Гистологическое исследование эндометрия

Наиболее достоверным является гистологический метод исследования эн­дометрия, ибо морфофункциональное состояние эндометрия определяется действием стероидных гормонов, в частности, эстрогены вызывают пролифе­рацию, а прогестерон — его секреторные преобразования.

Поскольку эндометрий является наиболее специализированной тканью с особой, биологически обусловленной чувствительностью к стероидным гор­монам, то исследование его чрезвычайно важно для оценки эндокринного ста­туса женщины.

Гистологическое исследование эндометрия, как и других патологически измененных тканей при гинекологических заболеваниях, возможно только при умелом взятии материала для исследования, с учетом особенностей мен­струального цикла и клинической картины заболевания.

58 .... . ..- i„.„ru-.'.„..;»,_il№,. Эндокринная гинекология

При полном диагностическом выскабливании матки необходимо прово­дить соскобы раздельно: сначала — цервикального канала, а затем — полос­ти матки, и материал фиксировать в двух различных емкостях. , Соскоб лучше всего собирать на чашку Петри, дно которой увлажнено фи­зиологическим раствором, а затем фиксировать в 10% формалине.

При кровотечении, особенно в климактерическом периоде или менопаузе, желательно иметь для исследования соскоб из трубных углов матки, так как именно там чаще локализуются полипозные разрастания эндометрия, кото­рые имеют высокий риск малигнизации. Несмотря на обилие соскоба, он дол­жен быть отправлен на исследование весь.

Хорошо зарекомендовал себя также метод аспирационной биопсии эндо­метрия с применением пипелей, как менее травматичный и позволяющий по­лучать для гистологического исследования минимально поврежденный эндо­метрий. Однако, учитывая несколько меньшую диагностическую ценность этого метода по сравнению с раздельным кюретажем матки, он реже исполь­зуется в скрининговых программах, а чаще для мониторинга состояния эндо­метрия на фоне гормональной терапии.

При необходимости изучения влияния на эндометрий гормонов яичников, в том числе при выяснении причин бесплодия у женщин, или для контроля ре­зультатов гормонотерапии берутся также штриховые соскобы, или цуги. Необ­ходимо, чтобы в полоску штрихового соскоба попала слизистая сверху донизу. Для исследования достаточно иметь 1-2 полоски эндометрия. При маточных кровотечениях эндометрий должен быть взят с поверхности всех стенок матки.

Для формирования правильного гистологического заключения патологоа­натом должен быть обязательно информирован о времени выскабливания. Соскоб берется на 5-10-й либо на 21-25-й день (при 28-дневном менструаль­ном цикле), т.е. перед месячными, при подозрении на недостаточность функ­ции желтого тела или ановуляцию. При маточном кровотечении целесообраз­но проводить выскабливание в самом начале кровотечения, когда эндометрий практически полностью сохранен, или, если это не было сделано, то обяза­тельно указывать в направлении на гистологическое исследование длитель­ность кровотечения. При аменорее (если исключена беременность) показаны повторные штриховые соскобы на протяжении 3-4 недель с промежутками через 1 неделю.

Для оценки функционального состояния эндокринного статуса женщин необходимо учитывать морфологические критерии (параметры), позволяю­щие установить функцию эндометрия в динамике менструального цикла, т.е. в фолликулиновой (табл. 8) и лютеиновой (табл. 9) фазах. К ним относятся, митозы эпителия желез эндометрия и стромы, вакуолизация эпителия желез эндометрия, секреция желез эндометрия, диаметр просвета железы эндомет­рия, псевдостратификация и особенность эпителия желез эндометрия, нали­чие клубочков спиралевидных артерий, предецидуальная реакция, отек стро­мы эндометрия, наличие апоптозных телец, лимфоцитов, нейтрофилов.

