Микроскопирование препаратов на малом и среднем увеличении

1.	Вымыть и осушить руки
2.	Надеть перчатки
3. Подготовка микроскопа к работе:
3.1.	Установить микроскоп на рабочем столе на расстоянии 3 – 5 см от края, размотать шнур, вставить вилку в розетку.
3.2.	Установить объектив слабого увеличения (8х) на расстояние около 1 см (фокусное расстояние объектива малого увеличения)
3.3.	Привести конденсор в рабочее положение, слегка открыть диафрагму.
3.4.	Привести бинокулярную насадку в рабочее положение
3.5.	Включить осветитель
4. Работа на малом и среднем увеличении:
4.1.	Положить препарат на предметный столик покровным стеклом кверху
4.2.	Движением макрометрического винта найти фокус слабого увеличения
4.3.	Рассмотреть препарат, выбрать участок, который следует изучить при бỏльшем увеличении и поместить его в центр поля зрения
4.4.	Не меняя фокуса (не поднимая тубуса), повернуть револьверное устройство и установить более сильный объектив (40х).
4.5.	Поднять конденсор, открыть диафрагму
4.6.	Сфокусировать объект при помощи микрометрического винта путем его вращения на полоборота вперед или назад
5. Завершение работы
5.1.	Выключить свет, перевести револьвер на слабое увеличение, убрать препарат с предметного столика, закрыть диафрагму, опустить конденсор, опустить тубус, в бинокулярной насадке свести окуляры вместе
5.2.	Вынуть шнур из розетки, аккуратно обмотать его вокруг основания микроскопа. Надеть чехол на микроскоп.
5.3.	Перчатки снять и поместить в дезраствор

3-приготовленные лаборантом препарат является некачественным, т.к. содержит глыбки темно-коричневого цвета. Этот артефакт (зерна пигмента) образовался в результате реакции кислого формалина с гемоглобином.

4-Для удаления пигмента срезы необходимо поместить:

· в 1-5% раствор аммиака (на 15–20 мин),

· 70% спирт (на 15–20 мин),

· 1% КОН в 80° спирте (10 мин).

Затем срезы необходимо промыть водой.

Окрасив депарафинизированный срез гематоксилином, медицинский лабораторный техник остался недоволен результатом: фон препарата был тёмным, структура ядер не просматривалась.

ЗАДАНИЕ 1

1. Укажите, какой этап окраски препаратов был выполнен неудовлетворительно; подготовьте рабочее место для окраски препаратов
2. Подготовьте препарат к окрашиванию
3. Окрасьте препарат гематоксилином и эозином
4. Расскажите о правилах архивирования гистологических препаратов

1.Темный фон препарата и нечеткая структура ядер могут появиться при плохой дифференцировке препарата солянокислым спиртом.

2-3 депарафинирование и окраска препаратов гематоксилином-эозином

1.	Вымыть и осушить руки
2.	Надеть перчатки
3.Подготовить рабочее место:
3.1.	Подготовить лоток, салфетки, песочные часы, парфиновые срезысрезы
3.2.	Поместить на лоток штатив
3.3.	Составить батарею для депарафинирования, расположив растворы в следующей последовательности: ксилол (1) – ксилол (2) – спирт 100 – спирт 96 (1) – спирт 96 (2) – спирт 70 дист.вода
3.4.	Составить батарею для окрашивания, расположив растворы в следующей последовательности: дист.вода- гематоксилин- дист.вода- водопроводная вода- эозин- дист.вода
4. депарафинирование
4.1.	Поместить срезы в раствор ксилола 1-2 на 3-5 мин в каждый
4.2.	Провести срезы по батарее спиртов нисходящей концентрации
4.3.	Сполоснуть срезы в дистиллированной воде
5. окрашивание срезов гематоксилином-эозином
5.1.	депарафинированные срезы перенести в дистиллированную воду
5.2.	окрасить гематоксилином 2-5 мин
5.3.	промыть дистиллированной водой - 1 мин
5.4.	промыть водопроводной водой - 3-5 мин
5.5.	окрасить 1% раствором эозина – 0,5-1 мин
5.6.	быстро промыть дистиллированной водой
6. Завершение работы
6.1.	Разобрать батарею, бюксы с растворами составить на место, утилизировать использованные салфетки
6.2.	Перчатки снять и поместить в дезраствор

4. архивирование

После завершения вырезки кусочков из операционного материала, медицинский лабораторный техник поместил все инструменты, использованные перчатки и остатки материала в дезраствор.

ЗАДАНИЕ 1

1. Дайте оценку действиям лаборанта и подготовьте рабочее место для взятия операционного материала
2. Проведите маркировку и фиксацию материала
3. Проведите дезинфекцию использованной посуды и инструментария
4. Расскажите о правилах архивирования оставшегося после исследования материала (влажный архив)

1. Медицинский лабораторный техник поступил неверно. Оставшийся материал следует поместить в 10% нейтральный формалин (влажный архив).

