Практическая работа студентов
Задание 1.На занятии изучить морфологические признаки грибов и дрожжей, их культуральные свойства, ознакомиться с представителями отдельных классов. Освоить методику приготовления препаратов «раздавленная капля» и технику микроскопирования живых неокрашенных объектов.
Приготовление препаратов типа «раздавленная капля»
1. На предметное стекло трубочкой или пипеткой наносят большую каплю воды;
2. Зажигают спиртовку, прокаливают припаровальную иглу над пламенем горелки и отбирают небольшое количество мицелия грибов из пробирки или чашки Петри, соблюдая правила асептики;
3. Культуру аккуратно помещают в каплю, нанесенную на предметное стекло и с помощью двух игл расправляют ее в воде;
4. Препарат накрывают покровным стеклом и слегка придавливают. Излишки воды удаляют с помощью фильтровальной бумаги.
5. Микроскопируют препарат «раздавленная капля» сначала с объективом х8, а затем х40 в затемненном поле зрения (конденсор опущен, шторка ирис-диафрагмы прикрыта).
При отборе и микроскопии препаратов грибов учитывают следующие рекомендации:
а) гриб рода Mucor. Отбирают черновато-серый пушистый воздушный мицелий. При микроскопии обращают внимание на гифы с заполненными спорами спорангиями и колонки, которые образуются при освобождении спорангия;
б) гриб рода Aspergillus. Отбирают немного пушистого мицелия с окрашенными конидиями, слегка углубляясь иглой в питательную среду. Обращают внимание на несептированные конидиеносцы;
в) гриб рода Penicillium. При отборе стараются взять молодой мицелий (на границе окрашенного и белого мицелия), углубляясь иглой в среду. Обращают внимание на септированные гифы с кисточками.
г) гриб рода Alternaria. Берут грибницу в черных участках, углубляясь в нее иглами. Обращают внимание на септированный мицелий, слабо развитые конидиеносцы и крупные конидии, имеющие вид округлых или заостренных многоклеточных образований, напоминающих «гранаты-лимонки».
При исследовании дрожжей на предметное стекло наносят суспензию дрожжей, накрывают покровным стеклом, излишки воды удаляют фильтровальной бумагой. Микроскопируют препарат и объективом х8 и х40.
Микроскопируют окрашенный препарат дрожжей метиленовым синим для изучения роста клеток, выявления мертвых клеток прессованных дрожжей. Рассчитать процентное содержание мертвых клеток, необходимо подсчитав их численность в 10-ти полях зрения – они окрашиваются в ярко-синий цвет.
Задание:по памяти зарисовать микроскопические картины исследованных культур грибов и дрожжей с учетом морфологических особенностей каждого микроорганизма.
Задание 2.Ознакомиться с влиянием окружающей среды на микрорганизмы
Температура.
Микробы приспосабливаются к изменениям температуры окружающей среды. Выделяют оптимальную температуру (благоприятную для роста и размножения), минимально и максимально приемлемые ( за их пределами рост прекращается). По отношению к температурным условиям микроорганизмы разделяют на мезофильные, психрофильные и термофильные.
- мезофильные виды лучше растут в пределах 20-40 0С, к ним относится большинство патогенных и условно-патогенных микроорганизмов;
- термофильные виды растут при температуре выше 40 0С, верхний предел 70 0С;
- психрофильные виды растут в диапазоне температур 0-10 0С, к ним относится большинство сапрофитов, обитающих в почве, в пресной и морской воде
Химические вещества, которые пагубно влияют на микроорганизмы, но не влияют на макроорганизмы, и которые используют лечения инфекционных болезней, называют антисептиками.
Антисептика – это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение или угнетение их роста на объекте (рана, организм). С этой целью используют бактерицидные химические вещества.
Асептика – система профилактических мероприятий (дезинфекция, стерилизация), направленная на предупреждение микробному заражению ран, операционного поля, культуры микроорганизмов и др.
Для проведения дезинфекции и стерилизации используют разные методы в зависимости от того, какой режим стерилизации они обеспечивают.
Стерилизация — обработка объектов, при которой достигается полное уничтожение всех микроорганизмов. В результате стерилизации объект становится свободным как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. Существуют различные методы и способы стерилизации, в основе которых лежит действие физических или химических факторов. Критерием гибели микроорганизмов является необратимая утрата способности к размножению, что можно оценить путем количественного подсчета числа колоний после высева смывов на чашки с питательными средами.
Наиболее широко применяют методы тепловой стерилизации: кипячением, сухим жаром в атмосфере горячего воздуха или влажным жаром при помощи пара, а также прокаливанием предметов в огне.
Прокаливание на огне — надежный метод стерилизации бактериологических петель, металлических и стеклянных предметов. Однако применяется ограниченно ввиду их порчи.
Стерилизация сухим жаром или горячим воздухом производится в сушильных шкафах или печах Пастера при температуре 160—170°С в течение 1—1,5 ч по достижении заданной температуры. Этим методом стерилизуют лабораторную посуду, инструменты, минеральные масла, вазелин. Жидкости и резину сухим жаром стерилизовать нельзя. Предметы, подлежащие стерилизации, заворачивают в бумагу или закладывают в металлические пеналы для предохранения от последующего загрязнения. Необходимо помнить, что при темпера-, туре выше 170°С начинается обугливание бумаги, ваты, марли, а при более низкой температуре не происходит гибели спор.
Стерилизация кипячением в течение 30 мин убивает вегетативные формы микробов. Споры многих бактерий при этом сохраняются, выдерживая кипячение в течение нескольких часов. Для уничтожения вирусов — возбудителей болезни Боткина необходимо кипячение в течение 45—60 мин. Кипячению в специальных стерилизаторах подвергают шприцы, хирургические инструменты, иглы, резиновые трубки. Для повышения точки кипения и устранения жесткости воды добавляют 2% гидрокарбоната натрия.
Стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование) является наиболее надежным и быстрым методом стерилизации. Обеспложивание достигается воздействием пара, температура которого под давлением выше, чем температура кипящей воды: при давлении 0,5 атм 112°С, при 1 атм. 121 °С , при 1,5 атм 127°С и при 2 атм 134°С.
Дезинфекция — уничтожение патогенных микробов в окружающей человека среде. Методы и способы дезинфекции. различны, но они преследуют цели уничтожения не всех микроорганизмов, а только патогенных. Уничтожение возбудителей инфекционных заболеваний в переносчиках называют дезинсекцией, а в организме грызунов — источников инфекции — дератизацией.
Дезинфекция имеет большое значение в системе профилактических и противоэпидемических мероприятий. С учетом роли дезинфекции ее делят на профилактическую и очаговую. Профилактическая дезинфекция позволяет предупредить распространение инфекционных болезней среди населения и порчи продуктов. Такой вид дезинфекции проводят в пищевых объектах, местах торговли пищевыми продуктами, на предприятиях по переработке животного сырья, в местах общественного пользования, в сооружениях водоснабжения, медицинских учреждениях, бактериологических лабораториях. При выполнении различных видов дезинфекции применяют механические, физические и химические способы и средства.
Задание 3. Проведение дезинфекции рук.
Алгоритм «Дезинфекция рук» :
- сделайте из ваты два шарика диаметром 1-2 см;
- возьмите пинцетом один шарик, смочите его в растворе дезинфектанта;
- протрите ним руки в такой последовательности: левая рука – тыльная сторона, ладонная сторона, между пальцами, ногтевая пластинка, под ногтями; правая рука – в такой самой последовательности;
- шарик опустите в контейнер с дезинфекционным раствором;
- возьмите пинцетом второй шарик и все повторите;
- вымойте руки с мылом;
- высушите руки, смажьте их кремом для рук.
Задание 4. Произвести контроль за обработкой посуды, инвентаря и обработки рук персонала хлорсодержащими дезинфектантами
Посуда, инвентарь и оборудование, а так же руки работников при соприкосновении с пищевыми продуктами могут служить причиной инфекционных заболеваний и пищевых отравлений микробной природы. Поэтому перед началом работы рекомендуется тщательно вымыть руки с мылом и щеткой и обработать 0,2 %-ным раствором хлорсодержащих препаратов.
Посуда: разделочные доски, лопатки, стеллажи и пр., обработанные с применением растворов хлорсодержащих препаратов дают положительную реакцию с йодисто-калиевым крахмалом.
Ход определения. Ватным тампоном, смоченным раствором йодисто-калиевого крахмала, протирают участок (в виде полоски 1х5 см) исследуемого предмета. Появление полосы буровато-синего цвета свидетельствует о присутствии хлора.
Если дезинфекция хлорсодержащими препаратами не проводилась, то цветной полосы не обнаруживается.
Для контроля правильности обработки рук хлорсодержащими дезинфекантами, берут тампон, смоченный йодисто-калиевым крахмалом и протирают тыльную поверхность руки, ладони, межпальцевые промежутки, а затем околоногтевые ложа.
Окрашивание кожи рук и тампона в буровато-синий цвет свидетельствует об обработке рук хлорсодержащими препаратами. Реакция положительна в течение 3-5 часов после обработки рук.
Лабораторная работа №5.
Тема: Патогенные микроорганизмы и пищевые (алиментарные) заболевания, вызываемые ими. Распространение микробов в природе.
Цель: изучить основные патогенные микроорганизмы и заболевания, передающиеся через пищевые продукты; рассмотреть особенности распространения микробов в природе.
ХОД ЗАНЯТИЯ:
1.Теоретического разбор материала:
1.Патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.
2.Дать сравнительную характеристику микробным токсинам.
3.Определение понятия: инфекция, инфекционный процесс, инкубационный период.
4. Дать определение понятию иммунитет. Виды иммунитета.
5.Заболевания, передающиеся через пищевые продукты. Дать сравнительную характеристику пищевых инфекций и пищевых отравлений.
6.Пищевые инфекции.
6.1. Холера.
6.2. Брюшной тиф и паратифы.
6.3. Бактериальная дизентерия.
6.4.Вирусный гепатит А.
7.Пищевые инфекции, передающиеся человеку от животного.
7.1.Бруцеллез.
7.2.Туберкулез.
7.3.Сибирская язва.
7.4.Ящур.
8.Пищевые отравления.
8.1.Пищевые токсикоинфекции. Сальмонеллез.
8.2.Пищевые интоксикации (токсикозы).
8.3.Стафилококковые пищевые интоксикации.
8.4.Ботулизм.
9.Профилактика пищевых заболеваний.
10. Распространение микробов в природе.
10.1. Микрофлора почвы.
10.2. Микрофлора воды.
10.3. Микрофлора воздуха.
10.4. Микрофлора тела здорового человека.
Лабораторная работа №6-7
Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБЪЕКТОВ.
Цель: Ознакомиться с методами определения бактериального загрязнения путем изучения микрофлоры смывов, сделанных с рук и поверхностей исследуемых объектов и проб пищевых продуктов. Ознакомиться с классификацией питательных сред и ростом колоний микроорганизмов.
Оборудование, материалы: Термостат; чашки Петри; пробирки; микробиологические петли; ватные тампоны или салфетки; пипетка, пинцет; изотонический раствор хлорида натрия; спиртовка; кристаллизационная чашка; 96 %-ный этиловый спирт, маркер, салфетки.
ХОД ЗАНЯТИЯ: