ТЕМА: Вивчення властивостей білків і їх визначення.

Дослід 10.1 Визначення ізоелектричної точки білків.

Принцип методу.

Визначення ізоелектричної точки білків грунтується на здатності

білків легко осаджуватися під дією осаджувачів, які спричинюють

дегідратацію білків, і за значення рН середовища, що відповідає їх

ізоелектричній точці. Розчин казеїну та желатину (1%), 0.01, 0.1 і 1

моль\л розчини оцтової

кислоти, 0.1 моль\л розчин ацетату натрію, 96% етиловий спирт (чи 95%

ацетон), дистильована вода.

Обладнання.

Скляні палички, пробірки, градуйовані піпетки, штатив для пробірок.

Визначення ізоелектричної точки казеїну.

На відміну від інших білків, казеїн осаджується в ізоелектричній точці

без дегідратуючих засобів. Ізоелектрична точка казеїну відповідає

рН 4,7.

Таблиця 2.

Співвідношення компонентів реакційної суміші (мл) для визначення ізоелектричної точки казеїну.

вода СН3СООН (0.01 моль/л) СН3СООН (0.1 моль/л) Розчин казеіну (1%) рН середовища
8,4 0,6 ¾ 1,0 5,9
7,8 1,3 ¾ 1,0 5,6
8,8 ¾ 0,3 1,0 5,3
8,5 ¾ 0,5 1,0 5,0
8,0 ¾ 1,0 1,0 4,7
7,0 ¾ 2,0 1,0 4,4
8,0 ¾ 4,0 1,0 4,1
1,0 ¾ 8,0 1,0 3,8

Хід роботи.

Беруть вісім пробірок. У кожну наливають воду, розчини оцтової кислоти та казеїну в співвідношеннях, які наведені в таблиці 2. Ізоелектричну точку казеїну визначають за максимальним ступенем помутніння (рН 4.7).

Визначення ізоелектричиої точки желатину.

Хід роботи.

В шість пробірок додають відповідну кількість (мл) розчинів оцтової кислоти, ацетату натрію, дистильованої води та желатину (табл 3). Вміст кожної пробірки перемішують. Потім у всі пробірки повільно по стінці доливають по 2 мл спирту (ацетон). Через ЗО хв визначають ізоелектричну точку, тобто знаходять пробірку з максимальним ступенем помутніння розчину.

Таблиця 3.

Співвідношення компонентів реакційної суміші (мл) для визначення ізоелектричної точки желатину.

Вода СН3СООН (0,1 моль) СН3СООН (1моль/л) СН3СООНNа 0,1моль/л Розчину желатину (1%) рН середовища
3,8 0,8 ¾ 2,0 2,0 5,6
3,5 0,5 ¾ 2,0 2,0 5,3
3,0 1,0 ¾ 2,0 2,0 5,0
2,0 2,0 ¾ 2,0 2,0 4,7
¾ 4,0 ¾ 2,0 2,0 4,4
3,8 ¾ 0,8 2,0 2,0 4,1

Дослід 10.2 Якісна реакція на пептидні зв'язки з нінгідрином.

Принцип методу.В результаті взємодії a-амінокислоти з нінгідрином (трикетогідринденгідратом) утворюється забарвлена комплексна сполука. Під час нагрівання (до температури 70° С) a-амінокислоти окислюються нінгідрином та піддаються окисному дезамінуванню з утворенням альдегіду і С02, а нінгідрин відновлюється:

ТЕМА: Вивчення властивостей білків і їх визначення. - student2.ru

Відновлений нінгідрин, що конденсується з аміаком і окисленим нінгідрином, утворює сполуку, яка, енолізуючись, переходить у забарвлену форму синьо-фіолетового кольору:

ТЕМА: Вивчення властивостей білків і їх визначення. - student2.ru

За наявності органічних розчинників, на яких готують розчин нінгідрину (ацетон, етанол), можливий перебіг побічної реакції з утворенням сполуки, яка містить радикал (R.) амінокислоти:

ТЕМА: Вивчення властивостей білків і їх визначення. - student2.ru

Наявність радикалу амінокислоти в складі цієї сполуки зумовлює різне забарвлення (червоне, жовте, блакитне) сполук, які утворюються під час реакції амінокислот із нінгідрином.

Реакція з нінгідрином є специфічною для амінокислот, що містять

a-аміногрупу, та характерною для деяких карбонових і циклічних амінокислот. У реакції гліцину з нінгідрином утворюється комплексна сполука синьо-фіолетового забарвлення

.

А. Хід роботи.

Наши рекомендации