Глава 2. Методы диагностики функционального состояния репродуктивной системы 59

Таблица 8 Морфологические особенности эндометрия в пролиферативной фазе

Признаки	Дни менструального цикла
Митозы - эпителий			>1	>1	>1-2	<2
Митозы - строма		>1			<2	<2	<2	<2
Вакуоли									0-1	0-1
Секреция
Полость (просвет желез -Д), ц			<50	<50	<50	<50
Псевдостратификация	<1	<1		<2	<2	<2
Эпителий желез	Ц	Ц	Ц	Ц	Ц	Ц	Ц	ВП	ВП	ВП	ВП
Спиралевидные сосуды эндометрия								1-2	1-2	1-2
Пропорция желез в строме			1/4	1/4
Предецидуальная реакция
Отек	0>1	>1						<1	<1
Апоптозные тельца
Лимфоциты

Примечание: Ц — цилиндрический эпителий; ВП — высокий призматический эпителий

Таблица 9 Морфологические особенности эндометрия в лютеиновой фазе

Признаки

Дни менструального цикла

Митозы - эпителий

1-2

1-2

Митозы - строма

<1

0-1

0-1

0-1

0-1

0-1

Вакуоли

1-2

0-1

Секреция

1-2

>3

Полость (просвет желез - Д), ц

>50

>50

>50

>100

>150

>180

>180

Псевдостратификация

0-1

Эпителий желез

к,ц

ц

П

к

К

К

К

К

К

К

К

К

Спиралевидные сосуды эндометрия

единичные

увеличивающиеся клубочки

клубочки

Пропорция желез в строме

<1/4

<1/4

<1/4

<1/4

1/4

1/4

1/4

«1/4-1/3

1/3

Предецидуальная реакция

0-1 (вокруг сосудов)

1-2

>2-3

Отек

<2

Апоптозные тельца

>4

Лимфоциты

Примечание: П — призматический эпителий; К — кубический эпителий; Ц — цилиндрический эпителий

При этом в фолликулиновой фазе важно учитывать динамику таких крите­риев, как митозы эпителия желез и стромальных клеток, псевдостратифика­ция эпителия желез, отек стромы, обусловленные эстрогенным влиянием.

Для оценки полноценности лютеиновой фазы важную роль играют изме­нения и рост желез, наличие секреции желез эндометрия; рост клубочков спи­ралевидных артерий, предецидуальная реакция стромы эндометрия, появле­ние апоптозных телец, которые учитываются ранговым методом по балльной системе от 0 до 3-х, где 0 — нет изменений, 1 — начальные изменения, 2 — изменения, захватывающие до 50% ткани эндометрия, 3 — > 50% ткани эндо­метрия (см. табл. 9).

60 Эндокринная гинекология

Циклические изменения, вызываемые половыми гормонами яичников, наиболее выражены в функциональном слое эндометрия. Базальный же слой эндометрия существенных изменений в цикле не претерпевает и в норме не отторгается во время менструации: в базальном слое локализуются стволовые клетки, которые обеспечивают регенерацию эпителиальных структур эндоме­трия после каждого менструального кровотечения.

Циклические превращения функционального слоя эндометрия протекают соответственно яичниковому циклу в несколько последовательных стадий (рис. 4).

Примечание: Р — ранняя, С — средняя, П — поздняя.

Рисунок 4. Гистологические изменения в зависимости от фазы меструального цикла

(SopelakV., 1997)

Глава 2. Методы диагностики функционального состояния репродуктивной системы 61

Как известно, различают I фазу — фазу пролиферации (ранняя стадия — 5-7-й день, средняя — 8-10-й день, поздняя —10-14-й день) и II фазу, фазу секреции (ранняя —15-18-й день, первые признаки секреторных превращений; средняя — 19-23-й день, наиболее выраженная секреция; поздняя — 24-26-й день, начинающийся регресс, регресс с ишемией — 26-27-й день), III фазу, фазу кровоте­чения или менструации (десквамация — 28-2-й день и регенерация — 3-4-й день).

В норме фаза пролиферации продолжается 14 дней. Возникающие в эту фазу изменения в эндометрии обусловлены действием нарастающего количе­ства эстрогенов, секретируемых растущим и созревающим фолликулом (Хмельницкий O.K., 2000).

