Стория открытия возбудителей.

Бруцеллез как заболевание известен давно, со времен Гиппократа , но научное его изучение началось в 60-х годах Х1Х века. В то время оно получило название «средиземноморская, или мальтийская лихорадка» В 1886 г. Д.Брюс обнаружил возбудителя заболевания в мазках из селезенки погибшего от бруцеллеза больного ( впоследствии этот возбудитель был назван В.melitensis). В 1897 году датские ученые выделили сходные микроорганизмы при инфекционных абортах у коров. В 1914 г. Д Траум обнаружил аналогичных возбудителей у больных свиней и назвали их В.suis. В 1920 г эти бактерии были объединены в один род, названный в честь Д.Брюсса бруцеллами. Позднее были выделены другие виды бруцелл: в 1957 г - В.neotomae (от кустарниковых крыс); в 1970 – В. оvis (от барана); В.canis (от гончих собак). Серологические исследования при диагностике бруцеллеза были начаты в 1897 году А.Райтом и Д.Семплом. Большой вклад в изучение заболевания внесли русские ученые А.Ф.Билибин, Г.П.Руднев, А.А.Вершилова и другие.

У животных заболевание проявляется инфекеционнымиабортами.

Таксономия

Род- Вrucella,

виды: В. abortus , В.melitensis, В.suis, В.саnis, В ovis, В.neatomae. Наиболее патогенны для человека– первые 3 вида.

орфология.

Возбудители представляют собой мелкие кокковидные палочки размерами 0,6-1,5 х О,5 – 0,7 мкм, грам (-), неподвижные, спор не образуют. Свежевыделенные штаммы могут образовывать нежную капсулу. Бруцеллы отличаются выраженным полимофизмом; в мазках бактерии располагаются беспорядочно.

ультуральные свойства.

Бруцеллы – строгие аэробы. Они требова- тельны к питательным средам, для их роста необходимы тиамин, ниацин, биотин. Они хорошо растут на печеночном, сывороточном или кровяном агаре (с добавлением 0,5% эритроцитов барана). Особенностьюбруцеллбычьего типа является их потребность в повышенном содержании в атмосфере углекислого газа. На плотных питательных средах бруцеллы образуют выпуклые гладкие мутноватые колонии с перламутровым оттенком (S-формы). При длительном выращивании колонии приобретают желто-зеленый оттенок. Возможна диссоциация в R-формы. В жидких средах наблюдается рост в виде диффузного помутнения. Характерен медленный рост бруцелл, особенно - первых генераций: при посеве из органов появляются через 1-3 недели и более. При пересеве лабораторных культур рост наблюдается через 1-2 дня. Оптимальные условия культивирования: температура - 37⁰С, рН среды – 6,6-7,4.

Биохимическая активность

Выражена слабо: бруцеллы ферментируют глюкозу и арабинозу до кислоты, разлагают белки с образованием сероводорода, восстанавливают нитриты, индол не образуют.

Разделение на виды основано на биохимических различиях, в частнос-

ти, на способности расти на средах с фуксином и тионином, на лизабельно-

сти специфическими фагами, а также на агглютинабельности монороцеп-

торными сыворотками. Т Таблица1

Видовые различия бруцелл

Виды бруцелл	Рост на средах с красителями	Образование сероводорода	Потребность в СО2
фуксином 1:5000	тионином 1:2500
B. melitensis (3 биовара)	+	+	–	–
B. abortus (8. биоваров)	+	–	+	–
В .suis (4 биовара)	–	+	+	–

Антигенная структура.

У бруцеллвыявлено до 15 антигенных фракций. Различают родовой и поверхностный антигены. М-антиген доминирует у В.melitensis ; A-антиген преобладает у В. abortus и В suis; R-антиген свойственен шероховатым формам. Третий, поверхностный антиген L, термолабильный, имеет сходство с Vi-антигеном сальмонелл. Имеются общие антигены с возбудителями туляремии и с холерными вибрионами.

Факторы патогенности.

Бруцеллы обладают эндотоксином, имеющим высокую инвазивную способность. Они продуцируют также ферменты патогенности: гиалуронидазу и нейраминидазу. Адгезивные свойства связаны с пилями-1 и белками наружной мембраны. Считают, что возбудитель, обладая высокой инвазивностью, может проникать в организм человека через неповрежденые кожные и слизистые покровы. Бруцеллы могут образовывать капсулу. Кроме того, бруцеллы обладают выраженными аллергогенными свойствами.

Резистентность

Возбудители довольно устойчивы во внешней среде: при температуре 10-13⁰ С они могут сохраняться в воде и влажной почве до 5 месяцев, в молоке – 9 месяцев, в сыре – до 1 года. Они устойчивы к низким температурам, и в замороженном мясе выживают до 5 месяцев. Хуже они переносят высокую температуру: при 70⁰С погибают в течение 10 минут, при кипячении – мгновенно. Чувствительны к 3 % раствору хлорной извести. 1% хлорамину, 0,5% лизолу, 2% формалину, которые губят их за 5 минут

.

