Определение общего числа микробов

Общие положения.

В соответствии с учебным планом студент выполняет пять лабораторных работ и шесть практических работ. Их цель – активное осмысление и проработка знаний и умений в области микробиологии, санитарии и гигиены питания; формирование умения и готовности использовать имеющиеся знания в дальнейшей профессиональной и повседневной деятельности.

Студенты самостоятельно подходят к выбору способов выполнения лабораторно-практической работы, используют как теоретические знания, полученные на занятиях, так и свой жизненный опыт.

Форма организации работ фронтально-индивидуальная - все студенты выполняют одновременно одну и ту же работу.

Методические рекомендации по проведению практических работ включают в себя:

ü № практической работы;

ü название работы;

ü теоретические сведения;

ü цель работы;

ü упорядоченное изложение хода работы;

ü проблемные задания и контрольные вопросы;

ü список литературы.

Перечень практических работ.

№	Наименование работы	Количество часов
1.	Лабораторная работа № 1 «Ознакомление с оборудованием и принадлежностями микробиологической лаборатории. Устройство микроскопа правила работы с ним».	2 ч.
2.	Лабораторная работа № 2 «Способы приготовления препаратов для микроскопирования.	2 ч.
3.	Лабораторная работа № 3 «Изучение под микроскопом морфологии бактерий, дрожжей и микроскопических грибов»	2 ч.
4.	Лабораторная работа № 4 . «Санитарно-бактериологическое исследование смывов с рук, одежды, инвентаря, оборудования »	2 ч.
5.	Лабораторная работа № 5 . «Правила приготовления дезинфицирующих растворов »	2 ч.
6.	Практическая работа № 1 «Микробиология основных пищевых продуктов»	2 ч.
7.	Практическая работа № 2: «Пищевые отравления и инфекционные заболевания, гельминтозы»	2 ч.
8.	Практическая работа № 3: «Санитарные требования к устройству и содержанию предприятий общественного питания»	2 ч.
9.	Практическая работа № 4: «Санитарные требования к транспортировке и хранению пищевых продуктов»	2 ч.
10.	Практическая работа № 5: «Санитарные требования к обработке пищевых продуктов».	2 ч.
11.	Практическая работа № 6: «Санитарно-эпидемиологический надзор и санитарно-эпидемиологическое законодательство»	2 ч.

Рекомендации по оформлению отчёта.

Отчёт должен быть выполнен студентом на листах формата А-4 в напечатанном виде. Рамка: поля: левое -2 см.; правое-0,5 см.; верхнее- 0.5 см.; нижнее - 0,5 см. Оборотная сторона листа не заполняется. Проставляется номер листа. Отчёт студента должен содержать :

• Тему работы;
• цель работы;
• форму организации работы;
• предварительную работу студента;
• порядок выполнения работы;
• описание хода работы (ответы на вопросы)

Лабораторная работа № 1

«Ознакомление с оборудованием и принадлежностями микробиологической лаборатории. Устройство микроскопа правила работы с ним».

Цель: ознакомиться с оборудованием и принадлежностями микробиологической лаборатории: термостат, сушильный шкаф, автоклав и весы, чашки Петри, препарировальные иглы.

ознакомиться со строением микроскопа и сформировать навыки практической работы с увеличительным прибором.

Оборудование: термостат, сушильный шкаф, автоклав и весы, чашки Петри, препоравальные иглы; микроскоп, бумажные салфетки, листья герани или другого растения.

Методические рекомендации:

Термостат – прибор для поддержания постоянства температуры – применяют для выращивания культур микроорганизмов. Он представляет собой шкаф, в котором поддерживается в течение длительного времени определенная температура.

Сушильный шкаф используют для стерилизации сухим жаром посуды, инвентаря и т.п. Стерилизуемый материал предварительно заворачивают в бумагу и помещаю в шкаф так, чтобы он не касался стенок. Стерилизацию проводят при t=160 °С в течение 2 ч. Простерилизованный материал вынимают после отключения и охлаждения шкафа.

Автоклав используют для стерилизации посуды и питательных сред паром под давлением. Это герметичный котел с двойными металлическими стенками и крышкой. Он снабжен манометром, предохранительными клапанами и краном для спуска воды и пара. Применяют для стерилизации питательных сред под давлением 0,5 – 1,0 МПа в течение 20-30 мин.

Весы в лаборатории необходимо иметь технические и аналитические. Технические имеют точность до 0,01 г; аналитические – до 0,001г.