В ранней стадии фазы пролиферации (5-7-й день цикла) эндометрий тон­кий, деление функционального слоя на зоны отсутствует, поверхность его вы­стлана уплощенным цилиндрическим эпителием, имеющим кубическую фор­му. Железистые крипты в виде прямых или слегка извитых трубочек с узким просветом, на поперечных срезах имеют круглую или овальную форму. Эпи­телий железистых крипт призматический, ядра овальные, расположены у основания, хорошо окрашиваются, апикальный край эпителиальных клеток в световом микроскопе представляется ровным, четко очерченным.

В средней стадии фазы пролиферации нарастает активность щелочной фосфатазы в эндометрии. В строме отмечаются явления отека, разрыхления. Цитоплазма стромальных клеток становится более различима, ядра их выяв­ляются довольно отчетливо, по сравнению с ранней стадией нарастает число митозов. Сосуды стромы по-прежнему единичны, с тонкими стенками.

В поздней стадии фазы пролиферации (11-14-й день цикла) отмечается не­которое утолщение функционального слоя, однако деление на зоны еще от­сутствует. Поверхность эндометрия выстлана высоким цилиндрическим эпи­телием. Железистые структуры приобретают более извитую, штопорообраз-ную форму, более тесно прилежат друг к другу, чем в предыдущих стадиях. Эпителий железистых крипт — высокий цилиндрический. Апикальные края его представляются при световой микроскопии ровными, четкими. При элек­тронной же микроскопии обнаруживаются микроворсинки, представляющие собой плотные цитоплазматические отростки, покрытые плазматической мембраной. Увеличиваясь в размерах, они создают дополнительную площадь для распределения ферментов. Как раз в эту стадию активность щелочной фосфатазы достигает своего максимума (Топчиева О.И. и соавт., 1978).

В конце фазы пролиферации при светооптическом исследовании обнару­живаются мелкие субнуклеарные вакуоли, в которых определяются мелкие гранулы гликогена. Гликоген в этой стадии образуется в связи с предовуля-торной секрецией гестагенов в достигшем зрелости фолликуле. Спиральные артерии стромы, которые подрастают из базального слоя в среднюю стадию фазы пролиферации, еще не сильно извиты, поэтому в гистологических сре­зах обнаруживаются лишь один-два перерезанных поперек сосуда с тонкими стенками (Топчиева О.И. и соавт., 1978; Железнов Б.И., 1979).

62 Эндокринная гинекология

Таким образом, эстрогены одновременно с пролиферацией клеток эпите­лия стимулируют в течение фазы пролиферации развитие секреторного аппа­рата клетки, подготавливая его для дальнейшей полноценной функции в фазе секреции. Этим и объясняется последовательность событий, имеющая глубо­кий биологический смысл. Вот почему без предварительного воздействия эс­трогенов на эндометрий прогестерон практически не действует. На сегодня выявлено, что рецепторы прогестерона, обеспечивающие чувствительность к этому гормону, активируются предшествующим действием эстрогенов.

Как представляет O.K. Хмельницкий (2000), фаза секреции, непосредст­венно связанная с гормональной активностью желтого тела и соответствую­щей секрецией прогестерона, длится 14 дней. Укорочение или удлинение фа­зы секреции более чем на два дня у женщин, находящихся в репродуктивном возрасте, следует рассматривать как патологическое состояние, поскольку та­кие циклы, как правило, оказываются ановуляторными. Колебания секретор­ной фазы от 9 до 16 дней могут иметь место в начале или в конце репродук­тивного периода, т.е. при становлении или угасании маточно-овариального цикла.

В диагностике 1-ой недели секреторной фазы особое значение приобрета­ют изменения в эпителии, позволяющие говорить о произошедшей овуляции. Характерные изменения 1-ой недели в эпителии связаны с нарастающей функцией желтого тела.