пидемиоогия.

Основной источник и резервуар инфекции - больныедомашниеживотные: овцы, козы, свиньи, крупный рогатый скот. В редких случаях источником инфекции могут быть лошади , верблюды и некоторые другие животные, которые выделяют возбудителя с молоком, мочой, калом, околоплодной жидкостью.

У человека наиболее часто заболевание вызывается В.melitensis, которые обусловливают наиболее тяжелые формы заболевания. Реже человек заражается В.abortus от крупного рогатого скота, однако клинически выраженные инфекции при этом регистрируются редко. Наиболее опасными в смысле заражения являются периоды отелов скота, так как в околоплодной жидкости содержится большое количество возбудителей. Больной человек не опасен для окружающих.

Механизмы заражения - разнообразны; наиболее частый –фекальноно-оральный. Большую опасность представляют сырое молоко и молочные продукты, не подвергающиеся в процессе приготовления тепловой обработке (брынза, сыр). Мясо представляет меньшую опасность – только в случаях его недостаточной тепловой обработки. Контактно-бытовой путь заражения возможен при попадании возбудителя на поврежденные кожные или слизистые покровы при уходе за больными животными; при оказании им родовспомогательной помощи или при разделке туш больных животных. Воздушно-капельный путь заражения описан при вдыхании воздушно-пылевой смеси, содержащей инфицированные частицы шерсти, навоза, земли во время уборки помещения. Известны также случаи лабораторного заражения медицинских работников.

Для бруцеллеза свойственен выраженный профессиональный характер заболевания

.

Патогене и клинические особенности..

Бруцеллы проникают в организм человека через слизистые оболочки или кожные покровы, не оставляя никаких изменений в области входных ворот. Лимфогенным путем возбудители заносятся в региональные лимфоузы и накапливаются в них. Они подвергаются фагоцитозу, но способны выживать внутри фагоцитов за счет выделения низкомо- лекулярных факторов, угнетающих слияние фагосом с лизосомами . Внутри фагоцитов бруцеллы могут формировать L-формы и длительно перси- стировать в организме. Обратный переход в исходные формы обуслов- ливает рецидив болезни. Из разрушенных макрофагов возбудители попадают в кровоток и диссиминируют в печень, селезенку, почки, костный

мозг, эндокард. В пораженных органах образуются очаги некроза, окруженные инфильтратами. Возбудители могут попасть в молочные железы человека и появляться в грудном молоке. Из-за метастатических очагов размножения бруцелл в органах в клинической картине заболевания появляются признаки очаговых поражений со стороны опорно-двигательного аппарата, нервной и других систем. С выходом возбудителей в кровеносное русло связаны явления бактеремии и эндотоксинемии. При хроническом процессе формируются аутоиммунные механизмы

Клинические особенности.Инкубационный период – 1-4 недели(он может длиться до 2-3 месяцев). Болезнь начинается с озноба, подъема температуры, нарастающей интоксикации, слабости, могут развиваться явления орхита, эпидидимита, артрита. Поражения нервной системы проявляются в виде плекситов и радикулитов. У женщин может развиться оофорит, эндометрит, нарушения менструального цикла.

При острой форме заболевания на 4-6 день формируется состояние замедленной гиперчувствительности., что выявляется кожной пробой Бюрне.

Иммунитет

Постинфекционный иммунитетформируется нестойкий, гуморальный и клеточный, нестерильный. При этом образуются неполные антитела. Возможны повторные заболевания.

Профилактика

Неспецифическаяие мероприятия заключаются в соблюдении правил личной гигиены и режима обработки сельскохозяйственной продукции; в осуществлении профилактики заболеваемости среди животных.

Специфическая профилактика.В эндемичных очагах инфекции проводятвакцинацию живой вакциной, получаемой из аттенуированного штамма В. аbortus. Вакцинация – накожная, однократная. При отрицате-льной кожной пробе и отсутствии выработки антител проводится ревакцинация.

Лечение

Терапия основана на применении антибиотиков широкого спектра действия. Препараты выбора: тетрациклины, аминогликозиды (стрептоми-

цин); в тяжелых случаях – рифампицин Для лечения хронических форм заболевания применяется убитая бруцеллезная вакцина.

Микробиологическая диагностика.

При бактериологическом методе исследуемым материалом является: кровь, пунктат костнго мозга, моча. Посев производится в 2 флакона, в одном из них создается повышенная концентрация углекислого газа. При появлении видимого роста делают пересев на плотную питательную среду для выделения чистой культуры и последующей идентификации бактерий в РА с видовыми сыворотками.

С целью идентификации выделенных возбудителей используется комплекс признаков, отличающих виды друг от друга: потребность в углекислом газе при культивировании; способность расти на питательных средах с красителями (основной фуксин, тионин); образование сероводо- рода; способность синтезировать уреазу; чувствительность кбактериофагам

Серодиагностика осуществляется в РА Хеддельсона и Райта, Кумбса, РТГА.