Чашки Петри применяются для выращивания культуры микроорганизмов на плотных питательных средах.

При помощи пипеток проводят пересев жидких культур микроорганизмов.

Приспособления в микробиологической лаборатории следующие: бактериологические петли и препарировальные иглы, шпатели, пипетки, штативы для пипеток и пробирок, карандаш по стеклу, набор ершей для мытья посуды.

Пробирки и колбы используют для хранения питательных сред и выращивания культур микроорганизмов.

Шпатели используют для размазывания жидких культур на поверхности плотной питательной среды.

Чашки Петри, пипетки, шпатели, пробирки, колбы заворачивают в бумагу, закладывают в сушильный шкаф, не касаясь стенок, и стерилизуют при температуре 160 С в течение 2 ч. Петли и иглы стерилизуют, прокаливая их над пламенем.

Микроскоп – сложный оптический прибор, который используется для изучения внутреннего строения органов и тканей. В микроскопе различают три системы: оптическую, осветительную, механическую. Оптическая система состоит из сменных окуляров и объективов, соединенных полой трубкой – тубусом. Окуляр вставляется в отверстие тубуса, объективы ввинчиваются в особое подвижное соединение – револьвер.

Механическая система представлена подставкой, штативом с винтами. Используя винты, можно поднимать и опускать тубус, и следовательно, добиваться резкого изображения изучаемого предмета. В центре предметного столика есть отверстие, через которое направляется поток света к объекту. При помощи зажимов предметное стекло плотно прижимается к предметному столику.

Оптическая часть микроскопа

Состоит из осветительной и наблюдательной систем. Осветительная система равномерно освещает поля зрения. Наблюдательная система предназначена для увеличения изображения наблюдаемого объекта. Объективы составляют самую важную, наиболее ценную и хрупкую часть микроскопа. От них зависит увеличение, разрешающая способность и качество изображения. Они представляют собой систему взаимно центрированных линз, заключенных в металлическую оправу. Окуляр микроскопа состоит из двух линз: глазной (верхней) и собирательной (нижней). Между линзами находится диафрагма. Боковые лучи диафрагма задерживает, близкие к оптической оси пропускает, что усиливает контрастность изображения. Назначение окуляра состоит в увеличении изображения, которое дает объектив. Окуляры имеют собственное увеличение ×5, ×10, ×12.5, ×16 и ×20, что указано на оправе. Осветительная система состоит из конденсора с диафрагмой, которая регулирует поток света, направленного к объекту.

Правила работы с сухими объективами.

Приготовленный препарат помещают на предметный столик и закрепляют зажимом. С помощью сухого объектива с увеличением ×10 просматривают несколько полей зрения. Передвигают предметный столик боковыми винтами. Нужный для исследования участок препарата устанавливают в центре поля зрения. Поднимают тубус и вращением револьвера переводят объектив с увеличением ×40, наблюдая сбоку, макрометрическим винтом снова опускают тубус с объективом почти до соприкосновения с препаратом. Смотрят в окуляр, очень медленно поднимают тубус до появления контуров изображения. Точную фокусировку производят с помощью микрометрического винта, вращая его в ту или другую сторону, но не более чем на один полный оборот. Если при вращении микрометрического винта чувствуется сопротивление, значит, ход его пройден до конца. В этом случае поворачивают винт на один-два полных оборота в обратную сторону, снова находят изображение при помощи макрометрического винта и переходят к работе с микрометрическим винтом. Полезно приучить себя при микроскопировании держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно, так как при этом меньше утомляется зрение.

1. Оборудование и принадлежности

Порядок выполнения работы:

1. Рассмотреть аппараты, посуду, приспособления и ознакомиться с их устройством и назначением.
2. Практически освоить приемы работы с аппаратурой, посудой и приспособлениями
3. Зарисовать схематично термостат, сушильный шкаф, автоклав, чашки Петри, бактериологическую петлю и препорировальную иглу, подписать их составные части.
4. Определить назначение каждого аппарата и приспособления.

2. Устройство микроскопа

Порядок выполнения работы:

1. Установить микроскоп в удобное положение перед собой так, чтобы справа можно было расположить тетрадь.

2. Чистой х.б. салфеткой протереть линзы окуляра, объектива, конденсора и зеркало.

3. Установить окуляр и объектив.

4. Проверить, открыта ли диафрагма.

5. Вращая макровинт, установить тубус в таком положении, чтобы расстояние от линзы до объекта было не более 1 см.

