Микробиологическая диагностика иерсиниоза.

Леч., пед. ф-ты 2006

ЗАНЯТИЕ 17

Тема: Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии.

Микробиологическая диагностика иерсиниоза.

Цель: На основе знаний биологии шигелл, иерсиний и особенностей их взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию вызываемых ими заболеваний.

Знать:

1. Особенности биологии шигелл и иерсиний, определяющие их роль в инфекционной патологии человека.

2. Экологию шигелл и иерсиний, особенности эпидемиологии, патогенеза и иммунитета, вызываемых ими заболеваний.

3. Материал и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых шигеллами и иерсиниями.

4. Неспецифическую профилактику заболеваний, вызываемых шигеллами и иерсиниями.

5. Специфическую терапию заболеваний, вызываемых шигеллами.

Уметь:

1. Отобрать на средах первичного посева характерные для шигелл и иерсиний лактозонегативные колонии.

2. Изучить морфо-тинкториальные свойства и проверить чистоту выделенных копрокультур.

3. Учесть и оценить результаты изучения биохимических (среда Клиглера, «пестрый ряд») и антигенных свойств копрокультур с целью их идентификации.

4. Учесть и оценить результаты РПГА с сывороткой обследуемого с подозрением на хроническую дизентерию.

5. Заполнить бланки-направления и бланки-ответы из бак. лаборатории.

Контрольные вопросы:

1. Классификация и морфобиологические свойства шигелл и иерсиний.

2. Факторы вирулентности шигелл и иерсиний.

3. Особенности экологии, эпидемиологии и патогенеза заболеваний, вызываемых шигеллами и иерсиниями.

4. Материалы и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых шигеллами и иерсиниями.

5. Специфическая терапия бактериальной дизентерии.

6. Неспецифическая профилактика заболеваний, вызываемых шигеллами и иерсиниями.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИPC):

1. Провести бактериологическое исследование испражнений обследуемого с подозрением на бактериальную дизентерию:

1.1. Изучить результаты посева испражнений обследуемого на среде Эндо и Плоскирева, отобрать характерные для шигелл лактозонегативные колонии.

1.2. Изучить копрокультуру, выделенную от обследуемого, на среде Клиглера (демонстрация) и МПА, для чего:

- учесть биохимическую активность на среде Клиглера;

- приготовить фиксированный препарат из культуры на МПА, окрасить по Граму, промикроскопировать;

- поставить РА на стекле с сывороткой FNS и оценить полученные результаты.

1.3. Учесть и оценить результаты «пестрого ряда».

1.4. Учесть и оценить результаты РА с соответствующими поливалентными, типовыми, групповыми и видовыми сыворотками.

1.5. Учесть и оценить результаты определения антибиотикограммы диско-диффузионным методом.

1.6. Полученные результаты занести в протокол и сделать вывод; заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

2. Учесть и оценить результаты РПГА с сывороткой крови обследуемого с подозрением на хроническую форму дизентерии и эритроцитарными диагностикумами Флекснера и Зонне. Полученные результаты занести в протокол и сделать вывод; заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

3. Провести бактериологическое исследование испражнений обследуемого с подозрением на иерсиниозную инфекцию:

3.1. Изучить результаты посева испражнений обследуемого на среде Эндо и Плоскирева, отобрать характерные для иерсиний лактозонегативные колонии.

3.2. Изучить копрокультуру, выделенную от обследуемого, на среде Клиглера (демонстрация) и МПА, для чего:

- учесть биохимическую активность на среде Клиглера;

- приготовить фиксированный препарат из культуры на МПА, окрасить по Граму, промикроскопировать.

3.3. Учесть и оценить результаты «пестрого ряда».

3.4. Учесть и оценить результаты РА с диагностическими иерсиниозными сыворотками.

