Б. Изучение буферных свойств сыворотки крови
Для работы необходимы: четыре стаканчика, две пипетки на 5·10-3 л (5 мл), две бюретки, сыворотка крови, разведенная в 10 раз изотоническим раствором хлорида натрия, 0,01 N раствор NaOH, 0,1 N раствор НСl, дистиллированная вода, индикаторы - метиловый оранжевый и фенолфталеин.
Ход работы. 1. В один чистый стаканчик налить 5·10-3 л (5 мл) сыворотки крови, в другой - 5·10-3 л (5 мл) дистиллированной воды.
2. Добавить в оба стаканчика по капле метилового оранжевого и титровать 0,1 N раствором соляной кислоты (по каплям, считая их) до появления неисчезающего при взбалтывании красного окрашивания. Титрование следует начинать с воды, которая не обладает буферными свойствами и служит контролем.
3. Аналогичное исследование проводят, добавляя фенолфталеин и титруя 0,01 N раствором едкого натра до неисчезающего в течение 1 мин слабого фиолетового окрашивания.
Задание 6. Определение групповой принадлежности крови
Для определения группы крови берут стандартные гемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп и вносят в капельку каждой сыворотки небольшое количество исследуемой крови. Наличие агглютинации указывает на присутствие в эритроцитах обследуемого агглютиногена, одноименного агглютинину, имеющемуся в данной сыворотке. Отсутствие агглютинации указывает, что в исследуемой крови агглютиногена, одноименного агглютинину, содержащемуся в этой сыворотке, нет.
Для работы необходимы: предметные стекла, стандартные гемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп двух различных серий и титров, скарификатор, вата, спирт, спиртовой раствор йода.
Ход работы. 1. На чистое предметное стекло или фарфоровую тарелку нанести по капле сывороток I, II и III групп (наносят сыворотки двух серий с неодинаковым содержанием в них агглютининов - антител). Цифрами обозначают расположение сывороток.
2. В каждую каплю сыворотки вносят небольшое количество исследуемой крови (количество сыворотки должно быть примерно в 10 раз больше, чем исследуемой крови). Кровь у обследуемого берут каждый раз чистым уголком предметного стекла.
3. Определение группы крови производят в течение 5 мин при покачивании предметного стекла (или тарелки).
4. По мере наступления агглютинации (но не ранее чем через 3 мин) добавить в эти капли по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. Продолжать наблюдение при покачивании стекла в течение 5 мин.
5. Через 5 мин макроскопически (на глаз) определяют наличие или отсутствие агглютинации в каждой капле.
Кровообращение
Задание 1. Изучение деятельности сердца лягушки
Для работы необходимы: набор препаровальных инструментов, лигатуры, 0,65% раствор хлорида натрия, установка для регистрации сокращений сердца лягушки (рычажок Энгельмана, серфина, штатив), кимограф.
Ход работы. 1. У лягушки удалить головной мозг, разрушить спинной мозг, вскрыть полость тела и обнажить сердце. Отметить последовательность и продолжительность сокращений различных отделов сердца.
2. Соединить верхушку сердца с пишущим рычажком при помощи серфины и записать сокращения сердца на барабане кимографа.
3. Зарисовать полученную кривую сокращений сердца в тетрадь для практических занятий.
Задание 2. Наблюдение кровотока в сосудах языка и плавательной перепонки лапки лягушки
Для работы необходимы: пробковая пластинка с отверстием, бинокулярная лупа или микроскоп, набор препаровальных инструментов, булавки, небольшой эксикатор или стеклянный колпак, вата, эфир, 0,6% раствор хлорида натрия.
Ход работы. 1. Обездвижить лягушку. Для этого поместить ее в эксикатор, содержащий несколько ватных тампонов, пропитанных эфиром.
2. Поместить лягушку на пробковую пластинку брюшной стенкой вниз.
3. Извлечь из ротовой полости язык и растянуть его над отверстием, закрепить булавками, смочить изоосмотическим раствором.
4. Рассмотреть под малым увеличением микроскопа движение крови по артериям и венам, под большим - в капиллярах.
5. Затем растянуть над отверстием в пробковой пластинке при помощи булавок плавательную перепонку задней лапки лягушки (лучше между II и III коготками).
6. Рассмотреть под микроскопом движение крови в артериях, венах и капиллярах плавательной перепонки лягушки.
7. Зарисовать в тетрадь схему движения крови в различных кровеносных сосудах.
Задание 3. Тоны сердца у человека
Для работы необходимы: фонендоскоп или стетоскоп, спирт, вата, грампластинка с записью тонов сердца, проигрыватель.
Ход работы. 1. Прослушать грампластинку с записью тонов сердца здорового человека.
2. Выслушать звуковые явления, возникающие при работе сердца, в области верхушечного толчка, в месте прикрепления мечевидного отростка к телу грудины, во втором межреберье справа и слева от края грудины.
3. Попросить обследуемого сделать 20 приседаний в течение 30 с.
4. Вновь выслушать звуковые явления, возникающие при работе сердца.
5. Отметить изменения в характере тонов сердца, происходящие под влиянием физической нагрузки.
Задание 4. Исследование пульса в покое и после физической нагрузки
Для работы необходимы: секундомер или часы с секундной стрелкой.
Ход работы. 1. Путем пальпации лучевой артерии в нижней трети предплечья определить количество ударов в 1 мин.
2. Повторить подсчет пульса:
а) тотчас после 2-минутного бега на месте;
б) через 5 мин отдыха.
3. Записать результаты в тетрадь для практических занятий и объяснить изменения частоты пульса под влиянием физической на грузки.
Задание 5. Исследование артериального давления по способу Короткова в покое и после физической нагрузки
Для работы необходимы: сфигмоманометр Рива-Роччи или сфигмотонометр, фонендоскоп или стетоскоп, секундомер или часы с секундной стрелкой.
Ход работы. 1. Фиксировать манжету прибора на плече обследуемого и поместить воронку фонендоскопа ниже манжеты над проекцией плечевой артерии (медиальный край локтевой ямки).
2. В манжету нагнетать воздух до полного сдавления артерии (исчезает пульс). Затем дополнительно увеличить давление в манжете на 1,333-2,666 кПа (10-20 мм рт. ст.). При помощи винтового клапана медленно выпускать воздух из манжеты и, следя за показаниями манометра, отметить:
а) давление в манжете в момент появления первого звука в плечевой артерии, которое соответствует максимальному артериальному давлению;
б) давление приглушения или исчезновения звуков в артерии, которое соответствует минимальному артериальному давлению.
3. Повторить измерение артериального давления:
а) тотчас после 2-минутного бега на месте;
б) через 5 мин отдыха.
4. Записать результаты в тетрадь для практических занятий и объяснить изменения, которые произошли под влиянием физической нагрузки.
Дыхание
Задание 1. Торакометрия
Ход работы. 1. Измерить окружность грудной клетки сантиметровой лентой на высоте вдоха и выдоха:
а) на уровне подмышечных впадин;
б) на уровне мечевидного отростка.
Задание 2. Определение жизненной емкости легких и ее компонентов при помощи спирометра
Жизненную емкость легких и ее компоненты определяют при помощи специального прибора - спирометра.
Водяной спирометр состоит из двух цилиндров: наружного и внутреннего. Наружный заполняют водой до метки "уровень воды" на стекле смотрового окошка. Внутренний погружен в воду вверх дном и уравновешен поплавком. К нему прикреплена шкала с делениями, проградуированная на 7·10-3 м3 (7000 см3). Через резиновый шланг со стеклянным наконечником производят выдох из легких во внутренний цилиндр. Цилиндр заполняется воздухом и поднимается вверх. По шкале против черты "уровень отсчета" читают результаты. После каждого измерения из внутреннего цилиндра выпускают воздух, для чего открывают пробку.
Для работы необходимы: спирометр, спирт, вата.
Ход работы. При помощи спирометра определить величины:
а) жизненной емкости легких (после максимального вдоха сделать максимальный выдох в трубку спирометра);
б) дыхательного воздуха (после спокойного вдоха сделать спокойный выдох в трубку спирометра);
в) резервного объема выдоха (после спокойного вдоха сделать максимальный выдох в спирометр, из показания шкалы вычесть величину дыхательного воздуха);
г) резервного объема вдоха (из величины жизненной емкости легких вычесть сумму дыхательного воздуха и резервного объема выдоха).
Задание 3. Определение частоты дыхания в покое, во время работы и после ее окончания
Методом пнеймографии пользуются в эксперименте и клинике для изучения состояния дыхательной системы. Обычно в качестве пнеймографа используют манжету от аппарата Рива-Роччи. Манжету с помощью тесемок фиксируют на грудной клетке обследуемого, затем нагнетают в нее воздух и соединяют через резиновую трубку с капсулой Марея, которая имеет писчик. При каждом вдохе за счет расширения грудной клетки давление внутри этой системы повышается и писчик соответственно поднимается вверх. В фазу выдоха давление внутри манжеты и капсулы Марея понижается, а писчик опускается вниз. В результате на поверхности барабана кимографа регистрируется серия волн (зубцов), отражающих дыхательные движения (пнеймограмма). Пнеймограмма позволяет установить частоту дыхания, продолжительность фаз вдоха и выдоха, их соотношение, а также глубину дыхательных движений. По характеру пнеймограммы экспериментатор может судить о состоянии дыхательного центра.
Для работы необходимы: пнеймограф (или манжета от аппарата Рива-Роччи), капсула Марея с писчиком, кимограф, секундомер.