3.4. FRANCISЕLLA TULARENSIS – ВОЗБУДИТЕЛЬ ТУЛЯРЕМИИ

Туляремия- острое природно-очаговое заболевание, характеризующееся поражением лимфоузлов, легких, кожных покровов, кишечника.

История открытия возбудителя. В 1910 году Д.Мак-Кой описал заболевание, обнаруженное у сусликов и напоминающее по своей клинической картине бубонную форму чумы. Вскоре он же и Ч.Чапин во время эпизоотии среди земляных белок выделили от больных животных возбудителя. Так как это происходило в районе озера Туляре в Калифорнии, выделенного возбудителя назвали В.tularensis (1912 г.). Позже выяснилось,что к этой инфекции восприимчивы и люди, и по предложению

американского бактериолога Френсиса, подробно изучившего свойства возбудителя этого заболевания у людей, оно была названо туляремией., а затем и возбудитель тоже был назван франциселлой.

Таксономия

Род Francisella, вид Francisella tularensi.

Морфология

Мелкие палочки размерами 0,2 х 0,7 мкм., неподвижные, обладают полиморфизмом, грам(-), спор не образуют, некоторые имеют капсулу. В мазках из культур преобладают кокковые формы. Окрашиваются слабо , интенсивнее окрашиваются по полюсам.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы, требовательны к питательным средам. На обычных средах не растут. Культивируются на средах с добавлением яичного желтка (среда Мак-Коя). На них вырастают крупные нежные молочно-белые колонии. Фрэнсис предложил добавлять в питательную среду цистин, глюкозу, эритроциты. Хороший рост появляется также на средах с мозговой или печеночной тканью. В первых генерациях микробы роста не дают. Рост на питательных средах -замедленный, максимальных размеров колонии достигают на 3-5 дни культивирования. В жидких питательных средах – рост поверхностный в виде пленки. Оптимальные условия культивирования – рН 6,8 – 7; температура – 37⁰С.

Биохимические свойства

Онислабо выражены. Бактерии ферментируют глюкозу, мальтозу и некоторые другие сахара до кислоты. Некоторые штаммы ферментируют глицерин, и это используется для их дифференци- ации. Образуют аммиак, сероводород, индола не образуют. Биохимическая активность нестандартна. С учетом ферментативной активности (по отно- шению к глицерину) и распространенности в природе выделяют 3 географические расы (подвиды) возбудителя:

а) голарктическая – не ферментирует глицерин, умеренно патогенна для домашних крыс и человека, распространенна в Европе и Азии;

б) среднеазиатская – ферментирует глицерин, умеренно патогенна для человека, встречается на территории нашей страны;

в) неарктическая – ферментирует глицерин, высоко патогенна для человека, распространена в Северной Америк.

Антигенная структураа.

Бактерии имеют:О-антиген, связанный с клеточной стенкой; Vi – антиген, которым обладают только бактерии в S-форме; с этим антигеном связана вирулентность и иммуногенность возбудителя. Возбудитель туляремии в S-форме (вирулентный) имеет 2 антигена: О-, имеющий сходство с антигеном бруцелл, и Vi- капсульный. Имеются также общие антигены с бруцеллами и иерсиниями.

акторы патогенности .

О-антиген (эндотоксин),Vi-антиген, а также ферменты патогенности (гиалуронидаза, нейраминидаза), пили-1, белки наружной мембраны (адгези=

ны), капсула.

Резистентность.

Возбудитель хорошо сохраняется во внешней среде безснижения вирулентных свойств, особенно при низких температурах. Так в воде при +4⁰ С он сохраняет жизнеспособность до 1 месяца; на зерне – до 6 месяцев; при 20-30⁰С – 20 дней; в шкурах животных, погибших от туляремии, - до 1 месяца. Отмечается хорошая чувствительность возбудителя к высоким температурам и к дезинфицирующим веществам. При 60⁰С гибель микробов наступает через 20 минут; при кипячении – за 1-2 минуты. 5% раствор формалина убивает возбудителя за 2-5 минут, 70% этиловый спирт - за несколько минут.

Эпидемиология.

Туляремия - природно-очаговая зоонозная инфекция. Резервуар и источни инфекции – многочисленные виды диких грызунов, зайцевидные, птицы, собаки, парнокопытные и другие животные (всего- 82 вида). Основная роль в поддержании инфекции в природе принадлежит грызунам (полевкам, крысам, ондатрам и другие).

Механизм заражения чаще всего – трансмиссивный: передается животным и птицам кровососущими насекомыми. Специфические переносчики – иксодовые клещи. Человек заражается от больных животных: при прямом контакте, например, при снятии шкур, сборе павших грызунов; алиментарным путем – через инфицированнуюводу или продукты; респираторным путем – при вдыхании содержащей возбудителей пыли от зерна. соломы, овощей.