Вимірювання розмірів клітин

Мета роботи: Ознайомитись з методикою вимирювання розмірів мікроорганізмів

Теоретичні основи: Дріжджові клітини вимірювали під мікроскопом за допомогою гвинтового окулярного мікрометру (рисунок 12.1) .

1 – корпус; 2 – відрахунковий барабан; 3 – окуляр з діоприйною наводкою; 4 – вінт для кріплення на тубусі мікроскопу;

5 – вид під мікроскопром.

Рисунок 12.1 - Окулярний мікрометр

Окулярний мікрометр являє собою круглу скляну пластинку, в центрі якої знаходиться лінійка довжиною 5 мм. Лінійка розділена на 50 частин. Окулярний мікрометр вставляють в окуляр. Для цього викручують окулярну лінзу окуляра поміщають на його діафрагму окулярний мікрометр намітками вниз та закручують лінзу. Однак, діленнями окулярмікрометру не можна виміряти величину клітини, тому що останні продивляються через об’єктив та окуляр, а поділи лінійки – тільки через верхню лінзу окуляру. Тому, перед тим, як почати вимірювання величини клітин, необхідно визначити ціну ділення окулярного мікрометру для даного збільшення мікроскопу, що роблять за допомогою об’єктивного мікрометру (рисунок 12.2).

а – загальний вид; б – вид під мікроскопом.

Рисунок 12.2 – Об’єктивний мікрометр

Об’єктивний мікрометр – це металічна пластина з вирізом в центрі. В виріз вставлено скло, на якому нанесено лінійку довжиною 1 мм. Вона розділена на 100 частин, тобто ділення об’єктивного мікрометру складає 0,01 мм, або 10 мкм. Для визначення ціни ділення окулярного мікрометру об’єктивний мікрометр поміщають на столик мікроскопу й фокусують при малому збільшені. Зображення лінійки переміщають в центр поля зору і тільки після цього змінюють об’єктив на той, при якому будуть визначатися розміри клітин. Переміщаючи столик мікроскопу і повертаючи окуляр, встановлюють мікрометри так, щоб їх шкали були паралельні і одна перекривала другу. Ціну ділення окулярного мікрометру визначають за принципом ноніуса, тобто суміщають одне ділення шкали окулярного і об’єктивного мікрометрів і находять слідуючи їх ділянки сумісництва (рисунок 12.3).

1 – об’єктивний мікрометр; 2 – окуляр мікрометр

Рисунок 12.3 - Визначення ціни ділення окулярного мікрометру:

Встановлюють, скільком діленням об’єктивного мікрометру мікрометру відповідає одне ділення окулярного мікрометру. Наприклад, два ділення об’єкт – мікрометру (20 мкм) відповідають п’яти діленням окуляр – мікрометру, тобто, одне тобто одне ділення окуляр – мікрометра дорівнює 4 мкм (20:5). Якщо тепер на столик мікроскопу положити препарат з клітинами мікроорганізму і роздивляти його при тому ж збільшенню, то можна визначити величину клітини. Для цього визначають, якому числу ділень окулярної лінійки відповідає величина виміряємого об’єкта, і помножують це число на ціну ділення окулярного мікрометра.

Оскільки для вимірювання краще використовувати живі, а не фіксовані клітини (фіксація і фарбування приводять до змінення розмірів клітин) проводили вимірювання дріжджових клітин також за допомогою фазово-контрасного пристрою (рисунок 12.4).

Рисунок 12.4 – Фазово – контрастний пристрій

Визначення розмірів клітин фазово-контрасною мікроскопією Препарати живих кліток мікроорганізмів по фарбуванню і прозорості мало відрізняються від навколишнього середовища, тому що світлові промені, проходячи через живу клітку, не змінюють своєї амплітуди, хоча і змінюються по фазі. Метод фазово-контрастної мікроскопії дозволяє перетворити невидимі фазові зміни, що перетерплюються світловою хвилею при проходженні через мікробну клітину, у видимі амплітудні і тим самим підвищити контрастність зображення. Оптична система, яка використовується для одержання фазового контрасту, складається з фазової пластинки і кільцевої діафрагми.