3.5. Полученные результаты занести в протокол и сделать вывод; заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

4. Охарактеризовать биопрепараты: диагностические агглютинирующие дизентерийные сыворотки: поливалентные, типовые, групповые, видовые; дизентерийный бактериофаг; спиртовая дизентерийная вакцина; эритроцитарные диагностикумы Флекснера и Зонне; дизентерин; агглютинирующие диагностические иерсиниозные сыворотки, указав, что они содержат, для чего и как применяются.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

1. Проведите бактериологическое исследование испражнений обследуемого с подозрением на бактериальную дизентерию:

1 этап. Испражнения забирают сразу после дефекации из судна без следов дезинфектантов или с помощью ректальной петли. При наличии в испражнениях слизисто-гнойных комочков их необходимо включать в отбираемые пробы. Наиболее эффективным является посев испражнений «у постели больного», т.е. сразу после их получения, но не позднее 2 ч. Посев осуществляется петлей или шпателем на чашки со средами Плоскирева, Эндо (Левина) и магниевую среду накопления.

На 2 этапе изучите результаты посева испражнений на среды Плоскирева и Эндо (Левина) и отберите колонии, характеристика которых совпадает с характеристикой предлагаемого возбудителя.

На средах Плоскирева, Эндо (Левина) шигеллы образуют бесцветные (лактозонегативные), прозрачные колонии, с глянцевой поверхностью и ровным краем. Характерные колонии отвивают на среду Клиглера и МПА, термостатируют при 37°С 18-24 часа.

На 3 этапе изучите результаты роста копрокультуры на среде Клиглера (демонстрация). Из копрокультуры, растущей на МПА, приготовьте мазки, окрасьте по Граму и промикроскопируйте. Поставьте с копрокультурой, растущей на МПА, РА на стекле с поливалентной сывороткой FNS. Полученные результаты занесите в протокол и сделайте вывод.

Культуры, ферментирующие глюкозу до кислоты или кислоты и газа (изменение цвета столбика среды, соответственно цвету индикатора и появление пузырьков газа) и не ферментирующие лактозу (цвет косяка не изменяется), подвергают дальнейшему изучению, как подозрительные на шигеллы. Для чего из культуры готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. С чистыми культурами грамотрицательных бактерий, расщепляющих глюкозу и не расщепляющих лактозу, поставить РА на стекле с поливалентной сывороткой FNS.

Для окончательной идентификации выделенной культуры производят посев на «пестрый ряд»: среды Гисса с глюкозой, маннитом, лактозой, сахарозой и МПБ для определения индола и H2S. Определение антибиотикограммы проводят диско-диффузионным методом.

На 4 этапе учтите и оцените результаты «пестрого ряда» (демонстрация). Для изучения антигенной структуры учтите результаты РА с адсорбированными видовыми сыворотками, а затем с соответствующими типовыми и групповыми сыворотками (см. антигенную структуру шигелл) (демонстрация). Определите антибиотикограмму выделенной копрокультуры.

По результатам всех этапов исследований сформулируйте окончательный ответ, указав при этом вид возбудителя и его отношение к лекарственным препаратам; заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

2. Проведите серологические исследования по обнаружению антител к предлагаемому возбудителю в сыворотке крови обследуемогоо с подозрением на хроническую форму дизентерии:

Учтите и оцените результаты РНГА с эритроцитарными диагностикумами Флекснера и Зонне (см. занятие № 10). Полученные результаты занесите в протокол и сделайте вывод; заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

Постановка: В лунках пластмассовых пластин готовят два ряда последовательных разведений сыворотки обследуемого и вносят эритроцитарные диагностикумы Флекснера и Зонне. Параллельно ставят соответствующие контроли.

Оценка: сопоставляют титр РНГА с диагностическими титрами, которые составляют в РНГА с диагностикумом Флекснера 1/200 и с диагностикумом Зонне 1/100.

3. Проведите бактериологическое исследование испражнений обследуемого с подозрением на иерсиниозную инфекцию:

1 этап. При диагностике иерсиниозных инфекций параллельно с посевом на плотную питательную среду (Эндо) исследуемый материал засевают на среду накопления (фосфатно-буферную среду или др.).

