Методы стерилизации и аппаратура

Классификация питательных сред

Группа питательных сред Жидкие Плотные
Основные (простые)
Простые среды Мясо-пептонный бульон (МПБ) Мясо-пептонный агар (МПА)
Специальные (сложные)
А. Сложные специальные ¨ Сахарный МПБ для стрептококков и др. ¨ Сахарный МПА ¨ 5% кровяной агар и др.
Б. Элективныеилиизбирательные (преимущественно растет определенный вид микроорганизмов, другие не растут или растут плохо) ¨ 1% щелочная пептонная вода для холерного вибриона ¨ 10% желчный бульон для сальмонелл и др. ¨ Желточно-солевой агар (ЖСА) для стафилококков ¨ Свернутая сыворотка для дифтерийной палочки ¨ Кровяной агар с ванкомицином для бактероидов и др.
В. Среды обогащения(всегда жидкие; используются для накопления микробов определенного вида) ¨ Селенитовый бульон для дизентерийной палочки ¨ 10% желчный бульон для сальмонелл и др.     ________
Г. Дифференциально-диагностические (применяются для первичной дифференциации бактерий преимущественно по биохимическим свойствам, а также для идентификации бактерий) ¨ Среды Гисса (“пестрый ряд” для определения сахаролитической активности бактерий) ¨ Среда Эндо ¨ Среда Левина ¨ Среда Плоскирева ¨ Среды Гисса (полужидкие) и др.
Д. Хромогенные (всегда плотные; применяются для дифференциации бактерий по культуральным свойствам)   ________ ¨ «УриселектТМ » и др.
Е. Транспортные (для доставки исследуемого материала в лабораторию) ¨ Среда Стюарта и др. ¨ Среда Стюарта (полужидкая) и др.
Синтетические  
  -------- ¨ Среда Сотона

Культивирование анаэробов (метод Фортнера)

Аэробы Анаэробы

Методы стерилизации и аппаратура

Стерилизуемый материал Метод стерилизации Режим стерилизации
ü Инфекционный материал Автоклавирование 1,5-2 атм., 131оС, 20-25 мин.
ü Среды, не содержащие веществ, разлагающихся при 120оС ü Бактериальные фильтры Автоклавирование 1 атм., 120оС, 20 мин.
ü Среды, не выдерживающие нагревания до 120оС ü Мембранные фильтры Автоклавирование 0,5 атм., 110оС, 15-30 мин.
ü Среды, не выдерживающие нагревания выше 100оС Дробная стерилизация Текучий пар, 60оС, 3 раза по 30-40 мин., через сутки
ü Свернутая сыворотка, яичные среды Аппарат Коха До 65оС 3 раза по 45 мин., через сутки
ü Питательные среды и вещества, разрушающиеся при нагревании Фильтрование через стерильные бактериальные фильтры: фильтры Зейтца, свечи Шамберлана или Беркефельда Фильтрование
ü Колбы, пробирки, чашки Петри, пипетки и прочая стеклянная посуда и инструменты Печь Пастера 165-170оС, 45 мин.
Протокол “ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ” (бактериологический метод исследования) 1 ЭТАП. Посев исследуемого материалана чашки Петри с плотной питательной средой (МПА) методом штриха. Инкубация при 37оС в течение 24 часов. Примечание 1: в том случае, если в исследуемом материале содержится незначительное количество возбудителя (например, в крови), то его предварительно накапливают путем посева материала в жидкую питательную среду (см. среды обогащения), а затем после инкубации (как правило, при 37оС в течение 18-24 часов) производят пересев на плотную среду. Примечание 2: выделение и идентификация чистой культуры анаэробов производится в анаэробных условиях.   2 ЭТАП. Идентификация выделенной чистой культуры(чистых культур)по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам.Для этого проводят: а) макро- и микроскопическое исследование колоний, выросших на плотной питательной среде(культуральные свойства); б) приготовление мазка из половины колонии каждого вида и окраску препарата по Граму (морфологические и тинкториальные свойства); Примечание: микроскопия материала из колоний производится также с целью проверки чистоты культуры. в) пересев оставшейся части колонии на скошенный агар для накопления выделенной чистой культуры. Инкубация при 37оС в течение 24 часов.   Схема описания колоний
  №     Размеры   Форма   Цвет   Поверхность   Края   Консистенция   Структура Морфология; Окраска по Граму   Предполагаемый возбудитель
                 
                 

ЭТАП.

Наши рекомендации