На 2-ой неделе день прошедшей овуляции наиболее точно может быть оп­ределен по состоянию клеток стромы. Изменения 2-ой недели в строме связа­ны с наивысшей функцией желтого тела и наступающего затем его регресса и снижения концентрации прогестерона.

В раннюю стадию фазы секреции (на 15-18-й день цикла) толщина эндоме­трия заметно нарастает по сравнению с фазой пролиферации. Самым харак­терным признаком наступления фазы секреции — ее ранней стадии — явля­ется появление в эпителии желез субнуклеарных вакуолей. При обычном све-тооптическом исследовании проявление секреции в виде субнуклеарных ва­куолей наблюдается обычно на 16-й день цикла, что свидетельствует о свер­шившейся овуляции и выраженной гормональной функции менструального желтого тела. К 17-му дню цикла (3-й день после овуляции) гранулы гликоге­на содержатся в большинстве желез и располагаются на одном уровне в ба-зальных отделах клеток под ядром. В результате этого и ядра, находящиеся над вакуолями, также располагаются в ряд, на одном уровне. Затем на 18-й день (4-й день после овуляции) гранулы гликогена перемещаются в апикаль­ные отделы клеток, как бы обходя ядро. В результате этого ядра вновь слов­но опускаются вниз к основанию клетки. Нередко к этому сроку ядра в раз­личных клетках оказываются на разных уровнях. Изменяется и их форма — они становятся более округлыми, митозы исчезают. Цитоплазма клеток ста­новится базофильной, в апикальной части их выявляются кислые мукополи-сахариды.

Глава 2. Методы диагностики функционального состояния репродуктивной системы 63

Наличие субнуклеарных вакуолей является признаком свершившейся ову­ляции. Однако надо помнить, что они отчетливо выявляются при световой микроскопии спустя 36-48 часов после овуляции. Следует учитывать, что суб-нуклеарные вакуоли могут наблюдаться и при других ситуациях, характери­зующихся действием прогестерона. При этом, однако, они не будут выявлять­ся однотипно во всех железах, и форма и величина их будут различны. Так, нередко субнуклеарные вакуоли обнаруживаются в отдельных железах в тка­ни "смешанного" гипопластического и гиперпластического эндометрия.

Наряду с субнуклеарной вакуолизацией для ранней стадии фазы секреции характерно изменение конфигурации железистых крипт: они извилисты, рас­ширены, однотипны и правильно расположены в рыхлой, несколько отечной строме, что свидетельствует о действии прогестерона на стромальные элемен­ты. Спиральные артерии в раннюю стадию фазы секреции приобретают более извитой вид, однако "клубков", характерных для последующих стадий секре­ции, еще не наблюдается.

В средней стадии фазы секреции (19-23-й день цикла) в эндометрии отме­чаются наиболее выраженные секреторные превращения, которые происхо­дят в результате наивысшей концентрации гормонов желтого тела. Функцио­нальный слой при этом утолщен. В нем отчетливо прослеживается подразде­ление на спонгиозный (губчатый) или глубокий и компактный или поверхно­стный слои. В компактном слое железистые крипты менее извиты, преоблада­ют клетки стромы, эпителий, выстилающий поверхность компактного слоя, высокий призматический, не секретирующий. Железистые крипты штопоро-образной формы довольно тесно прилежат друг к другу, просветы их все бо­лее расширяются, особенно к 21-22-му дню цикла (то есть к 7-8-му дню после овуляции) и становятся более складчатыми. Процесс выделения гликогена пу­тем апокриновой секреции в просвет желез заканчивается к 22-му дню цикла (8-й день после овуляции), что приводит к образованию больших, растянутых желез, заполненных хорошо различимыми при окраске на гликоген мелкоди­сперсными гранулами.

В строме в среднюю стадию фазы секреции возникает децидуальноподоб-ная реакция, отмечаемая главным образом вокруг сосудов. Затем децидуаль-ная реакция из островкового типа приобретает диффузный характер, в осо­бенности в поверхностных отделах компактного слоя. Соединительноткан­ные клетки становятся крупными, округлой или полигональной формы, напо­минают вид торцовой мостовой, на 8-й день после овуляции в них обнаружи­вается гликоген.

