Определение Coli-титра и Coli-индекса воды
Наибольшую опасность представляет фекальное загрязнение воды, так как вместе с фекалиями в воду могут попасть патогенные микробы. Обнаружить микробы в воде трудно ввиду их небольшой концентрации, поэтому в таких случаях прибегают к косвенным показателям. Основным показателем фекального загрязнения является кишечная палочка Escherichia coli - постоянный обитатель кишечника людей и животных. Escherichia coli сохраняется в воде довольно продолжительное время и легко обнаруживается.
Степень загрязнения воды определяется Coli-титром или Coli-индексом. Coli -титр показывает наименьшее количество воды, в котором при посеве обнаруживается, хотя бы одна кишечная палочка; Coli -индекс - число кишечных палочек в 1 л воды. Для перевода Coli -титра в Coli -индекс 1000 делят на показатель Coli -титра. Для перевода Coli -индекса в Coli -титр 1000 делят на число, выражающее Coli -индекс.
Для определения Coli-титра пользуются методами бродильных проб и мембранных фильтров. Они основаны на том, что кишечная палочка размножается при температуре 43-45 °С, в то время как рост большинства водных бактерий при этой температуре задерживается. Во время роста кишечная палочка сбраживает разные углеводы в питательных средах. При определении Coli -титра берут разные объемы засеваемой воды (в зависимости от источника водоснабжения). Водопроводную воду засевают в количестве 300 мл (два объема по 100 мл и десять объемов по 10 мл)/
При засеве воды открытых водоемов взятый объем зависит от степени предполагаемого загрязнения. При средней загрязненности водоема для посева берут 100 мл (первый объем), 10 мл (второй объем), 1 мл (третий объем) и 0,1 мл (четвертый объем). Из загрязненных водоемов - соответственно 1; 0,1; 0,01 и 0,001 мл. Засевают на среду Булижа с поплавками. Соотношение среды и засеваемой воды 1: 2. Малые количества воды засевают на неконцентрированную среду Булижа в пробирках. Посевы выращивают в термостатах при температуре 43° С в течение 24-48 ч. Затем отмечают изменение цвета среды, наличие или отсутствие газа и мути. Если среда не изменилась, кишечная палочка в пробе отсутствует, исследование прекращают.
Из пробирок с мутью, газом и тех, где среда Булижа имеет соломенно-желтый цвет, производят посев на среду Эндо. Выращивают микроорганизмы при температуре 37 °С и в течение 18-24 ч. При наличии красных с металлическим блеском или розовых, выпуклых слизистых колоний из них готовят мазки и красят по Граму для обнаружения коротких грамотрицательных палочек. Если таковые обнаружены, производят вторичный посев из подозрительных колоний со среды Эндо на среду Булижа, разведенную в отношении 1:10 и разлитую по 5 мл в пробирки.
Посевы выращивают в термостате в течение суток при температуре 37 °С. После этого, дают заключение о степени загрязненности воды кишечной палочкой. Данные анализов, выраженные в виде Coli -титра и Coli-индекса сравнивают с данными табл. 1 и 2.
Таблица 1
Количество объемов по 10 мл | Количество объемов колодезной и водопроводной по 100 мл | |||||
Coli-титр, более | Coli-индекс, менее | Coli-титр | Coli-индекс | Coli-титр | Coli-индекс | |
менее 4 | более 230 |
Примечание. При второй бродильной пробе наблюдается газообразование и муть в 1 объеме (по 100 мл) и в 5 пробирках (по 10 мл). Находим по вертикали 1, по горизонтали 5 и на пересечении отмечаем значения; Coli-титр- 56 и Coli- индекс - 18.
Для определения Coli-индекса пользуются ускоренным методом с помощью мембранных ультрафильтров (кружков диаметром 3,5 см), которые выпускаются под пятью номерами. Чем больше размеры пор, чем выше его номер и быстрее идет фильтрация. Для санитарно-бактериологического исследования воды наиболее пригоден ультрафильтр № 3.
Таблица 2
Объем исследуемой воды открытых водоемов, рек, озер, мл | Coli -титр | Coli –индекс | |||
1,0 | 0,1 | ||||
- | - | - | - | Более 111 | Менее 9 |
- | - | - | + | ||
- | - | + | - | ||
- | + | - | - | 9,5 | |
- | - | + | + | ||
- | + | - | + | ||
- | + | - | + | ||
+ | - | - | - | ||
- | + | + | + | ||
+ | - | - | + | ||
+ | - | + | - | ||
+ | - | + | + | ||
+ | + | - | - | ||
+ | + | - | + | ||
+ | + | + | - | 0,4 | |
+ | + | + | + | менее 0,4 | более 2380 |
Примечания к табл. 3: 1.«+» кишечная палочка выделена; «-» — не выделена. Воду для питьевых и хозяйственных нужд можно использовать при следующих показателях: общее количество микробов должно быть не более 100 в 1 мл; Coli -титр - не менее 333, Coli -индекс – 3; 2. Вода из артезианских скважин, поступающая в водопроводную систему без очистки и дезинфекции, должна иметь Coli -титр не менее 500, Coli -индекс - не более 2. Воду открытых водоемов можно считать доброкачественной при Coli -титре не менее 111 и Coli-индексе - 9.
Матовая сторона ультрафильтра называется воздушной. При фильтрации и засеве матовая сторона должна быть обращена вверх, а обратная (блестящая) - вниз, соприкасаясь с питательной средой. Через мембранные ультрафильтры, используя приборы Рублевского или Зейтца, фильтруют соответствующий объем воды.
Перед фильтрованием мембранные фильтры кипятят 10-15 мин в дистиллированной воде, медленно нагревая и не допуская бурного кипения. Фильтровальный прибор стерилизуют обжиганием, автоклавированием или кипячением. Аппарат охлаждают, на сетку помещают стерилизованный кружок фильтровальной бумаги, смоченный стерильной водой, а затем стерильный ультрафильтр (бумагу используют для предохранения ультрафильтра от повреждения).
По окончании фильтрования стерильным пинцетом накладывают мембранные фильтры в чашки на среду Эндо. После суточного роста в термостате при температуре 43 °С из характерных для кишечной палочки колоний делают мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и засевают в пробирки с глюкозопептонной водой или средой Булижа с поплавком. Выдерживают посевы при 43 °С в течение суток. Характерный рост является доказательством наличия кишечной палочки. Морфологические и культуральные свойства кишечной группы бактерий определяются стандартным способом.
Вопросы для самоконтроля:
1.Какие данные необходимо указывать в сопроводительном документе к пробам воды?
2.Назовите допустимые показатели содержания в воде Со1i-титра и Со1i-индекса.
3. Почему сроки исследования проб воды ограничены 2-6 часами?
4. При какой температуре необходимо культивировать Escherichia coli и с чем это связано?
5. Как связаны между собой показатели Со1i-титра и Со1i-индекса?
6. Чем определяется выбор объема засеваемой воды, взятый из различных источников?
7. Почему определение Со1i-титра и Со1i-индекса так широко используется при проведении бактериологического анализа воды? Является ли наличие Escherichia coli объективным показателем биологического загрязнения воды?
ВЫВОД:
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
6.2