Ход работы. Укрепить пнеймограф на груди обследуемого и записать дыхательные движения при следующих условиях:
а) в состоянии покоя - сидя;
б) тотчас после физической нагрузки (бег на месте в течение 1 мин);
в) через 300 с (5 мин) после физической нагрузки;
г) после задержки дыхания.
Пищеварение
Задание 1. Получение слюны у человека
Для работы необходимы: капсула Лешли-Красногорского, тонкие резиновые трубочки, зажим, шприц, градуированные пробирки, стеклянные стаканы.
Ход работы. 1. Приложить внутреннюю камеру капсулы Лешли-Красногорского к сосочку выводного протока околоушной слюнной железы (на уровне 2 верхнего большого коренного зуба).
2. Тонкие резиновые трубочки, соединенные с камерами капсулы, при сомкнутых челюстях вывести наружу через угол рта.
3. Отсосать через резиновую трубочку при помощи шприца воздух из наружной желобовидной камеры капсулы и зажать трубку зажимом.
4. Конец другой резиновой трубочки, соединенный с внутренней капсулой камеры, поместить в градуированную пробирку и собирать слюну в течение 5 мин.
5. На протяжении 5 мин собирать слюну во время дачи обследуемому кусочка лимона, печенья, 1·10-2 л (10 мл) воды.
6. На протяжении 5 мин собирать слюну у обследуемого при разговоре о вкусной, любимой им пище.
7. Измерить в каждом случае количество выделившейся слюны,
Задание 2. Расщепление крахмала слюной
Исследование влияния фермента слюны - амилазы - на переваривание крахмала.
Для работы необходимы: 1% раствор крахмала, реактив Фелинга, раствор Люголя, штатив с пробирками, термостат, горелка, бумажные фильтры, воронка, пипетка на 2·10-3 л (2 мл).
Ход работы. 1. Трижды повторить 2-минутное ополаскивание ротовой полости обследуемого 2·10-2 л (20 мл) дистиллированной водой. Эту жидкость собрать и отфильтровать.
2. Прокипятить 2·10-3 л (2 мл) фильтрата.
3. В три пробирки налить по 2·10-3 л (2 мл) 1% раствора крахмала.
4. В одну из пробирок внести 1·10-3 л (1 мл) прокипяченного фильтрата, во вторую и третью - некипяченного.
5. Поместить все пробирки на 5 мин в термостат при температуре 38°С.
6. Вынуть пробирки из термостата и охладить.
7. Через 10 мин добавить в первую и вторую пробирки по 2 капли раствора Люголя. Отметить появление синего окрашивания в первой пробирке.
8. В третью пробирку внести 2·10-3 л (2 мл) реактива Фелинга, перемешать и нагреть до кипения. Отметить окрашивание жидкости в желтый цвет и выпадение желто-красного осадка.
Задание 3. Обнаружение муцина в слюне
Следует убедиться в том, что в слюне содержится муцин.
Для работы необходимы: 1% раствор уксусной кислоты, штатив с пробирками, пипетки на 2·10-3 л (2 мл).
Ход работы. 1. В две пробирки налить по 2·10-3 л (2 мл) слюны человека.
2. В одну из пробирок добавить 5 капель уксусной кислоты.
3. Отметить в этой пробирке выпадение белого осадка.
4. Сравнить содержимое двух пробирок.
Задание 4. Определение переваривающей силы желудочною сока
Необходимо исследовать действие пепсина на нерастворимый белок фибрин. Определить оптимальные условия для проявления активности пепсина (реакция среды, температура).
Для работы необходимы: фибрин, 10% раствор карбоната натрия, 0,1 N раствор соляной кислоты, 10% раствор едкого натра, 1% раствор сульфата меди, горелка, пробирки в штативе, бумажные фильтры, маленькие воронки, пипетки на 2·10-3 л (2 мл), термостат, стакан со льдом, лакмусовая бумага.
Ход работы. 1. Взять четыре пробирки.
2. В первую пробирку налить 1·10-3 л (1 мл) 0,1 N раствора соляной кислоты, во вторую - 1·10-3 л (1 мл) желудочного сока, в третью - столько же предварительно прокипяченного и охлажденного желудочного сока, в четвертую - 1·10-3 л (1 мл) желудочного сока, но предварительно нейтрализованного по лакмусу 10% раствором карбоната натрия.
3. Во все пробирки внести по небольшому, но равному кусочку фибрина и поместить их в термостат при 37°С на 30 мин.
4. Отфильтровать из каждой пробирки по 5 капель раствора.
5. Проделать с каждым фильтратом биуретовую реакцию (добавить 3 капли 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора сульфата меди и перемешать). При наличии белка наблюдается сине-фиолетовая окраска фильтрата, продукты расщепления белка придают ему красно-фиолетовый цвет.