Самым точным индикатором средней стадии фазы секреции, свидетельст­вующим о высокой концентрации прогестерона, являются изменения спи­ральных артерий, которые в среднюю стадию секреции резко извиты и обра­зуют "клубки". Они обнаруживаются не только в спонгиозном, но и в самых поверхностных отделах компактного слоя, поскольку с 9-го дня после овуля­ции отек стромы уменьшается, то к 23-му дню цикла клубки спиральных ар-

64 Эндокринная гинекология

терий уже выражены наиболее четко. Наличие развитых спиральных сосудов в функциональном слое эндометрия считается одним из наиболее достоверных признаков, определяющих полноценное прогестероновое воздействие. Сла­бое же развитие "клубков" спиральных сосудов в эндометрии секреторной фазы расценивается как проявление недостаточности функции желтого тела и недостаточной подготовленности эндометрия к имплантации.

Как указывают О.И. Топчиева и соавт. (1978), структура эндометрия сек­реторной фазы средней стадии на 22-23-й день цикла может наблюдаться при длительной и повышенной гормональной функции менструального желтого тела, т.е. при персистенции желтого тела (в подобных случаях бывает особен­но сильно выражена сочность и децидуальноподобное превращение стромы, а также секреторная функция желез), или в ранние сроки беременности в те­чение первых дней после имплантации — при маточной беременности за пре­делами зоны имплантации; а также равномерно во всех участках слизистой оболочки тела матки при прогрессирующей внематочной беременности.

Поздняя стадия фазы секреции (24-27-й день цикла) наступает в том слу­чае, если оплодотворение яйцеклетки не произошло и беременность не насту­пила. В этом случае на 24-й день цикла (10-й день после овуляции) трофика эндометрия в связи с началом регресса желтого тела и, соответственно, сни­жением концентрации прогестерона нарушается, и в нем развивается целый ряд дистрофических процессов, т.е. в эндометрии возникают изменения рег­рессивного характера.

При обычной светооптической микроскопии за 3-4 дня до ожидаемой мен­струации (на 24-25-й день цикла) отмечается уменьшение сочности эндомет­рия вследствие потери им жидкости, наблюдается сморщивание стромы функционального слоя. Железы вследствие сморщивания стромы эндометрия становятся еще более складчатыми, тесно располагаются друг к другу и при­обретают на продольных срезах пилообразные, а на поперечных — звездча­тые очертания. Наряду с железами, в которых секреторная функция уже пре­кратилась, всегда имеется некоторое количество желез со структурой, соот­ветствующей более ранним стадиям секреторной фазы. Эпителий железистых крипт характеризуется неравномерной окраской ядер, часть из которых пик-нотична, в цитоплазме появляются мелкие капли липидов.

В этот период в строме предецидуальные клетки сближаются друг с дру­гом и выявляются не только в виде островков вокруг клубков спиральных со­судов, но и диффузно по всему компактному слою. Среди предецидуальных клеток обнаруживаются мелкие клетки с темными ядрами — эндометриаль-ные зернистые клетки, которые, как показали электронно-микроскопические исследования, трансформируются из соединительнотканных клеток, т.е. бо­лее крупных предецидуальных клеток, которые располагаются преимущест­венно в компактном слое. При этом отмечается обеднение клеток гликогеном, ядра их становятся пикнотичными.

