Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом серийных разведений

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ № 5

Тема: Чувствительность возбудителей заболеваний человека к антимикробным препаратам

Цель: Провести качественную и количественную оценку чувствительности возбудителей заболеваний человека к антимикробным препаратам. Изучить методы культивирования анаэробных микроорганизмов. Дать характеристику методам выделения, идентификации и титрования вирусов.

Знать:

1. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам

2. Минимальная подавляющая концентрация, методы определения

3. Способы выделения и условия культивирования анаэробных микроорганизмов

4. Методы фаготипирования и фагодифференцировки бактерий

5. Принципы применения препаратов бактериофагов для лечения и профилактики инфекционных заболеваний

Уметь:

1. Определить чувствительность возбудителей к антибиотикам разными методами

2. Определить МПК антибиотиков

3. Выявить наличие антибиотиков в биологических жидкостях

4. Взять материал при подозрении на анаэробную инфекцию, подобрать среды и осуществить культивирование анаэробов

5. Провести фаготипирование возбудителя

6. Правильно назначить препараты содержащие бактериофаги для профилактики и лечения бактериальных инфекций

Контрольные вопросы:

1. Принципы рациональной антибиотикотерапии

2. Механизмы формирования устойчивости к антибиотикам, пути преодоления

3. Методы определения чувствительности возбудителей заболеваний к антибиотикам

4. Минимальная подавляющая концентрация, методы определения

5. Методы определения концентрации антибиотиков в биологических жидкостях

6. Создание условий для культивирования анаэробных микроорганизмов

7. Среды для культивирования анаэробов

8. Строение и основные морфологические типы бактериофагов

9. Свойства бактериофагов

10. Этапы взаимодействия вирулентного бактериофага с чувствительной бактериальной клеткой

11. Этапы взаимодействия умеренного бактериофага с чувствительной бактериальной клеткой

12. Лизогенизация, профаг, лизогения (фаговая) конверсия и ее примеры

13. Феномен роста бактериофагов в жидкой и на плотной средах

14. Качественные пробы для выявления присутствия бактериофага

15. Способы титрования бактериофагов

16. Фаготипирование и фагодифференцировка

17. Фаготерапия и фагопрофилактика

I. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам

Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам методом серийных разведений

Метод используют для определения минимальной концентрации антибиотика, ингибирующей рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят ряд последовательных разведений в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 10⁶-10⁷ бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 часов. Результаты исследования отмечают по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной подавляющей концентрации (МПК) антибиотика.

Рис. 1. Алгоритм определения чувствительности исследуемой культуры к АБП методом разведений в жидкой питательной среде.

За МПК антибиотика для данного штамма принимают ту концентрацию, при которой отсутствуют признаки роста бактерий в жидкой питательной среде.

Определите МПК антибиотика по рисунку выше __________________________