6. Поворачивая зеркало, добиться равномерного освещения поля зрения.

7. Поместить препарат на предметный столик микроскопа и, глядя сбоку, опускают объектив при помощи винта до тех пор, пока расстояние не станет 4-5 мм.

8. Медленно поворачивая макровинт, добиться резкого изображения объекта.

9. Закончив работу, чистой х.б. салфеткой протереть все линзы, микроскоп убрать в специальный футляр.

10. Зарисовать микроскоп и подписать его части.

Записать вывод:

Лабораторная работа № 2

«Способы приготовления препаратов для микроскопирования.

Цель работы:

Приборы и посуда:бактериологическая петля, покровное стекло, стекло с луночкой, предметной стекло.

Материалы и реактивы: исследуемый материал, мясо-пептонный бульон, вазелиновое масло.

1. Теоретические сведения.

1. Практическая часть.

Порядок выполнения работы:

Для изучения микроорганизмов готовят препараты висячей и раздавленной капли.

1. Приготовление висячей капли.

Приготовить суспензию из исследуемого материала и мясо-пептонного бульона. Бактериологической петлей в центр покровного стекла нанести небольшую каплю приготовленной суспензии.

Взять специальное стекло с луночкой в центре и смазать ее края вазелиновым маслом. Луночкой предметного стекла накрыть каплю исследуемого материала так, чтобы капля находилась в центре луночки. Предметное стекло слегка прижать и быстро перевернуть его. При правильном приготовлении препарата капля свисает в луночку.

1. Приготовление раздавленной капли.

Каплю приготовленной суспензии нанести на предметное стекло. Сверху предметного стекла положить покровное.

1. Записать вывод.
2. Контрольные вопросы.

Лабораторная работа № 3

«Изучение под микроскопом морфологии бактерий, дрожжей и микроскопических грибов»

Цель работы:

Изучить формы, строение и размножение клетки бактерий.

Изучить формы, строение и размножение клетки дрожжей.

Изучить формы, строение и размножение клетки плесневых грибов.

Оборудование:

Окрашенные препараты бактерий (заранее приготовленные).

Суспензия дрожжей (разных видов). Биологический микроскоп. Предметные и покровные стекла. Плесневые грибы (оидиум, мукор, пенициллиум аспергиллюс, альтернария), заранее выращенные на сусло-агаре в чашках Петри.

Ход работы:

1. Теоретические сведения.

Морфология микроорганизмов – это наука, изучающая их форму, строение, способы передвижения и размножения. Микроорганизмы различаются по внешнему виду и по размерам: от десятков и сотен микрометров до десятых долей микрометра. Строение клеток микроорганизмов так же различно, в связи с чем они относятся к различным систематическим группам.

Все живые существа на Земле, имеющие клеточное строение, делятся на два надцарства: прокариоты и эукариоты. К прокариотам относится только одно царство – бактерии, к которым принадлежат и актиномицеты. К эукариотам относятся три царства: 1) животные, 2) растения, 3) грибы, в том числе микроскопические мицелиальные грибы, включая дрожжи. Вирусы, не имеющие клеточного строения, входят в третье надцарство – акариоты.

Деление живых организмов на прокариоты и эукариоты основано главным образом на особенностях строения их ядерного аппарата. У прокариот обособленное ядро в клетке отсутствует. Ядерный аппарат их представлен молекулой ДНК, находящейся непосредственно в цитоплазме. У эукариот имеется типичное ядро, отделенное от цитоплазмы двойной ядерной мембранной. Внутри ядра заключена ДНК. Через ДНК наследственные признаки клетки передаются потомству.

1. Практическая часть.

Задание. Микроскопировать окрашенные препараты бактерий, изучить их основные формы. Результаты микроскопирования зарисовать в отчёт.

По результатам изучения письменно ответить на вопросы:

1. Какую форму имеют клетки бактерий?

2. Каковы размеры бактерий?

3. Какие основные виды бактерий?

Задание . Микроскопировать дрожжи в живом виде.

Для изучения морфологии дрожжей путем микроскопирования препарата «раздавленная капля»,ознакомиться с формами (овальные, круглые, лимонообразные и др.), рассмотреть строение клетки и способы размножения). Результаты микроскопирования зарисовать в отчёт.

По результатам изучения ответить на вопросы:

1. Каковы морфологические признаки дрожжей?

2. Какие известны способы размножения дрожжей?

