Влияние температуры на активность ферментов

Принцип метода. Ферменты (энзимы) – специфические белки всех живых клеток, играющие роль биологических катализаторов. Свойство ферментов разрушаться при кипячении является характерной особенностью, отличающей ферменты от других катализаторов. Ферменты термолабильны и проявляют оптимальную активность при температуре 35-45˚С. При повышении температуры свыше 50˚С их активность снижается, а затем происходит разрушение структуры молекулы фермента.

Реактивы:

1. слюна 1:10;

2. 1 % раствор крахмала;

3. раствор Люголя.

Ход работы. В 4 пробирки наливают по 1 мл разведенной слюны. Пометают пробирки в разные температурные условия;

1 пробирка - в лед (0°С);

2 пробирка - оставляют при комнатной температуре (20°С);

3 пробирка - и термостат при 37°С;

4 пробирка - в кипящую водяную баню (100°С).

Через 5 минут во все пробирки добавляют по 1 мл раствора крахмала и оставляют их на 10 минут для инкубации в тех же условиях. После инкубации результат действия амилазы на крахмал оценивается с помощью качественной реакции крахмала с йодом: в присутствии крахмала развивается синяя окраска, а при его отсутствии синей окраски не появляется, а остается желтая окраска йода. Таким образом, после инкубация все пробирки охлаждают под краном и добавляют по 2 капли раствора Люголя (содержит йод). Отмечают окраску содержимого пробирок.

Результат:

1 пробирка:_____________________________________________

2 пробирка:_____________________________________________

3 пробирка:_____________________________________________

4 пробирка:_____________________________________________

Вывод: _____

____________________________________________________

Влияние рН среды на активность ферментов

Принцип метода. Для амилазы слюны оптимальное значение рН среды 6,8. В кислой и щелочной среде активность амилазы снижается, и расщепление крахмала идет до стадии декстринов, которые с раствором Люголя дают красно-фиолетовую или красно-бурую окраску.

Реактивы:

1. Слюна, раствор 1:10;

2. 1 % раствор крахмала;

3. 1 % Na₂HPO₄;

4. 1 % NaH₂PO₄;

5. раствор Люголя.

Ход работы. В 3 пробирки наливают по 1 мл разведенной слюны. Затем создают среду с различным рН:

пробирка №1 - добавляют 1 мл дистиллированной воды (нейтральная среда);

пробирка №2 - добавляют 1 мл Na₂HPO₄ (щелочная среда);

пробирка №3 - добавляю 1 мл NaH₂PO₄ (кислая среда).

После этого в каждую пробирку добавляют по 1 мл раствора крахмала. Зятем все пробирки помешают в термостат (37°С) на 10 минут. После инкубации пробирки охлаждают. Содержимое второй пробирки нейтрализуют добавлением 2 мл NaH₂PO₄, так как крахмал в щелочной среде не дает окраска с йодом. Результат оценивается, затем добавить во все пробирки добавляют по 2 капли раствора Люголя. Отмечают окраску содержимого пробирок.

Результат:

Пробирка № 1_____________________________________________________

Пробирка № 2_____________________________________________________

Пробирка № 3_____________________________________________________

Пробирка № 4_____________________________________________________

Вывод: ______

_______________________________________

Специфичность действия амилазы и сахаразы

Принцип метода. Специфичностью называется способность ферментов ускорять отдельные химические реакции только между строго определенными веществами. Результат действия ферментов амилазы и сахаразы на субстраты крахмал и сахарозу оценивается с помощью качественной реакции Фелинга. Крахмал и сахароза не имеют свободных полуацетальных гидроксилов и поэтому не восстанавливают Cu⁺² сульфата меди (реактив Фелинга I), которые придают раствору голубую окраску, до Сu₂О (осадок кирпично-красного цвета), то есть дают отрицательную реакцию Фелинга, а продукты расщепления крахмала и сахарозы (мальтоза и глюкоза) имеют свободные полуацетальные гидроксилы и дают положительную реакцию Фелинга.

Реактивы:

1. 1 % раствор крахмала;

2. 2 % раствор сахарозы;

3. слюна 1:10;

4. сахараза из дрожжей;

5. 10 % NaOH;

6. раствор Люголя.

Ход работы.

Берут 4 пробирки и вносят реактивы по следующей схеме.

1 пробирка - 2 мл сахарозы и 0.5 мл разведенной слюны;

2 пробирка - 2 мл сахарозы и 0.5 мл сахаразы;

3 пробирка - 2 мл крахмала и 0.5 мл разведенного слюны;

4 пробирка - 2 мл крахмала и 0.5 мл сахаразы.

Содержимое пробирок хорошо перемешивают и ставят на 10 минут в термостат (37°С). После инкубации во все пробирки добавляют по 5 капель реактива Фелинга I, по 5 капель реактива Фелинга II и ставят в кипящую баню на 2 минуты. Отмечают изменения окраски.

Результат:

Пробирка № 1_____________________________________________________

Пробирка № 2_____________________________________________________

Пробирка № 3_____________________________________________________

Пробирка № 4_____________________________________________________

Вывод: _____

____________________________________________________

Лабораторная работа № 6