На 26-27-й день цикла в строме можно обнаружить расширение капилляров

Глава 2. Методы диагностики функционального состояния репродуктивной системы 65

зговые кровоизлияния в поверхностных слоях. Это связано с тем, что по

е развития цикла спиральные артериолы удлиняются быстрее, чем увели­чивается толщина эндометрия, так что сосуды приспосабливаются к эндомет­рию за счет повышения извилистости. В предменструальный период спирали-зация становится такой выраженной, что замедляет кровоток и вызывает стаз и тромбоз. Этот момент, наряду с рядом других биохимических процессов, объясняет эндометриальный некроз и дистрофические изменения кровенос­ных сосудов, которые приводят к менструальному кровотечению. Незадолго до начала менструации расширение сосудов сменяется спазмом, который объ­ясняют действием различных типов токсических продуктов распада белка или других биологически активных веществ на фоне падения уровня прогестерона.

Фаза кровотечения, менструация (28-4-й день цикла), характеризуется со­четанием процессов десквамации и регенерации.

Чрезвычайно важным в отношении тактики ведения пациенток является от­мечаемое гистологически наличие лейкоцитарной инфильтрации в сочетании с другими признаками воспалительного процесса, который достаточно часто остается незамеченным клиницистом. Именно нелеченный воспалительный процесс, особенно неспецифической этиологии, является частой причиной не­чувствительности гиперплазированного эндометрия к гестагенам.

Таким образом, как видно из представленных данных, гистологическое ис­следование эндометрия необходимо для оценки эндокринного статуса жен­щины, и изменения в эндометрии необходимо учитывать для адекватного оп­ределения механизмов развития той или иной патологии в репродуктивной системе.

Мы не ставили своей задачей подробное описание изменений эндометрия на фоне тех или иных изменений содержания половых стероидных гормонов. Однако следует отметить, что хотя гистолог, оценивая имеющуюся морфоло­гическую картину в сопоставлении с представленными ему в направлении данными клиники и анамнеза, формирует заключение, интерпретация выяв­ленных гистологом морфологических особенностей эндометрия — это все-та­ки задача гинеколога. Хочется только лишний раз обратить внимание на чрез­вычайную важность адекватной оценки состояния эндометрия для определе­ния гормонального гомеостаза и последующего выбора методов его коррек­ции и недопустимости трактовки результатов гистологического исследования как "хороших" или "плохих", имея в виду исключительно онкориск.

Литература

1. Ефимов А.С, Боднар П.Н., Зелинский Б.А. Эндокринология. — К.: Вища школа, 1983. —327 с.

2. Клиническое руководство по ультразвуковой диагностике / Под ред. В.В. Мить-кова, М.В. Медведева). — М.: Видар, 1997. — 318 с.

3. Комаров Ф.И., Коровкин Б.Ф., Меньшиков В.В. Биохимические исследования в клинике. — Элиста: АПП "Джангар", 1998. — 249 с.

66 Эндокринная гинекология

4. Стрижаков А.Н., Давыдов А.И. Клиническая трансвагинальная эхография. — М.: Медицина, 1999. — 278 с.

5. Татарчук Т.Ф., Бурлака Е.В., Сольский Я.П., Захаренко Н.Ф., Попова Т.А. Ранние ультразвуковые признаки гиперпластических процессов эндометрия у женщин в периоде климактерия // III наук.-практ. конф. "Злоякюш пухлини матки та тро-фобласту. Патогенез, диагностика та лисування". — К., 25-26 листопада, 1999. — С. 35-40.

6. Хмельницкий O.K. Патоморфологическая диагностика гинекологических заболе­ваний. — СПб.: СОТИС, 1994. — 480 с.

7. Al-Azzawi F, Wahab M. Hormone replacement therapy and the endometrium. New-York-London: The Parthenon Publishing Group, 2001: 172.

8. Sopelak V. Regulation of the ovarian menstrual cycle.- Clinical reproductive medicine / Cowan B.D., Seifer D.B.- Philadelphia-New York.: Lippincott-Raven Publishers.-1997.-P.61-68.

9. Leidenberger FA, Weise HCh, Breustedt HJ, Schulte HM. Anabasis. Stand: November, 1995: 284.

10. Yen SSC, et al. Reproductive Endocrinology Physiology, Pathophysiology, and
Clinical Management, Philadelphia-Tokyo: W.B. SAUNDERS COM PANY 1999.