Задание. Микроскопировать плесневые грибы в живом виде в препарате «раздавленная капля», изучить строение мицелия, познакомиться со способами бесполого образования спор. Познакомиться с ключом для определения плесневых грибов. Результаты микроскопирования зарисовать в отчёт.

По результатам изучения ответить на вопросы:

1. Каково строение тела плесневых грибов?

2. Приведите примеры грибов одноклеточных, многоклеточных, а также грибов с одно- и многоклеточными конидиями?

3. Каковы способы размножения грибов?

4. Каково строение органов бесполого и полового размножения грибов?

Вывод:

Лабораторная работа № 4 .

«Санитарно-бактериологическое исследование смывов с рук, одежды, инвентаря, оборудования »

Цель занятия: Освоить метод смыва для исследования санитарного состояния объектов (столы, руки студентов, термостат, шкаф для посуды)

Приборы и посуда: термостат, чашки Петри, ватные тампоны или салфетки, пипетка.

Материалы и реактивы: мясопептонный агар, изотонический раствор хлорида натрия.

Порядок выполнения работы:

Теоретические сведения.

В целях осуществления постоянного санитарно-бактериологического контроля на предприятиях общественного питания за поверхностью объектов, контактирующих с продукцией, применяются различные показатели. Например, определяют общую бактериальную обсемененность объекта (руки работников, спецодежда, оборудование и т.п.), наличие санитарно-показательной микрофлоры (БГКП, энтерококков), а также в отдельных случаях наличие на поверхности исследуемого объекта условно-патогенной и патогенной микрофлоры, характерной для данного производства (при использовании мясного сырья – микроорганизмов рода Salmonella, в кондитерском производстве - Staphylococcus). Общую бактериальную обсемененность объекта определяют количественно (обычно в расчёте на 1 см² поверхности-микробное число) а также, в отдельных случаях – качественно.

Данные показатели определяются как в плановом порядке в лабораториях производства и работниками СЭС, так и внепланово по эпидемическим показаниям.

Отбор проб для санитарно-микробиологического исследования предметов обихода и оборудования проводится с помощью следующих методов:

• Смывов (тампонами и салфетками)
• Отпечатков (контактный метод)
• Агаровой заливки

Бактериальное загрязнение определяют путем изучения микрофлоры смывов, сделанных с рук и поверхностей исследуемых объектов. Смывы с оборудования и инвентаря производят перед началом работы либо после санитарной обработки в санитарные дни.

Смывы с рук следует производить перед началом работы, после пользования туалетом. Взятие смывов с рук персонала, спецодежды, инвентаря и оборудования производят с помощью стерильных ватных тампонов на стеклянных (лучше металлических) палочках или марлевых салфеточек размером 5 х 5 см, завернутых в бумажные пакеты.

Непосредственно перед взятием смыва увлажняют тампон или салфетку стерильной 0,1 %-ной пептонной водой или физиологическим раствором, предварительно разлитым по 2 мл в стерильные пробирки. Салфетки при этом захватывают прокаленным пинцетом. После взятия смыва тампон или салфетку помещают в ту же пробирку, из которой проводили увлажнение. При контроле жирных поверхностей пользуются сухими тампонами или салфетками.

Смывы с крупного оборудования и инвентаря берут с поверхности в 100 см2 в разных местах исследуемого предмета. Для ограничения поверхности используют шаблон (трафарет) площадью 25 см2.При взятии смывов с рук протирают тампоном ладони обеих рук, проводя не менее 5 раз по одной ладони и пальцам, затем протирают участки между пальцами, ногти и под ногтями.

При взятии смывов с санитарной одежды протирают 4 площадки по 25 см2: нижнюю часть каждого рукава и две площадки с верхней и передней части спецовки. Смывы исследуют на обнаружение бактерий группы кишечной палочки и определение наличия коагулазоположительных стафилококков.

Практическая часть.

Материалом для посева при исследовании смывов является смывная жидкость, используемая для увлажнения тампона или марлевой салфетки.

Определение общего числа микробов.

К 2 мл изотонического раствора хлорида натрия, используемого для увлажнения тампона, прибавить еще 8 мл.

Тампон тщательно отмыть, встряхивая. Полученное исходное разведение 1 : 10 внести в чашки Петри по 1 мл, залить расплавленным, и остуженным до 45 °С мясопептонным агаром.

Чашки Петри поместить в термостат, где поддерживается температура 37 °С, на 48 ч.

По истечении этого времени подсчитать количество выросших колоний.