2-3-взятие, маркировка и фиксация материала

1.	Вымыть и осушить руки
2.	Надеть перчатки
3. Подготовить рабочее место:
3.1.	расстелить клеенку (поставить лоток)
3.2.	поставить на клеенку (лоток): емкость с широким горлом и притертой крышкой, заполненную 10% нейтральным формалином; гистологические кассеты, пинцет
4. маркировка и фиксация материала
4.1.	открыть кассету (положить на лоток марлевую салфетку)
4.2.	поместить в кассету (на салфетку) вырезанный врачом кусочек материала
4.3.	Подготовить бумажную этикетку: простым карандашом написать порядковый номер, под которым материал зарегистрирован в журнале
4.4.	Этикетку поместить в кассету (на салфетку с материалом)
4.5.	Закрыть кассету, при этом должен раздаться щелчок (завязать салфетку).
4.6.	Поместите кассету (салфетку) с материалом в емкость широким горлом, заполненную 10% нейтральным формалином. При этом объем фиксатора должен превышающем объем фиксируемого материала в 10-20 раз
4.7.	Закрыть емкость крышкой и оставить под вытяжкой на время, необходимое для фиксации (1 сутки).
5. Завершение работы
5.1.	использованные инструменты сложить в емкость для дезинфекции, экспозиция 1 час.
5.2.	клеенку (лоток) протереть ветошью, смоченной в дез.растворе.
5.3.	сбросить ветошь в емкость с дезраствором, экспозиция 1 час.
5.4.	снять резиновые перчатки, погрузить их в емкость с дезраствором, экспозиция 1 час.

4. влажный архив

Медицинский лабораторный техник получил задание залить в парафин операционный материал. С этой целью он использовал следующий алгоритм действий: спирт 70% - спирт 96% (1) – спирт 96% (2) - спирт 100% – ксилол (1) – ксилол (2) – смесь ксилола с парафином (при 37º С) – парафин (56º С).

ЗАДАНИЕ 1

1.Оцените действия лаборанта и подготовьте рабочее место для обезвоживания, уплотнения и заливки материала в парафин

2.Продемонстрируйте технику обезвоживания материала

3.Залейте материал в парафин

4.Расскажите о правилах архивирования парафиновых блоков

Медицинский лабораторный техник использовал правильный алгоритм действий

1-3 уплотнение материала и заливка его в парафин.

1.	Вымыть и осушить руки
2.	Надеть перчатки
3. Подготовить рабочее место:
3.1.	Подготовить батарею для обезвоживания и уплотнения материала
3.2.	Подготовить инструменты.
3.3.	Подготовить формочки для заливки.
3.4.	Подготовить емкость с холодной водой для быстрого охлаждения парафина.
4. обезвоживание
4.1.	Промытый материал поместить в 70% спирт.
4.2.	Продемонстрировать, как материал переносят из одного реактива в другой, указать время выдержки в каждом реактиве.
5. Заливка материала
5.1.	Достать из термостата емкости с парафином (2-я порция) и заливочный парафин.
5.2.	Поместить емкости с парафином на водяную баню.
5.3.	Теплым пинцетом перенести материал в центр бумажной формочки.
5.4.	Заполнить формочку парафином для заливки.
5.5.	Формочки до краев погрузить в холодную воду, пока на поверхности не появится пленка.
5.6.	Полностью погрузить формочку в воду.
6. Завершение работы
6.1.	Убрать емкости с парафином в термостат.
6.2.	Утилизировать кассету (марлю).
6.3.	Перчатки снять и поместить в дезраствор.

4.архивирование

При изготовлении парафиновых срезов с блока кожи с волосом медицинский лабораторный техник испытывал затруднение: срезы покрывались полосами, разрывались.

1. Назовите возможные причины затруднения в резке данного блока.

2. Возможно ли исправление этого артефакта?

3. Техника нанесения адгезивной среды на предметные стекла. Что можно использовать в качестве адгезивного материала при наклеивании срезов на предметные стекла?

1. Причинами возникновения разрывов и полос на парафиновых средах могут быть:

· Дефект режущей поверхности

· Налипание парафина на режущий край лезвия

· Высокое содержание солей кальция в образце

· Некачественный парафин

2. Для устранения артефакта следует:

· Немного сдвинуть лезвие и посмотреть, изменилось ли вместе с этим расположение царапин на срезе. Если царапины тоже сместились, то замените лезвие.

· Очистите лезвие с помощью щётки, смоченной в ксилоле. Во время чистки щётку следует вести вверх по направлению от режущего края, но ни в коем случае не ведите её вниз на режущий край.

· Дубль образца следует подвергнуть декальцификации или перезалить материал.

3. В качестве адгезивного материала при наклеивании срезов на предметное стекло можно использовать готовый желатиновый адгезив для срезов или приготовить самостоятельно адгезивную среду на основе сыворотки или яичного белка с глицерином.

Приступив к окрашиванию парафинового среза с кусочка щитовидной железы, медицинский лабораторный техник забыл провести депарафинизацию.

1. Может ли быть окрашен недепарафинизированный препарат? С какой целью проводиться депарафинизация?

2. Возможна ли коррекция подобной ошибки?

3. Виды наиболее часто используемых гистологических красителей.

1. Недепарафинизированный препарат не может быть окрашен. Депарафинизация используется для удаления парафина из среза. Депарафинизированный препарат можно высушить и сохранять. Растворитель парафина – ксилол следует менять после обработки 100-200 срезов.

2. Коррекция невозможна.

3. В гистологической практике применяют основные (щелочные), кислотные и нейтральные красители. Основные красители окрашивают структуры кислой природы. В первую очередь ядра клеток (ДНК, хроматин, ядрышковая РНК). Это окрашивание называют базофильным. Среди этих красителей самый распространённый ядерный краситель – гематоксилин. Структуры цитоплазмы с основными свойствами окрашиваются кислыми красителями. Самый распространённый кислый краситель – эозин. Среди нейтральных красителей наиболее употребим краситель – Судан (Судан III, IV), растворяющийся в жирах. Его используют при выявлении жировых включений в цитоплазме клеток.