Количественное определение креатинина в моче
Креатитин образуется из креатининфосфата и является постоянной составной частью мочи. За сутки с мочой выделяется 1-2 г (8,8-17,6 ммоль) креатинина, что составляет 2-7% азота от всех азотсодержащих соединений мочи. Количество выделенного с мочой креатинина зависит от интенсивности процессов распада белков тканей организма и содержания креатинина в пище (его много в мясной пище).
Креатин Креатинфосфат Креатинин
Повышенное содержание креатинина в моче наблюдается при острых инфекциях, лихорадочных состояниях, у больных сахарным и несахарным диабетом. Моча здорового человека не содержит креатина, и выделение его с мочой свидетельствует о патологии поперечнополосатых мышц (миостения, мышечная дистрофия).
Принцип метода. Метод количественного определения креатинина в моче основан на цветной реакции Яффе с пикриновой кислотой с последующим определением интенсивности окраски на ФЭКе. Концентрацию креатинина в исследуемой моче находят по калибровочной кривой, выражающей зависимость окраски стандартных растворов от их концентрации.
Ход определения. В одну мерную колбу отмеривают 0,5 мл мочи, в другую – 0,5 мл дистиллированной воды (контрольная проба). В обе колбы добавляют по 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты, смесь перемешивают, добавляют по 0,2 мл 10% раствора NaOH и доводят объем дистиллированной воды до 100 мл. Перемешивают содержимое колб, выдерживают в течение 10 мин при комнатной температуре и измеряют на ФЭКе оптическую плотность опытной пробы против контроля в кюветах с толщиной слоя 1 см со светофильтром (зеленый, длина волны 540 нм).
Зная оптическую плотность опытного раствора, по калибровачному графику определяют содержание креатинина в пробе, взятой для анализа, и расчитывают количество креатинина, выделенного с мочой за сутки по формуле:
где α- содержание креатинина в пробе с мочой, найденное по калибровочному графику, ммоль; V-объем мочи, взятой для анализа, мл; Vсут – суточный объем мочи, мл.
| 0 5 10 15 20 мкмоль/проба |
| Еопт. плотн. |
| 0,4 0,3 0,2 0,1 |
Оформление работы. Записывают принцип метода, рисуют калибровочный график и указывают содержание креатинина в моче в норме.
Тема 4.4. Обмен фенилаланина, тирозина, аспарагиновой,
Глутаминовой кислот, валина, лейцина и изолейцина.
Вопросы для самоподготовки.
1.Напишите формулы фенилаланина и тирозина.
2.Напишите процесс превращения фенилаланина и тирозина в фумаровую и ацетоуксусную кислоты.
3.Напишите процесс синтеза адреналина.
4.Напишите процесс синтеза тироксина.
5.Нарисуйте схему превращения тирозина в меланин.
6.Нарисуйте схему обмена фенилаланина и тирозина.
7.Укажите на схеме места возможных генетически обусловленных блоков.
8.Назовите генетический дефект, приводящий к развитию фенилкетонурии.
9.Назовите основные клинические проявления фенилкетонурии.
10.Какой режим питания следует рекомендовать при фенилкетонурии и тирозинозе?
11.Назовите основные принципы коррекции фенилкетонурии.
12.Назовите локализацию генетического дефекта, приводящего к развитию тирозиноза.
13.Назовите лабораторно-диагностические признаки тирозиноза.
14.Назовите локализацию генетического дефекта, приводящего к развитию алкаптонурии.
15.Назовите диагностические признаки алкаптонурии.
16.Назовите локализацию генетического дефекта, приводящего к развитию альбинизма.
17.Назовите диагностические признаки альбинизма.
18.Что такое скрининг программа?
19.Назовите условия, необходимые для проведения скрининг-программ по выявлению наследственных заболеваний обмена аминокислот.
20.Назовите аминокислоты, являющиеся медиаторами нервной системы.
21.Назовите аминокислоты, являющиеся предшественниками медиаторов нервной системы.
22.Перечислите биологически активные вещества, для синтеза которых необходима глутаминовая кислота.
23.Составьте схему обмена глутаминовой кислоты в организме.
24.Напишите процесс превращения глутаминовой кислоты в глутамин.
25.Укажите биологическое значение глутамина.
26.Составьте схему использования амидного азота глутамина для синтеза различных соединений.
27.Перечислите биологически активные вещества, для синтеза которых необходима аспарагиновая кислота.
28.Назовите аминокислоту, из которой в организме человека образуется α-аланин.
29.Из какой аминокислоты в организме человека образуется β-аланин?
30.Составьте схему обмена аспарагиновой кислоты в организме.
31.Напишите процесс образования аспарагина.
32.Укажите биологическое значение аспарагина.
33.Напишите структурные формулы валина, лейцина и изолейцина.
34.Назовите места катаболизма аминокислот с разветвленной углеродной цепью.
35.Напишите уравнение реакции трансдезаминирования валина.
36.Назовите ферменты и коферменты, катализирующие реакцию трансдезаминирования валина.
37.Напишите уравнение реакции трансдезаминирования лейцина.
38.Назовите ферменты и коферменты, катализирующие реакцию трансаминирования лейцина.
39.Напишите уравнение реакции трансаминирования изолейцина.
40.Назовите фермент и кофермент, катализирующий реакцию трансаминирования изолейцина.
41.Назовите биохимические признаки заболевания «болезнь с запахом кленового сиропа».
42.Назовите клинические проявления заболевания «болезнь с запахом кленового сиропа».
Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля.
1.В каких процессах используются безазотистые остатки аминокислот:
| 1. фенилаланин; 2. глутаминовая кислота; 3. лейцин; 4. изолейцин. | а) глюконеогенез; б) кетогенез; в) оба процесса. |
2.Через какие метаболиты включаются в окисление пировиноградной кислоты безазотистые остатки аминокислот:
| 1. пируват; 2. α-кетоглутарат; 3. сукцинил-КоА; 4. оксалоацетат. | а) валин; б) аспарагиновая кислота; в) глутамин; г) глутаминовая кислота; д) лейцин. |
3.Укажите соответствие:
| 1. фенилаланин; 2. тирозин; 3. пролин; 4. аспарагиновая кислота; 5. валин. | а) заменимая; б) незаменимая; в) условно заменимая. |
4.Напишите схему синтеза глутамата из глюкозы.
5.Укажите, где синтезируется:
| 1. печень; 2. почки; 3. надпочечники; 4. меланоциты; 5. щитовидная железа. | а) меланины; б) йодтиронины; в) адреналин; г) гомогентизиновая кислота. |
6.В синтезе тирозина участвует:
1) пиридоксальфосфат;
2) тетрагидрофолевая кислота;
3) НАДФН+(Н+);
4) НАДН+(Н+).
7.Катаболизм фенилаланина начинается с реакции:
1) декарбоксилирования;
2) трансаминирования;
3) дегидрирования;
4) гидроксилирования;
5) трансметилирования.
8. Предшественники и биологическая роль основных биогенных аминов
| Сер | Три | Тир | Глу | Гис | |
| Продкуты декарбоксилирования | |||||
| Биологически активные вещества | |||||
| Формулы | |||||
| Физиологическая роль |
9.Дополните схему недостающими компонентами:
Фен 1_____ 2_____ 3_____ 4_____ адреналин
10.Сравните ферменты:
| 1. фенилаланинтрансаминаза; 2. фенилаланингидроксилаза; 3. тирозингидроксилаза; 4. дофамингидроксилаза; 5. ДОФА-декарбоксилаза | а) необходим для синтеза тирозина; б) участвует в образовании ДОФА; в) катализирует синтез дофамина. |