Фазова пластина - це коло напилювання із солей рідких металів на одну з лінз об'єктива, вона забезпечує зміну фази минаючої хвилі на 1/4, що приводить до перетворення фазових розходжень в амплітудні. Кільцева діафрагма - це непрониклива для світла пластина, що має прозору щілину у виді кільця, через яку надходить світло в конденсор. Фазовий ефект виходить лише при точному сполученні фазового кільця з проекцією кільцевої діафрагми.

Фазово-контрастний пристрій складається з набору фазових об'єктивів, що мають на металевій оправі крім указівки збільшення ще і позначку "Ф", револьверного конденсора з набором кільцевих діафрагм, кожна з який відповідає фазовій пластинці визначеного об'єктива, і допоміжного мікроскопа, призначення якого - центрування кільцевої діафрагми стосовно фазової пластинки об'єктива.

Застосування фазово-контрасного пристрою не збільшує дозволяючи здатність мікроскопу але дає можливість побачити прозорі об’єкти більш чітко і навіть виявити деякі структури в клітинах дріжджів. При роботі з фазово-контрасним прстоєм для вимірювання дріжджових клітин застосовується також гвинтовий окулярний мікрометр МОВ-1-15.

Матеріали, реактиви й устаткування: мікроскоп, об’єктивний мікрометр, окулярний мікрометр, культура дріжджів.

Хід роботи:

1. Визначити довжину та ширину дріжджових клітин.

2. Визначити середній розмір дріжджової клітини

Контрольні питання:

1. Що являє собою окулярний мікрометр?

2. Що являє собою об’єктивний мікрометр?

3. Методика визначення розміру клітин мікроорганізмів.

Форма звітного бланка до лабораторної роботи № 12.

Група	Курс	Лабораторна робота № 12
		Вимірювання розмірів клітин
Прізвище студента
1) Середня довжина клітин……….. 2) Середня ширина клітин…………   2) Відповідь на контрольні питання 3) Висновки по лабораторній роботі № 12
Роботу прийняв		Дата		Підпис

Перелік посилань

1. Слюсаренко Т.П. Лабораторный практикум no микробиологии пищевых продуктов. -М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984.-186 с

2. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. -М.: Медицина, 1978.-205

3. Руководство к практическим занятиям по микробиологии: Практ. пособие/ Под ред. Н.С. Егорова, - М., изд-во МГУ, 1983.-215с.

4. Черемисинов Н.А., Баева Л.И., Амухатова Ο.Α. Практикум по микро­биологии. -М.: Высшая школа, 1967.- 169 с.

5. Теппер Е.З, Шильникова В.К., Переверзева Г.Т. Практикум по

микробиологии .- М.:Колос, 1993.-175 с.

6. Костенко Т.С. Скоршевская Е.И., Гительсон С.С Практикум

по ветеринарной микробиологии и иммунологии.- М.:

Агропромиздат, 1989.- 105 с

7. Методичні вказівки до лабораторних робіт з дисципліни «Біохімія і мікробіологія біологічних агентів», частина 2 “Мікробіологія - для студентів спеціальності 7.091607 – “Біотехнологія” Укладач Т.К.Винокурова; Дніпродзержинськ, ДДТУ, 2001, 52 стор.

Навчальне видання

Методичні вказівки до лабораторних робіт з дисципліни „Загальна мікробіологія та вірусологія” для студентів напряму 6.051401 „Промислова біотехнологія” всіх форм навчання

Укладачі: Філімоненко Ольга Юріївна

Філімоненко Дмитро Володимирович

Підписано до друку______________2009 р.

Формат________________ Обсяг_________________

Тираж______________ екз. Заказ_________________

51918, м. Дніпродзержинськ, вул. Дніпробудівська,2