая модельная смесь норэфедрина, эфедрона, эфедрина, амфетамина, метамфетамина готовится в растворе подвижной фазы. Для этого:
а) берется навеска норэфедрина, эфедрина, эфедрона, амфетамина, метамфетамина;
б) навески переносятся в колбу 50см , объем доводится до метки, смесь встряхивается до полного растворения и фильтруется..
Хроматографирование модельной смеси проводится при следующих условиях:
расход элюента — 100 мкг/мл;
объем вводимой пробы — 7 мкл;
масштаб чувствительности — 0,4 е.о.п.;
время измерения — 0,3 с;
длина волны — 210 нм.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРЕДЕЛОВ ОБНАРУЖЕНИЯ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ВЕЩЕСТВ
Предел обнаружения анализируемого вещества устанавливается по величине такого количества вещества, которое вызывает сигнал, превышающий в 5 раз уровень флкжтуационных шумов, который на шкале чувствительности составляет 2 мм.
Значение пределов обнаружения (Gmin, мг) рассчитывается по формуле
АНАЛИЗ БИОПРОБ НА СОДЕРЖАНИЕ ФЕНИЛАЛКИЛАМИНОВ
Качественный анализ
Идентификация фенилалкиламинов, содержащихся в биопробах, производится следующим образом:
а) сопоставляются время (объемы) удерживания и коэффициенты емкости определяемого компонента и образца сравнения (эталонный раствор) индивидуальных фенилалкиламинов;
б) сравниваются УФ-спектры предполагаемого компонента и об
разца сравнения;
в) оценивается совпадение значений времени удерживания определяемого компонента и образца сравнения при добавлении эталонного раствора в раствор экстракта из биопробы (концентрация
образца сравнения должна быть близка к концентрации определяемого компонента);
г) сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и образца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спектральное отношение.
Количественный анализ
Для количественного анализа фенилалкиламинов в биощюбах можно использовать различные методы,в том числе метод добавки, метод внешнего стандарта, метод внутреннего стандарта и т.д.
а) Метод добавки. В соответствии с методом добавки проводят анализ раствора экстракта биопробыиз этого же раствора, но с добавкой в него раствора известной концентрации предполагаемого фенилалкиламина (эталонного раствора). Анализы растворов "без добавки" и "с добавкой" должны проводиться в одном масштабе регистрации.
Концентрация определяемого вещества (О) в растворе экстракта из биопробы определяется но формуле
где
Ск —- концентрация "добавки" в растворе подвижной фазы; Vk —- объем добавленного эталонного раствора; Vi — объем раствора экстракта с определяемым веществом; hi — высота сигнала определяемого вещества в растворе экстракта из биопробы; hi+k—- высота сигнала определяемого вещества после добавки в раствор экстракта эталонного раствора.
б) Метод внешнего стандарта. В соответствии с методом внешнего стандарта и с учетом линейной зависимости выходного сигнала от массы вещества последовательно, сразу же после анализа раствора экстракта биопробы проводят анализ эталонного раствора идентифицированного вещества. Концентрация эталонного раствора (Ск) должна быть близка к концентрации определяемого вещества в растворе экстракта. Анализы эталонного раствора и экстракта биопробы должны проводиться в одном масштабе регистрации.
где
hi — высота сигнала определяемого наркотического вещества в растворе экстракта биопробы; hk — высота пика вещества эталонного раствора.
в) Метод внутреннего стандарта. В соответствии с методом внутреннего стандарта к биообъекту до операции пробоподготовки добавляется известное количество вещества, принятого за стандарт.
Концентрация определяемого вещества (СО рассчитывается по формуле
где
Свс — концентрация внутреннего стандарта;
hi — высота пика (или площадь) определяемого вещества;
hBc — высота пика (или площадь) стандарта;
Fi/bc— относительный калибровочный фактор.
Относительный калибровочный фактор компонента Fi/с вычисляется по формуле
где
hi — высота пика (или площадь) компонента известной концентрации (калибровочный раствор);
Q —концентрация калибровочного раствора определяемого компонента;
hue — высота пика (или площадь) внутреннего стандарта;
Свс — концентрация внутреннего стандарта.
СЕЛЕКТИВНЫЙ АНАЛИЗ ЭФЕДРОНА
Используя значительное различие в коэффициентах молярного поглощения эфедрона и других соединений этой группы при 250 нм, можно провести селективный анализ эфедрона в смеси с другими компонентами этой группы — норэфедрином, эфедрином, амфетамином, метамфетамином. При этом анализ проводится путем детектирования при двух длинах волн: 210 нм для регистрации всех определяемых фенилал-киламинов и 250 нм для селективно определяемого эфедрона с последующим сопоставлением полученных хроматограмм для количественного определения эфедрона в биопробах.
При детектировании при длине волны 250 нм имеет место селективная чувствительность спектрофотометрическогодетектора к определяемому эфедрону и практически полное отсутствие чувствительности к сопутствующим компонентам.
Эфедрин
![]() |
Эфедрин (1-фенил-2-метиламинопропанола-1-. гидрохлорид) относится к ациклическим алкалоидам, в молекуле которых аминогруппа находится в боковой цепи. Эфедрин и его стереоизомер псевдоэфедрин находится в некоторых видах эфедры. Эфедрин также содержится в тиссе ягодном и в некоторых других растениях.
Находящийся в растениях эфедрин является левовращающим, а синтетический — правовращающим. К числу синтетических препаратов относится эфетонин, являющийся рацематом эфедрина.
Основание эфедрина растворяется в этиловом спирте (1 : 1), воде (1:36), диэтиловом эфире и хлороформе. Гидрохлорид эфедрина растворяется в воде (1 :4), этиловом спирте (1 : 17), практически не растворяется в диэтиловом эфире и хлороформе. Эфедрин экстрагируется органическими растворителями из щелочных водных растворов.
Он повышает артериальное давление, сужает сосуды, расширяет зрачок и бронхи, уменьшает перистальтику кишок, возбуждает центральную нервную систему. В медицине эфедрин применяется при бронхиальной астме, в глазной практике и при ряде других заболеваний.
Метаболизм. Эфедрин быстро всасывается из пищевого канала и накапливается в печени, почках, легких и мозге. Через 24 ч 80 % принятой дозы эфедрина выделяется из организма с мочой в неизмененном виде. Незначительная часть дозы эфедрина подвергается N-деметилированию с образованием феиилпропаноламина. Этот метаболит эфедрина выделяется из организма с мочой. Эфедрин — в неизмененном виде выделяется 55—75%. Основными метаболитами являются: 8 — 20%— норэфедрин, 4 — 13%—безаминные метаболиты (бензойная и гиппуровая кислоты, фенилпропандиол). При щелочной моче выведение эфедрина снижается до 20—35%, соответственно увеличивается содержание норэфедрина. рКа = 9,6. Т ½ = 9-11ч.
Обнаружение эфедрина
1. Реакция с солями меди и сероуглеродом. При взаимодействии эфедрина с сероуглеродом и щелочным раствором сульфата меди образуется производное дитиокарбаминовой кислоты, растворимое в бензоле:
2. Реакция с 2,4-Динитрохлорбензолом. При этом образуется фенилэтилкетон и амин:
Образовавшийся при этой реакции метиламин с 2,4-динитро-хлорбензолом дает соединение желтого цвета, которое экстрагируется хлороформом:
3. Реакция с реактивом Драгендорфа. При взаимодействии эфедрина с реактивом Драгендорфа образуются кристаллы, напоминающие тонкие иглы, собранные в пучки.