Посевы на среде накопления культивируют при t° +4-5 до 30 дней, периодически высевая через каждые 3-5 дней на плотные среды. Иерсинии при низкой t° размножаются в отличие от остальных энтеробактерий. Наиболее часто культуры иерсиний выделяют после 7 суток.

На 2 этапеизучите результаты посева испражнений обследуемого на среде Эндо, дайте характеристику колоний и отберите те из них (не менее 3-х), характеристика которых совпадает с характеристикой колоний предполагаемого возбудителя.

На среде Эндо через 24 ч иерсинии видов Y. enteroсоlitica, Y. pseudotuberculosis вырастают в виде мелких (0,3-0,5 мм), выпуклых, гладких лактозонегативных колоний; к 40-48 ч они увеличиваются в размерах, приобретая розовый оттенок. Характерные колонии отсевают на дифференциально-диагнос-тическую среду Клиглера (Ресселя) и МПА.

На 3 этапе оцените биохимическую активность выделенных культур на среде Клиглера, приготовьте фиксированный препарат из тех же культур на МПА, окрасьте по Граму и промикроскопируйте.

Иерсинии при росте на среде Клиглера не изменяют цвет скошенной части, т. к. не ферментируют лактозу и изменяет цвет столбика, т. к. ферментируют глюкозу до кислоты без газа. Иерсинии – грамотрицательные, мелкие, овоидные, характеризующие полиморфизмом, палочки.

На 4 этапе учтите и оцените результаты «пестрого ряда» (демонстрация). Для идентификации и дифференциации Y. enteroсоlitica, Y. pseudotuberculosis используйте набор тестов, представленных в таблице:

№ пп Тесты Y. enteroсоlitica Y. pseudotuberculоsis
1. Мочевина + +
2. Фенилаланин - -
3. Сахароза + -
4. Рамноза - +
5. Арабиноза + +
6. Маннит + +
7. Подвижность: 37° 22° - + - +

Серологической идентификации подлежат культуры, отнесенные по биохимическим свойствам к видам Y. enteroсоlitica и Y. pseudotuberculosis. Ее проводят в РА на стекле по общепринятой методике (см. занятие № 10) с диагностическими сыворотками к Y. enteroсоlitica наиболее распространенных сероваров (03, 05, 06, 08, 09) и к Y. pseudotuberculosis (поливалентные к сероварам I-V, а затем моновалентные).

На основании полученных результатов определите видовую принадлежность выделенной культуры, занесите результаты в протокол, заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

4. Ознакомьтесь и опишите в протоколе биопрепараты: агглютинирующие видовые, групповые, типовые, поливалентные сыворотки; дизентерийный бактериофаг; спиртовая дизентерийная вакцина; эритроцитарные диагностикумы Флекснера и Зонне; дизентерин; агглютинирующие диагностические иерсиниозные сыворотки. Укажите, что они содержат, для чего и как применяются.

Вопросы для самоконтроля:

1. Обоснуйте выбор сред для первичного посева испражнений с целью диагностики бактериальной дизентерии и иерсиниоза.

2. Назовите виды шигелл, имеющие наибольшее эпидемиологическое значение на современном этапе.

3. Обоснуйте путь передачи инфекций при иерсиниозах, исходя из экологии возбудителя.

4. Почему бактериальную дизентерию называют болезнью «грязных рук»; возможно ли назвать инфекции, вызываемые иерсиниями, болезнью «грязных рук». Обоснуйте.

5. Обоснуйте выбор методов микробиологической диагностики острой и хронической бактериальной дизентерии.

6. Назовите время выдачи положительного ответа из бак. лаборатории при подозрении на бактериальную дизентерию.

7. Какие свойства лежат в основе дифференциации и идентификации шигелл, иерсиний.

8. Меры неспецифической профилактики бактериальной дизентерии и иерсиниозов.

Литература:

Учебники:

1. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. – М.: ООО «МИА», 2002. – С. 385-389, 401, 403-406.

2. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 357-360, 365, 369-371.

Лекции по микробиологии.

Тесты.

Наши рекомендации